青白通痹方藥半仿生提取工藝條件優(yōu)選研究*

李 凡，王衛(wèi)鋒，張小麗，張軍茹 ，任得志 ，李 芳△

1.陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)；2.陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)

青白通痹方由青風(fēng)藤、白芍和炙甘草組成，為陜西省中醫(yī)醫(yī)院米烈漢名老中醫(yī)和學(xué)科帶頭人胡筱娟主任醫(yī)師的臨床經(jīng)驗(yàn)方，具有消腫通痹止痛，舒筋活絡(luò)之功效。臨床上主治風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕、痛風(fēng)、骨關(guān)節(jié)病等所致的關(guān)節(jié)腫脹、僵硬、疼痛、屈伸不利。目前該方已被開(kāi)發(fā)成院內(nèi)制劑，效果顯著。為了進(jìn)一步發(fā)揮青白通痹方的臨床功效，對(duì)其進(jìn)行深入研究，我們擬采用半仿生提取(Semi-bionic extraction,SBE)、半仿生-生物酶法提取(Semi-bionic-enzyme extractio,SBEE)、醇提取(Alcohol extraction,AE)三種提取法對(duì)其藥效物質(zhì)進(jìn)行提取研究，并與原水提取工藝進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，從而確定青白通痹方藥效物質(zhì)的最佳提取工藝及參數(shù)。半仿生提取法通過(guò)模擬藥物在胃腸道中的作用過(guò)程，充分發(fā)揮混合物成分的綜合作用特點(diǎn)，并且有利于以單體成分來(lái)控制提取物質(zhì)量，同時(shí)也符合藥物在體內(nèi)代謝、發(fā)揮藥效的過(guò)程。尤其是對(duì)于作用物質(zhì)基礎(chǔ)不明確而又療效確切的藥物，半仿生提取法更能確切反應(yīng)藥物真正的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本文參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-7]，對(duì)青白通痹方藥用SBE的工藝條件進(jìn)行優(yōu)選，為進(jìn)一步的研究奠定基礎(chǔ)。

材料與方法

1 材 料

1.1 儀器：Waters Acquity H-CLASS型超高效液相色譜儀(UPLC)(EmpowerTM3色譜工作站、PDA檢測(cè)器)；ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)；電子分析天平(型號(hào)：BT25S，d=0.01 mg；BS210S，d=0.1 mg，北京賽多利斯天平有限公司)、DELIS超聲波清洗機(jī)(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)、四孔水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司)、WS70-1型紅外快速干燥箱(上海市吳淞五金廠制造)、101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)、HCTP11B10托盤(pán)藥物天平(北京市宣武區(qū)天平廠)。SartoriusPB-10型精密pH計(jì)(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)、TGL18型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司)、U-2910 型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(HITACHI)、血清超濾器(上海德宏生物醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司)。

1.2 試藥：青風(fēng)藤為防己科植物和毛青藤 Sinomenium acutum(Thunb.)Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils .的干燥藤莖；白芍為毛莨科植物芍藥Paeonia lactiflora PalL.的干燥根；炙甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根莖的炮制加工品，以上藥材經(jīng)陜西省中醫(yī)藥研究院王衛(wèi)鋒主任藥師鑒定后應(yīng)用于本實(shí)驗(yàn)。青藤堿對(duì)照品(批號(hào)：110774-200507)，芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201539)，甘草次酸對(duì)照品(批號(hào)：110723-201514)，以上對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定院。液相用甲醇、乙腈試劑均為HPLC級(jí)(瑞典歐普森)；其它試劑均為AR級(jí)(天津市富宇精細(xì)化工有限公司)。

2 研究方法

2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 本次實(shí)驗(yàn)是在飲片規(guī)格、煎煮溫度、用水量、濾過(guò)、濃縮等基本提取條件相同的情況下進(jìn)行，對(duì)第一煎水pH(A)、第二煎水pH(B)、第三煎水pH(C)和煎煮時(shí)間h(D)4個(gè)主要因素各3個(gè)水平進(jìn)行考察，因素及水平見(jiàn)表1。按表2 L9(34)表安排實(shí)驗(yàn)。

