一例仔豬副傷寒病的診療報告

蔣冬福，秦毅斌，周英寧，何 穎，李 斌，梁家幸，盧敬專，段群棚，趙 武

（廣西獸醫(yī)研究所/廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530001）

豬副傷寒即豬沙門氏菌病，其病原沙門氏菌在自然界中廣泛分布，目前發(fā)現(xiàn)其血清型有千余種，對豬危害較大的是豬霍亂沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌和豬傷寒沙門氏菌。豬副傷寒是一種引起斷奶仔豬頑固性下痢、伴有卡他性或干酪性肺炎及慢性纖維素性壞死性腸炎等為特征的傳染病[1-2]。該病如果治療不及時或混合感染其他疾病，死亡率較高，給養(yǎng)豬戶造成較大經(jīng)濟(jì)損失。

2018年9月初，廣西南寧某豬場部分30多日齡保育豬發(fā)生水樣腹瀉和咳嗽并致死亡，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀、剖檢病變初步診斷為豬副傷寒，進(jìn)一步進(jìn)行病原菌分離純化，經(jīng)過形態(tài)觀察、生化試驗(yàn)及16S rRNA基因序列分析，確診為豬沙門氏菌病。

1 發(fā)病經(jīng)過和病變

該豬場總存欄量3 000多頭，存欄母豬350頭，自繁自養(yǎng)。2018年9月初斷奶10多天的保育豬開始陸續(xù)出現(xiàn)發(fā)病，體溫升高至41.5℃，精神沉郁，食欲減退或廢絕，眼結(jié)膜潮紅或有膿性分泌物。初期便秘，后下痢，糞便黃色或灰綠色帶惡臭，伴有血液和壞死的組織。之后仔豬呈頑固性腹瀉，脫水消瘦伴有咳嗽，腹式呼吸。有些仔豬腹部出現(xiàn)暗紅色斑點(diǎn)，皮膚發(fā)紺或出血，有的見濕疹。且病豬發(fā)病數(shù)逐漸增加，死亡數(shù)也不斷增加。采用黃芪多糖和氟苯尼考對患豬進(jìn)行治療，疫情反復(fù)未得到好轉(zhuǎn)。剖檢瀕死病豬5頭，4頭見胸腹腔內(nèi)充滿黃綠色豆腐花樣纖維滲出物（圖1）。腸系膜淋巴結(jié)腫大，切面呈大理石樣。肝臟、腎臟有不同程度的腫大、充血，肺臟腫大瘀血有肉變。脾臟腫大，呈紫紅色，并且在邊緣處出現(xiàn)梗死。盲腸、結(jié)腸腸壁增厚，黏膜上覆蓋一層彌漫性壞死性糠麩樣假膜（圖2），剝開壞死組織可見底部為紅色，邊緣為不規(guī)則的潰瘍面。有的壞死性痂塊脫落形成圓形或者橢圓形潰瘍疤痕，此病變與慢性豬瘟盲腸的紐扣狀潰瘍極為相似。

圖1 病豬胸腹腔充滿纖維素性滲出物

圖2 病豬大腸黏膜上覆蓋彌漫性壞死性糠麩樣假膜

2 實(shí)驗(yàn)室檢測

2.1 細(xì)菌分離和生化鑒定

采集發(fā)病仔豬的肝、脾、腎和腸系膜淋巴結(jié)接種TSA瓊脂培養(yǎng)基，取病豬糞便接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h，均可見中等大小邊緣整齊的半透明光滑菌落。挑取單個菌落經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陰性兩端鈍圓的短桿菌（圖3）。用1%蛋白胨水將細(xì)菌分離培養(yǎng)物洗下，接種糖發(fā)酵管，37℃培養(yǎng)7～10 d，每天記錄生化反應(yīng)結(jié)果。檢測結(jié)果表明，分離菌可發(fā)酵葡萄糖、山梨醇和木糖；硫化氫試驗(yàn)、動力學(xué)試驗(yàn)、枸櫞酸鹽、賴氨酸脫氫酶、MR反應(yīng)均為陽性（+）；硝酸鹽還原、靛基質(zhì)和棉子糖為陰性（-）。生化鑒定結(jié)果符合沙門氏菌的生化特性。

圖3 病豬分離沙門氏菌鏡檢結(jié)果

2.2 病毒性病原PCR檢測

分別采集5頭病豬的脾臟、腎臟、肺臟和淋巴結(jié)進(jìn)行常規(guī)研磨處理后加入PBS液轉(zhuǎn)移到2 mL離心管，12 000 r/min離心5 min，取上清液200 μL進(jìn)行核酸提?。患S便樣品用PBS液制成10%的懸液，12 000 r/min離心5 min，取上清液200 μL進(jìn)行核酸提取。對提取的核酸采用PCR及RT-PCR方法進(jìn)行病毒性病原檢測，操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行，檢測項(xiàng)目有：豬瘟病毒、豬藍(lán)耳病病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬輪狀病毒。RT-PCR檢測結(jié)果：5頭保育豬中有2頭病料的豬藍(lán)耳病病毒為陽性，陽性率為40%。其余檢測的病毒如豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型、豬偽狂犬病病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒和輪狀病毒均為陰性。

