墨蘭新品種‘夢(mèng)之蘭’的組織培養(yǎng)技術(shù)

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摘要：通過對(duì)墨蘭新品種‘夢(mèng)之蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)研究，探討了不同激素濃度對(duì)‘夢(mèng)之蘭的誘導(dǎo)啟動(dòng)、繼代增殖、生根壯苗培養(yǎng)和不同基質(zhì)配比對(duì)移栽成活率的影響，獲得‘夢(mèng)之蘭誘導(dǎo)啟動(dòng)最佳培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1、最佳繼代增殖培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1、最佳生根培養(yǎng)基為1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1、最佳移栽基質(zhì)為松樹皮：珍珠巖=1∶1。

關(guān)鍵詞：墨蘭;夢(mèng)之蘭;組織培養(yǎng)

中圖分類號(hào)：S682.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1004-3020（2019）01-0015-04

Study on Tissue Culture Technology of New Cymbidum sinense Variety ‘MengzhilanZhang Yuejiao

（Fujian Forestry Science and Technology Test CenterNanjing363600）

Abstract： Through the study on the tissue culture technology of the new Cymbidium sinense variety ‘Mengzhilan， We explored the effects of different hormone concentrations on the induction initiation， subculture， rooting and seedling culture and different matrix ratios of ‘Mengzhilan on the survival rate of transplanting. The results showed that the optimal medium for the induction to ‘Mengzhilan was Modified MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1， and the best subculture medium was Modified MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1， the best rooting medium is 1/2 Modified MS+IBA1.0 mg·L-1， The best transplanting substrate is pine bark∶perlite=1∶1.

Key words：Cymbidium sinense; ‘Mengzhilan orchid; tissue culture

墨蘭新品種‘夢(mèng)之蘭（Cymbidium sinense‘Mengzhilan），是蘭科蘭屬植物，由福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心選育，2014年10月通過福建省林木品種審定委員會(huì)審定為良種。其葉片劍形，3～5枚，深綠色，葉質(zhì)厚，光澤佳，葉尖至葉片中下部有金黃色線藝，葉幅寬闊，叢生在橢圓形的假鱗莖上。總狀花序，花莖直立，高出葉面，花朵向上開放，每支具10～20朵或更多的花，花瓣竹葉型，帶金光，有較濃的花香，花期10月至次年3月。蒴果狹橢圓形，長(zhǎng)5～8 cm，寬1～2 cm。喜陰，忌強(qiáng)光，喜溫暖，忌嚴(yán)寒，喜濕，忌燥。夢(mèng)之蘭線藝表現(xiàn)完美，在無開花之時(shí)，葉片疏密有致，氣宇軒昂，臨風(fēng)搖曳，婀娜多姿，整個(gè)體態(tài)優(yōu)雅俊秀，開花時(shí)，各花葶之間剛?cè)峒鎮(zhèn)?，顧盼呼?yīng)，異常端莊素雅，和著沁人心脾的清新香氣，讓人心曠神怡，愛不釋手?！畨?mèng)之蘭因其葉片、花色、花徑、瓣型、花朵數(shù)等方面區(qū)別于普通任何細(xì)葉蘭類，其商品性優(yōu)于目前類似的墨蘭品種。當(dāng)前，‘夢(mèng)之蘭的存圃量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需要，而傳統(tǒng)的分株繁殖系數(shù)小，且速度慢。為此，為滿足蘭農(nóng)對(duì)‘夢(mèng)之蘭種苗的需求，開展‘夢(mèng)之蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)研究具有重要的意義。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)地點(diǎn)

該試驗(yàn)在福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心進(jìn)行。

1.2外植體選擇

選擇長(zhǎng)勢(shì)良好、植株健壯、無病蟲害、個(gè)體表現(xiàn)優(yōu)異的‘夢(mèng)之蘭優(yōu)良單株進(jìn)行組培快繁技術(shù)研究。

1.3培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基均為加入蔗糖20～30 g/L+瓊脂5～6 g/L，光照強(qiáng)度2 000～4 000 lx，培養(yǎng)溫度（25±3）℃，培養(yǎng)室相對(duì)濕度70%～75%，pH值5.1～5.4[1]。

1.4試驗(yàn)方法

（1）誘導(dǎo)培養(yǎng)。以優(yōu)良單株的莖尖為外植體，以改良MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA（0.5、1.0、1.5）和KT（0.2、0.4、0.6），統(tǒng)計(jì)其誘導(dǎo)成活率，研究不同激素濃度對(duì)誘導(dǎo)啟動(dòng)的影響。