表1 因素與水平

表2 L9(34)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表

注：D因素括號(hào)內(nèi)數(shù)字依次為第1,2,3次的提取時(shí)間。

2.2 樣品溶液的制備 將清風(fēng)藤、白芍和炙甘草分別粉碎，過(guò)篩(10～20目之間)，按處方比例稱(chēng)取三者粗粉80 g并混合均勻，按表2中所列的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，常壓下加熱回流提取3次(第1次加水量為10倍、第2次加水量8倍、第3次加水量8倍)，用4層紗布加100目藥篩過(guò)濾實(shí)驗(yàn)的提取液，合并3次提取的濾液，分別定容至2000 ml，即得青白痛痹方藥半仿生提取的正交實(shí)驗(yàn)樣品液。

2.3 供試溶液的制備

2.3.1 供試液A的制備：分別精密吸取2.2項(xiàng)下青白痛痹方藥半仿生提取的正交實(shí)驗(yàn)樣品液各100 ml，離心(3500 r/min，20 min)，取上清液各10 ml，加甲醇定容至25 ml，用0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試液A1-9，用于測(cè)定青藤堿和芍藥苷的含量。

2.3.2 供試液B的制備：分別精密吸取2.2項(xiàng)下青白痛痹方藥半仿生提取的正交實(shí)驗(yàn)樣品溶液各100 ml，參考文獻(xiàn)甘草次酸供試液制備方法[8]，最后用甲醇轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中并定容，再用0.22 μm的微孔濾膜濾過(guò)，得到的溶液為正交實(shí)驗(yàn)供試液B1-9。用于測(cè)定甘草次酸的含量。

2.3.3 供試液C的制備：精密吸取2.2項(xiàng)下青白痛痹方藥半仿生提取的正交實(shí)驗(yàn)樣品溶液各15 ml，蒸至近干，加入硅藻土1 g拌勻，烘干，研勻后轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，加甲醇25 ml，稱(chēng)重，超聲提取(250W，40K Hz) 30 min，放冷，補(bǔ)足減失的重量，濾除硅藻土，即得供試液C1-9。用于測(cè)定總生物堿含量。

2.3.4 供試液D的制備：取2.2項(xiàng)下青白痛痹方藥半仿生提取的正交實(shí)驗(yàn)樣品溶液各500 ml，離心，先經(jīng)過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，再經(jīng)由中空纖維膜(截留量為1000Da)濾過(guò)，過(guò)濾至500 ml容量瓶并用蒸餾水定容至刻度，得到供試液D1-9。用于測(cè)定分子量≤1000Da的提取物。

2.4 青藤堿的含量測(cè)定[9-11]

2.4.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(10：90)；檢測(cè)波長(zhǎng)：262 nm；柱溫室溫；流速：0.3 ml/min；進(jìn)樣量4.0μl。

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備：取青藤堿對(duì)照品，精密稱(chēng)定(5.21 mg)，置10 ml容量瓶中，用70%的乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得青藤堿對(duì)照品溶液(0.521 mg/ml)，置于4℃冰箱中保存。

2.4.3 青藤堿線(xiàn)性關(guān)系考察：取2.4.2項(xiàng)下青藤堿對(duì)照品溶液 (0.521 mg/ml)，分別自動(dòng)進(jìn)樣0.4 μl、0.8 μl、1.0 μl、2.0 μl、4.0 μl及8.0 μl，測(cè)定色譜峰面積。以青藤堿對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，即得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。其回歸方程為：Y=1719463.26x-52291.966，R=0.9999。結(jié)果表明，在進(jìn)樣量為0.2084～4.1680 μg范圍內(nèi)，青藤堿線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4.4 精密度試驗(yàn)：取2.4.2項(xiàng)下青藤堿對(duì)照品溶液 (0.521 mg/ml)，色譜條件同2.4.1項(xiàng)下，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，儀器精密度良好(RSD=0.99%)。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取2.3.1項(xiàng)下的供試品溶液A1，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10 h重復(fù)進(jìn)樣6次，青藤堿色譜峰面積的RSD=1.05%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn)：按2.3.1項(xiàng)下方法平行制備正交1號(hào)樣品的供試液，共6份，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，青藤堿平均含量=9.33 mg/g，RSD=0.99%，表明重復(fù)性良好。

