纈霉威高效液相色譜分析方法試驗

許文愷　翁偉妍　張宏濤

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纈霉威高效液相色譜分析方法試驗

許文愷翁偉妍張宏濤

（廣東中科英?？萍加邢薰?廣東佛山 528000）

文章針對環(huán)境水體中纈霉威，采用高效液相色譜對其進(jìn)行定性定量分析。以0.01%磷酸溶液+乙腈為流動相，使用4.6 mm×150 mm、粒徑為5μm的依利特HypersilODS2色譜柱，以及二極管陣列檢測器（PDA檢測器），在215nm波長下對纈霉威進(jìn)行分離和定量分析。結(jié)果表明：該分析方法的線性相關(guān)系數(shù)為0.9999；標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.224~1.58 %；平均回收率為99.9~106 %。

纈霉威；高效液相色譜；分析

纈霉威中文別名：異丙菌胺、丙森辛、丙森鋅，英文名稱：Iprovalicarb，CAS號：140923 -17 -7，分子式：C18H28N2O3。由拜耳公司最先研發(fā)的一種氨基酸酯類衍生物，具有獨(dú)特的全新仿生結(jié)構(gòu)，其作用機(jī)理不同于其他防治卵菌綱的殺菌劑。作用機(jī)理：作用于真菌細(xì)胞壁與蛋白質(zhì)的合成，從而抑制孢子的侵染和萌發(fā)，同時抑制菌絲體的生長，致其變形、死亡。此外，作為一種具有生物活性的殺菌劑，不僅在霜霉科、疫霉屬真菌導(dǎo)致的病害上有突出的治療及鏟除效果，而且對促進(jìn)植株生長也有良好的作用。

隨著新型農(nóng)藥的發(fā)展和使用，對環(huán)境毒理分析的要求也越來越嚴(yán)格了，特別是對水生生物的影響，除了在試驗周期內(nèi)觀察其生理死亡狀態(tài)，還需要測定其水體中農(nóng)藥的含量。故而需要便捷、高效的分析方法對農(nóng)藥成分進(jìn)行定性定量分析。目前，針對水體中纈霉威的定性定量分析的文獻(xiàn)中，還沒有單獨(dú)使用高效液相色譜進(jìn)行測定，因此有需要介紹此方法，以供檢測參考。

1 試驗部分

1.1 試劑及設(shè)備

1.1.1 試劑和溶液

標(biāo)準(zhǔn)品：纈霉威（標(biāo)準(zhǔn)值：98 %固體粉末，常溫保存）。

供試品：95 %纈霉威原藥（白色固體粉末，常溫貯存）。

溶劑溶液：乙腈（HPLC），乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1），0.01 %磷酸溶液，曝氣自來水。

1.1.2 儀器設(shè)備

Alliancee2695 型高效液相色譜儀。

檢測器：PDA檢測器（二極管陣列檢測器）。

色譜柱：依利特HypersilODS2 （4.6 mm×150 mm），粒徑：5 μm。

1.2 色譜條件

柱溫箱溫度：35.0 ℃，流速：1.000 mL/min，進(jìn)樣量：20.0 μL，檢測波長：215 nm。

流動相：0.01 %磷酸溶液：乙腈，梯度見表1。

表1 　梯度洗脫

1.3 工作溶液設(shè)計及配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線設(shè)計

根據(jù)液相分析方法的預(yù)試驗結(jié)果，將測定纈霉威的線性范圍設(shè)計為：0.0500 mg/L，0.100 mg/L，0.200 mg/L，0.500 mg /L，1.00 mg/L，2.00 mg/L，5.00 mg/L和10.0 mg/L。每個濃度采集3個針。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液

標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液配制：準(zhǔn)確稱取0.01546 g標(biāo)準(zhǔn)品（純度98 %）于10 mL容量瓶中，加入少量乙腈溶解，最后用乙腈定容至標(biāo)線，搖勻得到標(biāo)準(zhǔn)貯備液，其濃度為1.52 ×103mg/L。[濃度C1（mg/L）=標(biāo)準(zhǔn)品實際質(zhì)量(g)×純度×100000 ]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1）配制濃度分別為0.0500 mg/L，0.100 mg/L，0.200 mg/L，0.500 mg /L，1.00 mg/L，2.00 mg/L，5.00 mg/L和10.0 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

1.3.4 供試品試驗溶液

供試品溶液配制：稱0.01012 g供試品于10 mL容量瓶中，準(zhǔn)確記錄實際稱樣量，加入2.00 mL超純水分散后，冷卻至室溫后，用乙腈定容至標(biāo)線，搖勻得到供試品貯備液，其濃度為961 mg/L。取0.1042 mL供試品貯備液于10 mL容量瓶中，用乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1）定容至標(biāo)線，搖勻得到供試品試驗溶液，濃度為10.0 mg/L。[C2（mg/L）=供試品實際質(zhì)量(g)×待測成分含量×100000 ]。