（2）繼代增殖培養(yǎng)。繼代增殖培養(yǎng)以改良MS為基本培養(yǎng)基，添加不同激素濃度的6-BA（0.5、1.0、1.5）、KT（0.4、0.6、0.8）和NAA（0.2、0.4、0.6），用L9（34）正交表安排試驗(yàn)[2]，統(tǒng)計(jì)其增殖倍數(shù)和芽苗生長(zhǎng)狀態(tài)，研究不同激素濃度對(duì)繼代增殖培養(yǎng)的影響。

（3）生根壯苗培養(yǎng)。以1/2改良MS為基本培養(yǎng)基，添加不同激素濃度的IBA（0.3、0.5、1.0）和NAA（0.3、0.5、1.0），統(tǒng)計(jì)其生根率，研究不同激素濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響。

（4）栽培基質(zhì)的選擇。待生根苗根長(zhǎng)到1 cm以上時(shí)，轉(zhuǎn)至大棚進(jìn)行煉苗，20 d后進(jìn)行移栽，將不同比例的鵝卵石、松樹皮、珍珠巖和發(fā)酵過的花生殼作為移栽基質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)其成活率，研究不同比例的移栽基質(zhì)對(duì)成活率的影響。

2結(jié)果與分析

2.1外植體的消毒

在外植體選取前，在大棚內(nèi)對(duì)夢(mèng)之蘭優(yōu)良單株進(jìn)行殺菌消毒處理，每5 d一次，重復(fù)三次，同時(shí)控水控肥。然后將優(yōu)良單株帶回實(shí)驗(yàn)室，剔除根葉，保留2 cm長(zhǎng)帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的莖部，用軟毛刷沾洗衣粉水輕輕刷去莖部的塵埃等附著物后，置流水下沖洗1～2 h，瀝干水分放入高壓滅菌過的封口瓶中置超凈工作臺(tái)進(jìn)行消毒處理，首先將外植體切成1 cm見方帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的方塊置封口瓶中;其次，用75%酒精消毒30 s，無菌水沖洗2遍;再次，用0.1%升汞溶液振蕩浸泡3 min，無菌水沖洗3遍;最后，用0.1%升汞溶液靜置浸泡2 min，無菌水沖洗3～5遍后備用[3]。

2.2不同激素濃度對(duì)誘導(dǎo)啟動(dòng)的影響

將消毒后的外植體用無菌濾紙吸干表面水分，同時(shí)切除與消毒劑接觸的表面后，分別接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每瓶接入1個(gè)莖尖，15 d后剔除污染瓶，40 d后統(tǒng)計(jì)誘導(dǎo)率，見表1。

從表1可以看出，3號(hào)試驗(yàn)號(hào)的誘導(dǎo)率最高，平均誘導(dǎo)率可達(dá)68.3%，從試驗(yàn)中也可以看出，3號(hào)試驗(yàn)號(hào)的外植體萌發(fā)啟動(dòng)時(shí)間最早，在接種10 d后開始膨大，漸漸產(chǎn)生愈傷組織，部分開始變綠萌發(fā)芽點(diǎn)。

變異來源自由度SSMSFFa ??處理間54736.44947.2923.55**F0.05=3.11 ??誤差12482.6740.22F0.01=5.06 ??總計(jì)175 219.11通過不同激素濃度對(duì)誘導(dǎo)啟動(dòng)率的方差分析可以看出（見表2），處理間的F值等于23.55，大于F0.01，達(dá)到極顯著性水平，所以不同激素濃度對(duì)誘導(dǎo)啟動(dòng)率有著極顯著的影響，從試驗(yàn)結(jié)果可以得出夢(mèng)之蘭最佳誘導(dǎo)啟動(dòng)培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1，其誘導(dǎo)啟動(dòng)率最高。

2.3不同激素濃度對(duì)繼代增殖培養(yǎng)的影響

外植體誘導(dǎo)成活后經(jīng)過一段時(shí)間的培養(yǎng)，慢慢的長(zhǎng)出不定芽或龍根，待不定芽長(zhǎng)至2 cm以上時(shí)，將其切取轉(zhuǎn)至繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)，50 d后調(diào)查增殖芽數(shù)，見表3。