2.4.7 加樣回收試驗(yàn)：精密吸2.3.1項(xiàng)下正交1號(hào)樣品上清液5 ml(含青藤堿9.33 mg/g)6份，分別加入青藤堿對(duì)照品溶液 (0.8360 mg/ml)2.2 ml、2.2 ml、2.2 ml、2.2 ml、2.2 ml、2.2 ml，按照2.3.1項(xiàng)下的方法制備供試品液，按照2.4.1項(xiàng)下的條件進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。青藤堿平均加樣回收率為97.89%，RSD=1.52%。

2.4.8 青藤堿的含量測(cè)定：取2.3.1項(xiàng)下供試品溶液A1-9，進(jìn)行進(jìn)樣分析，色譜條件同2.4.1項(xiàng)下，測(cè)定供試品溶液中青藤堿的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.5 芍藥苷的含量測(cè)定[12-14]

2.5.1 色譜條件：色譜柱：ACQUITY C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(12：88)；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；柱溫為室溫；流速：0.3 ml/min；進(jìn)樣量2.0μl。

2.5.2 對(duì)照品溶液的制備：取芍藥苷對(duì)照品，精密稱(chēng)取1.55 mg，加甲醇溶解于25 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.062 mg/ml芍藥苷對(duì)照品溶液。

2.5.3 芍藥苷線(xiàn)性關(guān)系考察：按2.5.1項(xiàng)的色譜條件，取2.5.2項(xiàng)下濃度為0.062 mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣0.5 μl、1.0 μl、2.0 μl、4.0 μl、6.0 μl、8.0 μl。以芍藥苷的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。芍藥苷的回歸方程為：Y=3343254.57x+7878.94，R=1.0。結(jié)果表明，芍藥苷在0.0310～0.4960μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5.4 精密度試驗(yàn)：取2.5.2項(xiàng)下濃度為0.062 mg/ml的芍藥苷對(duì)照品溶液，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，RSD=0.89%，表明所用實(shí)驗(yàn)儀器精密度良好。

2.5.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取2.3.1項(xiàng)下供試品溶液A1，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，RSD=1.48%，供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.6 重復(fù)性試驗(yàn)：按2.3.1項(xiàng)下供試液A的制備方法制備正交1號(hào)樣品的供試液，平行6份，按2.5.1項(xiàng)下色譜條件，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，芍藥苷平均含量=7.25 mg/g，RSD=1.03%，表明重復(fù)性良好。

2.5.7 加樣回收試驗(yàn)：精密吸取已知含量(含芍藥苷7.25 mg/g)的正交1號(hào)樣品上清液5 ml，共6份，分別加入濃度為1.4520 mg/ml的芍藥對(duì)照品溶液1 ml、1 ml、1 ml、1 ml、1 ml、1 ml，按2.3.1項(xiàng)下方法制備供試液，按2.5.1項(xiàng)下液相色譜條件依法測(cè)定含量并計(jì)算加樣回收率。芍藥苷平均加樣回收率為97.35%，RSD=1.06%。

2.5.8 芍藥苷的含量測(cè)定：取2.3.1項(xiàng)下供試品溶液A1-9，按2.5.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣分析，測(cè)定并計(jì)算芍藥苷的含量，見(jiàn)表3。

2.6 甘草次酸的含量測(cè)定

2.6.1 色譜條件 色譜柱：ACQUITY C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸(80：20)；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；柱溫設(shè)為室溫；流速：0.3 ml/min；進(jìn)樣量2.0μl。

2.6.2 對(duì)照品溶液的制備：取甘草次酸對(duì)照品，精密稱(chēng)取10.28 mg，加甲醇使溶解于50 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.2056 mg/ml的甘草次酸對(duì)照品溶液，置于4℃冰箱中保存。

2.6.3 甘草次酸線(xiàn)性關(guān)系考察：在2.6.1項(xiàng)的色譜條件下，取2.6.2項(xiàng)下濃度為0.2056 mg/ml的甘草酸對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣0.4 μl、0.8 μl、1.0 μl、2.0 μl、4.0 μl、8.0 μl，測(cè)定色譜峰面積。以甘草次酸的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。甘草次酸回歸方程為：Y=7332322.3x-108956.6，R=0.9999。結(jié)果表明，甘草次酸在0.0822～1.6448μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.6.4 精密度試驗(yàn)：取2.6.2項(xiàng)下濃度為0.2056 mg/ml的甘草次酸對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，色譜條件同2.6.1項(xiàng)下。記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，RSD=0.83%，儀器精密度良好。