1.4 定性定量及添加回收測定

1.4.1 專屬性試驗

取空白溶劑（乙腈水溶液（V乙腈∶V超純水=1∶1））、標(biāo)準(zhǔn)溶液（10.0mg/L）和供試品試驗溶液（10.0 mg/L）經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后進(jìn)樣測試，各采集1針。

1.4.2 添加回收與重復(fù)性試驗、檢出限試驗、定量限（靈敏度）試驗設(shè)計

曝氣自來水添加回收與重復(fù)性試驗：設(shè)計1個空白對照組和2檔添加濃度。每檔濃度5個重復(fù)，基質(zhì)為曝氣自來水，詳見表2。對空白對照組與2檔試驗濃度組一共11 個前處理后得到的樣品各采集1針。

表2　 添加回收試驗分組及濃度

注：加入體積（mL）=理論添加濃度×基質(zhì)體積/標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，添加量（μg）=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度×加入體積。

前處理：取5.00 mL試驗溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至標(biāo)線，搖勻后過0.22 μm濾膜過濾，上機(jī)待測。

檢出限：用濃度為0.0500 mg/L（線性下限濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜信噪比（S/N）和LOQ水平的平均回收率（AR）計算檢出限LOD。(LOD=0.0500 ×3/S/N/AR)

定量限（在曝氣自來水添加基質(zhì)中）：以添加回收試驗中，待測物在基質(zhì)中濃度的最低水平為定量限。

2 分析結(jié)果

2.1 專屬性

空白溶劑沒有色譜峰出現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)溶液與供試品試驗溶液有相同的色譜峰出現(xiàn)。在供試品試驗溶液的色譜圖中，主峰與最相鄰的雜峰之間的分離度R為4.26。

圖1 　纈霉威專屬性圖譜

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線1

標(biāo)準(zhǔn)曲線1：0.0500 mg/L～1.00 mg/L，Y=3.314 ×104X+1.678 ×102，r=0.9999 。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線2

標(biāo)準(zhǔn)曲線2：0.500 mg/L～10.0 mg/L，Y=3.356 ×104X+1.729 ×102，r=0.9999 。

2.3 添加回收與重復(fù)性（曝氣自來水中添加回收試驗）

添加濃度0.200 mg/L回收率范圍：105 ~109 %，平均回收率：106 %，RSD為1.58 %；

添加濃度19.0 mg/L回收率范圍：99.5 ~100 %，平均回收率：99.9%，RSD為0.224 %。

2.4 檢出限（LOD）

根據(jù)以上高效液相色譜分析方法測得，0.0500 mg/L（線性下限濃度）的標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜信噪比（S/N）為10.3；

根據(jù)公式計算：LOD=0.0500×3/S/N/AR=0.0500×3/10.3/ 106%=0.0137，即該添加回收方法的檢出限（LOD）為0.0137。

2.5 定量限（LOQ）

根據(jù)添加回收試驗得，該前處理方法的定量限（LOQ）為0.200 mg/L。

3 小結(jié)

針對水中纈霉威的測定，該高效液相色譜分析方法，對比氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀、液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀均有更優(yōu)異的檢測優(yōu)勢。首先使用的試劑常見、廉價，前處理操作簡單，分離效果好、測定簡便快速、準(zhǔn)確度高、相關(guān)性良好，分析測定方法的檢出限及定量限符合環(huán)境毒理（水生生物）分析范圍；其次高效液相色譜儀的使用維護(hù)成本較低，普通實驗室均可具備檢測條件，適用性高，可以作為檢測機(jī)構(gòu)以及藥企自檢的參考方法。

[1]土壤和水中農(nóng)藥分析建立和驗證指南.(征求意見稿)?

[2]農(nóng)藥分析手冊[M].化學(xué)工業(yè)出版社,2012.

[3]李振.纈霉威在葡萄和土壤中的液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法及其在葡萄上的安全合理使用準(zhǔn)則研究[D].浙江大學(xué),2010.

[4]姜宜飛,于榮,孫占岳.纈霉威原藥毛細(xì)管氣相色譜分析方法研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理,2013,34(10).

[5]劉壘.纈霉威的合成工藝研究[D].南京師范大學(xué),2014.

10.3969/j.issn.2095-1205.2019.04.31

許文愷(1991- )女，廣東佛山人，助理工程師，主要從事環(huán)境毒理檢測及化學(xué)分析工作；張宏濤(1978- )，男，吉林雙遼人，工程師，研究方向：毒理學(xué)。

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2095-1205(2019)04-55-02