不同碳氮源對紫丁香蘑菌絲生長的對比研究

崔婉茹，郭普宇，李冰，張洪雨，朱然，范雨婷，薛春梅,2*

(1. 佳木斯大學生命科學學院，黑龍江佳木斯154007；2. 佳木斯大學應用微生物研究所，黑龍江佳木斯154007)

紫丁香蘑[Lepistanuda(Bull.：Fr.)Cooke]，又稱紫晶蘑、裸口蘑，屬傘菌目口蘑科大型食用真菌[1-3]，有香氣，含有豐富的營養(yǎng)價值，具有藥用價值。紫丁香蘑對小鼠艾氏癌和肉瘤、陰性菌、革蘭氏陽性菌具有抑制作用[4-6]。本試驗從不同碳源、氮源培養(yǎng)基對紫丁香蘑母種進行試驗，以得到適合紫丁香蘑菌絲生長的母種培養(yǎng)基，為制備紫丁香蘑原種提供參考同時也為節(jié)約資源奠定了基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

由佳木斯大學生命科學學院微生物實驗室提供試驗中所用的紫丁香蘑母種。

1.2 藥品

白糖、可溶性淀粉、乳糖、麥芽糖、葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、硫酸鎂(MgSO4)、磷酸二氫鉀(KH2PO4)、維生素B1、馬鈴薯。

1.3 方法

1.3.1 菌種活化。配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養(yǎng)基，滅菌后，在母種培養(yǎng)基上接菌種，在恒溫 25℃下暗培養(yǎng)，待紫丁香蘑菌絲長滿后備用。

1.3.2 不同培養(yǎng)基的配制

基礎培養(yǎng)基：維生素B110mg、蛋白胨3g、瓊脂20g、硫酸鎂(MgSO4)1.5g、磷酸二氫鉀(KH2PO4)3g、定容至1000mL。

碳源母種培養(yǎng)基：取6個三角瓶，各裝入100mL基礎培養(yǎng)基，分別向三角瓶內加入麥芽糖、葡萄糖、可溶性淀粉、白糖、蔗糖、乳糖，可得到不同碳源的母種培養(yǎng)基，分別為麥芽糖母種、葡萄糖母種、可溶性淀粉母種、白糖母種、蔗糖母種、乳糖母種培養(yǎng)基。

氮源母種培養(yǎng)基：取6個三角瓶，各裝入100mL基礎培養(yǎng)基，并分別加入酵母膏、硝酸銨、蛋白胨、黃豆粉、硫酸銨、玉米粉，可得到不同氮源的母種培養(yǎng)基，分別為酵母膏母種、硝酸銨母種、蛋白胨母種、黃豆粉母種、硫酸銨母種、玉米粉母種培養(yǎng)基。

1.3.3 培養(yǎng)方法及指標觀察。將已接種好的培養(yǎng)皿倒置放入培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)箱的溫度設定為適合紫丁香蘑生長的溫度25℃。觀察培養(yǎng)皿中紫丁香蘑菌絲的生長狀況，至菌絲長滿培養(yǎng)皿，定期測量不同培養(yǎng)皿中菌絲的長度以及各培養(yǎng)皿中的比較情況，記錄。每天觀察時要將不同培養(yǎng)基中紫丁香蘑的長勢做比較，如果觀察過程中發(fā)現(xiàn)污染，要及時拿出，以免污染其他培養(yǎng)皿。

2 結果與分析

2.1 不同碳源對紫丁香蘑菌絲體生長的相關性

2.1.1 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長狀況。分別培養(yǎng)紫丁香蘑于不同的培養(yǎng)基中,觀察不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌落邊緣整齊度、菌絲的長勢、密度及菌絲顏色等方面，比較其生長狀況，記錄數(shù)據(jù)如表1。在麥芽糖培養(yǎng)基中,紫丁香蘑菌落邊緣整齊、粗壯、菌絲稠密、呈白色、生長狀況較好，其次是在淀粉，葡萄糖培養(yǎng)基中。

表1 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源的培養(yǎng)基中生長情況對比

2.1.2 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長速度。在不同的碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長速度各不相同，生長快慢有差異，如表2。