2.3 分離沙門氏菌16S rRNA基因測序分析

參照文獻(xiàn)方法[3]，應(yīng)用細(xì)菌16S rRNA通用擴(kuò)增引物對分離的沙門氏菌16S rRNA進(jìn)行擴(kuò)增測序及序列分析。PCR引物序列如下，上游引物P1：5'-AG AGTTTGATCCTGGCTCAG-3'； 下 游 引 物 P2：5'-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3'，引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。PCR擴(kuò)增目的片段長度約為1 500 bp。PCR反應(yīng)體系為50 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃ 4 min；94 ℃ 30 s、55 ℃ 30 s、72 ℃ 90 s，35個循環(huán)；72℃10 min。將分離的沙門氏菌16S rRNA的PCR經(jīng)膠回收后插入到pMD18-T載體進(jìn)行克隆，篩選陽性重組質(zhì)粒進(jìn)行測序，PCR擴(kuò)增條帶及重組質(zhì)粒酶切鑒定見圖4。

圖4 16S rRNA基因重組質(zhì)粒的PCR、酶切鑒定結(jié)果

測序結(jié)果顯示，分離的沙門氏菌16S rRNA基因?yàn)? 424 bp。經(jīng)BLAST比對分析顯示，該菌株與腸內(nèi)沙門氏菌亞門菌種的同源性為100%。

2.4 豬沙門氏菌病的藥敏分析

藥敏紙片購自杭州濱河微生物試劑有限公司。取分離純化的細(xì)菌培養(yǎng)液200 μL與1 mL滅菌鹽水混勻后涂布于TSA瓊脂平皿，等間距放入藥敏紙片，37℃培養(yǎng)24 h后記錄抑菌圈直徑，結(jié)果見表1。根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果推薦發(fā)病豬場采用高敏藥物治療，分別為：恩諾沙星、頭孢噻呋鈉、頭孢曲松鈉、氧氟沙星、乙酰甲喹。

表1 豬沙門氏菌紙片藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 防治措施和體會

3.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

發(fā)病豬場按本實(shí)驗(yàn)室建議，立即將病豬隔離治療，病死豬無害化處理，徹底清掃發(fā)病圈舍內(nèi)的排泄物并對其進(jìn)行發(fā)酵處理，用聚維酮碘、戊二醛溶液、月芐三甲氯銨輪換消毒全部豬舍，保持豬舍通風(fēng)透氣和地面干燥衛(wèi)生，做好飲水的衛(wèi)生消毒。

沙門氏菌廣泛存在于人類和動物群體且會傳染人，屬于條件性致病菌，多發(fā)于管理不到位、飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件差的豬場。做好飼養(yǎng)管理中的每個細(xì)節(jié)，包括合理的飼養(yǎng)密度、溫度適宜、衛(wèi)生舒適的豬舍、適當(dāng)通風(fēng)透氣等，以及實(shí)施批次全進(jìn)全出程序，可有效防控此病。此外，水質(zhì)及水源的衛(wèi)生狀況也要引起足夠重視。例如有些豬場因?yàn)樯罹虿怀鏊?，只能從附近水塘取水。?jīng)取樣檢測發(fā)現(xiàn)部分發(fā)病豬場的飲用水中大腸桿菌和沙門氏菌嚴(yán)重超標(biāo)，在其病死豬中也分離到沙門氏菌。這些發(fā)病豬場按本實(shí)驗(yàn)室建議將飲水經(jīng)過消毒凈化處理后病死豬大幅減少，收效顯著。

3.2 合理藥物治療及疫苗預(yù)防

發(fā)病豬場根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用高敏藥物，在保育豬的飼料中加入100～200 g黃芪多糖原粉和恩諾沙星原粉，連用5 d。病豬用頭孢噻呋鈉肌肉注射，注射量為仔豬每頭5 mL，每日1次，連續(xù)3 d；出現(xiàn)發(fā)熱癥狀的豬加注氨基比林。個別脫水嚴(yán)重的豬，用5%葡萄糖生理鹽水和安鈉咖補(bǔ)充體液和強(qiáng)心。經(jīng)過上述持續(xù)療程用藥治療，1周后無新發(fā)病死亡豬，疫情得以有效控制。病情穩(wěn)定后對未發(fā)病豬全群免疫豬副傷寒弱毒凍干苗。

由于豬沙門氏菌病對各種藥物的敏感程度不同，抗生素可治療細(xì)菌性疫病但不能預(yù)防疾病，且藥物使用不合理往往會形成抗藥性，一旦停藥多會出現(xiàn)病情反復(fù)，單靠抗生素難以長期有效控制，因此合理用藥，結(jié)合做好疫苗免疫、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、減少應(yīng)激等措施使該場取得了長期的防控效果。