通過不同激素濃度對(duì)繼代增殖影響的方差分析（見表4），可以看出，6-BA的F值是51.45，大于F0.05小于F0.01，說明激素6-BA的不同濃度水平對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著影響，KT和NAA的F值分別是2.16和7.51，均小于F0.05，說明激素KT和NAA的不同濃度水平對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響不顯著，而這與實(shí)際試驗(yàn)的表現(xiàn)相符。不同激素濃度對(duì)生根壯苗培養(yǎng)的影響

經(jīng)過50 d左右的繼代培養(yǎng)，不定芽苗長(zhǎng)至3 cm以上時(shí)，即可切取轉(zhuǎn)入生根壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。不定芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基一周后，其切口處漸漸膨大并形成根點(diǎn)，20 d后統(tǒng)計(jì)生根率，見表5。

從試驗(yàn)結(jié)果看，在相同的激素濃度下，激素IBA對(duì)夢(mèng)之蘭生根的影響明顯優(yōu)于激素NAA，從激素的濃度水平來看，不定芽在1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1時(shí)，生根率最高，平均每株芽苗生根數(shù)可達(dá)3根以上。

2.5不同比例的基質(zhì)對(duì)移栽成活率的影響

將煉苗后的生根瓶苗取出，用自來水將附著于基部的培養(yǎng)基沖洗干凈，置于0.1～0.5 g·L-1高錳酸鉀溶液中浸泡1～3 min后，再用自來水沖洗干凈，移栽于不同配比的基質(zhì)中，30 d后查看生長(zhǎng)情況，并統(tǒng)計(jì)移栽成活率，見表6。

從表6的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同基質(zhì)配比對(duì)夢(mèng)之蘭組培苗的移栽成活率影響較為明顯，其中松樹皮∶珍珠巖=1∶1的配比移栽成活率最高，可達(dá)92%，根尖白透粗壯，吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)強(qiáng)，葉片濃綠，苗木長(zhǎng)勢(shì)良好。

3結(jié)語

（1）‘夢(mèng)之蘭是由福建省林業(yè)科技試驗(yàn)中心選育的一個(gè)墨蘭新品種，抗性強(qiáng)品質(zhì)好，花期在春節(jié)期間，市場(chǎng)需求大，為獲得大量的種苗滿足市場(chǎng)需求，開展‘夢(mèng)之蘭的組織培養(yǎng)技術(shù)研究勢(shì)在必行。本研究通過對(duì)‘夢(mèng)之蘭外植體誘導(dǎo)、繼代增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽的試驗(yàn)，獲得‘夢(mèng)之蘭誘導(dǎo)啟動(dòng)最佳培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.6 mg·L-1、最佳繼代增殖培養(yǎng)基為改良MS+6-BA1.5 mg·L-1+KT0.4 mg·L-1+NAA0.6 mg·L-1、最佳生根培養(yǎng)基為1/2改良MS+IBA1.0 mg·L-1、最佳移栽基質(zhì)為松樹皮∶珍珠巖=1∶1。

（2）在‘夢(mèng)之蘭的組織培養(yǎng)中，有效無菌培養(yǎng)物的建立是一個(gè)關(guān)鍵要素，在獲取外植體前，一定要對(duì)選取的植株進(jìn)行控水控肥和殺菌消毒處理，這有利于外植體的殺菌消毒和誘導(dǎo)培養(yǎng)的開展。

（3）在‘夢(mèng)之蘭的繼代增殖和生根培養(yǎng)中，添加適量的天然有機(jī)物質(zhì)，如椰子汁、馬鈴薯泥、香蕉泥等，可以有效的促進(jìn)不定芽的增殖、分化和壯苗;在生根培養(yǎng)中添加適量的活性炭，則有利于根系的誘導(dǎo)[4]。

（4）對(duì)‘夢(mèng)之蘭生根苗的移栽過程中，一定要將附著于苗木的培養(yǎng)基清洗干凈后，置于0.1～0.5 g·L-1高錳酸鉀溶液中浸泡1～3 min后再進(jìn)行移植，這有利于提高苗木的移栽成活率。

（5）從培養(yǎng)瓶中移栽的蘭花組培苗，其葉片、根系都較為嫩弱，移栽前，基質(zhì)要做好殺菌消毒，同時(shí)發(fā)酵透，對(duì)松樹皮等基質(zhì)要做到細(xì)碎透氣，這有利于根系的生長(zhǎng)。

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