表2 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源的培養(yǎng)基中生長速度對比

2.1.3 不同碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)時間及滿皿時間。在不同的碳源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)、滿皿時間各具有較大差異，如表3。紫丁香蘑菌絲在乳糖、葡萄糖培養(yǎng)基上的萌發(fā)時間為1d，菌絲在其余4種培養(yǎng)基上的萌發(fā)時間為2d。紫丁香蘑菌絲在乳糖培養(yǎng)基中滿皿時間最長，在蔗糖培養(yǎng)基中時間最短。

表3 紫丁香蘑菌絲在不同的碳源培養(yǎng)基中萌發(fā)時間和滿皿時間

2.2 不同氮源對紫丁香蘑菌絲體生長的相關性

2.2.1 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長狀況。在6種母種培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)紫丁香蘑，觀察紫丁香蘑菌落的疏密程度、菌絲的生長速度、菌絲的邊緣整齊程度等方面，并記錄數(shù)據(jù)，見表4。紫丁香蘑菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中生長較好，在玉米粉、酵母膏培養(yǎng)基中次之。

表4 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中的生長情況對比

2.2.2 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長速度。紫丁香蘑菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中菌絲的長速不相同，相差較多。菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中的生長速度最快為0.487cm/d，在硫酸銨培養(yǎng)基中菌絲的生長速度最慢為0.112 cm/d。如表5。

表5 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中生長速度對比

2.2.3 不同氮源培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的萌發(fā)時間及滿皿時間。紫丁香蘑菌絲在不同氮源培養(yǎng)基中的萌發(fā)時間及滿皿時間均有顯著差異，在黃豆粉培養(yǎng)基上菌絲的萌發(fā)時間為3 d，在其余5種母種培養(yǎng)基上的萌發(fā)時間均為2 d。紫丁香蘑菌絲在黃豆粉培養(yǎng)基中滿皿時間最短，在硫酸銨培養(yǎng)基中滿皿時間最長。如表6。

表6 紫丁香蘑菌絲在不同的氮源培養(yǎng)基中的萌發(fā)時間和滿皿時間

3 討論與結論

紫丁香蘑是一種稀少的、含有豐富的營養(yǎng)價值、重要的藥用價值，用途廣泛，可食用的大型真菌[7]。為了充分開發(fā)紫丁香蘑的應用價值，擴大產(chǎn)量，降低成本，選育出優(yōu)良的菌種滿足人們的生活需求。本試驗從對母種培養(yǎng)基進行碳氮源的篩選，以找到最適紫丁香蘑的生長條件，從而使其優(yōu)良性狀得以表現(xiàn)。進行試驗時，對于選擇合適的氮源應考慮全面，從有機氮源和無機氮源方面下手，設置均衡，從而擴大氮源的選擇范圍，在具體操作時，應多設置幾組重復實驗，以免后期染菌重做。

從試驗結果可知：在不同碳源培養(yǎng)基試驗中，紫丁香蘑菌絲在淀粉、蔗糖、葡萄糖培養(yǎng)基中的生長狀況較好。在氮源和碳源交叉試驗中紫丁香蘑菌種在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上長速最快。在酵母粉-蔗糖-瓊脂、酵母粉-淀粉-瓊脂、酵母粉-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲的生長狀況較好，菌絲呈現(xiàn)出濃密、粗壯、均一的特征，得出紫丁香蘑對酵母粉的利用相對較好。最后，從長勢、生長速度及菌絲均一情況等方面的綜合考慮，我們將適合紫丁香蘑生長的培養(yǎng)基選為黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基。

在不同氮源培養(yǎng)基試驗中，在玉米粉、黃豆粉、酵母膏培養(yǎng)基中紫丁香蘑菌絲長速較快。在氮源和碳源交叉試驗中，紫丁香蘑菌種在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上長速最快。在黃豆粉-蔗糖-瓊脂、酵母粉-淀粉-瓊脂培養(yǎng)基中紫丁香菌絲生長情況較好，菌絲呈現(xiàn)出濃密、粗壯、均一的特征，可得出紫丁香蘑對黃豆粉的利用相對較好。試驗結果中，菌絲在酵母膏-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基上的長速最慢，但菌絲生長狀況較好，其菌絲稠密、可作為菌種保藏的基質。在黃豆粉-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基上紫丁香蘑菌絲長速最快，用于制備栽培種，但能否表現(xiàn)出良好的產(chǎn)量優(yōu)勢,還有待進一步研究。