2.6.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取2.3.2項(xiàng)下甘草次酸供試品溶液B1，按2.6.1項(xiàng)下色譜條件分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD。結(jié)果表明，RSD=1.40%，表明用于甘草次酸含量測(cè)定的供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.6 重復(fù)性試驗(yàn)：按2.3.2項(xiàng)下甘草次酸供試液的制備方法，制備正交1號(hào)樣品供試液，平行6份，進(jìn)樣并記錄色譜峰面積及計(jì)算RSD，色譜條件同2.6.1項(xiàng)下，結(jié)果表明，甘草次酸平均含量=0.7047 mg/g，RSD=1.18%，表明重復(fù)性良好。

2.6.7 加樣回收試驗(yàn)：精密吸2.2項(xiàng)下正交1號(hào)樣品液50 ml(含甘草次酸0.7047 mg/g)6份，分別加入甘草次酸對(duì)照品溶液 (1.4220 mg/ml)1 ml、1 ml、1 ml、1 ml、1 ml、1 ml，按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試液，按2.6.1項(xiàng)下液相色譜條件依法測(cè)定含量并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果為甘草次酸平均加樣回收率96.17%，RSD=1.45%。

2.6.8 甘草次酸的含量測(cè)定：取2.3.2項(xiàng)下供試品溶液B1-9，在2.4.1項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定甘草次酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.7 分子量≤1000Da提取物的測(cè)定 取2.3.4項(xiàng)下供試液D1-9各100 ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干，于烘箱中105℃烘至恒重，計(jì)算分子量≤1000Da提取物的得率。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.8 總生物堿的含量測(cè)定

2.8.1 青藤堿對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取青藤堿對(duì)照品5.25 mg，置10 ml量瓶中，加PH7.0的緩沖溶液溶解稀釋至刻度，搖勻，得青藤堿對(duì)照液 (0.5250 mg/ml)。

2.8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制：精密量取青藤堿對(duì)照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 ml，分別置干燥具塞試管中，加PH7.0的緩沖液稀釋至2.0 ml。加入0.007%溴麝香草酚藍(lán)8.0 ml，搖勻，加入三氯甲烷10.0 ml，振搖，靜置2 min至分層。分取三氯甲烷層，用干燥濾紙濾過(guò)，相應(yīng)試劑為空白，在413 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，回歸方程：Y=0.083X+0.1577，r=0.9991，線(xiàn)性范圍為：2.10～7.875 μg/ml。

2.8.3 總生物堿的含量測(cè)定：精密量取2.3.3項(xiàng)下供試液C1-9各0.5 ml，按2.8.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制項(xiàng)下方法，測(cè)定吸光度，計(jì)算總生物堿的量，結(jié)果見(jiàn)表3。

2.9 干浸膏量的測(cè)定 量取2.2項(xiàng)下樣品液各50 ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干，置于105℃烘干至恒重，稱(chēng)量并計(jì)算干浸膏量。見(jiàn)表3。

2.10 多指標(biāo)綜合評(píng)判優(yōu)選SBE法工藝條件 青白痛痹方藥的半仿生提取工藝條件優(yōu)選的評(píng)價(jià)指標(biāo)選取青藤堿、芍藥苷、甘草次酸、分子量≤1000Da提取物、總生物堿和干浸膏量。這6個(gè)指標(biāo)的原始數(shù)據(jù)參考文獻(xiàn)[15]進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，并根據(jù)6個(gè)指標(biāo)在工藝優(yōu)選方法中的主次地位，給予加權(quán)后求和確定綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)Y值。本次實(shí)驗(yàn)的Y=(芍藥苷+青藤堿+甘草次酸)/3×7+(總生物堿+干浸膏+分子量≤1000Da提取物)/3×3，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各指標(biāo)成分含量及標(biāo)準(zhǔn)化處理結(jié)果

注：表中各成分量單位中的“g”是已經(jīng)折算到方中中藥的質(zhì)量；括號(hào)內(nèi)的數(shù)值已經(jīng)經(jīng)過(guò)了標(biāo)準(zhǔn)化處理

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)中收集到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)分析。從表4的試驗(yàn)結(jié)果直觀分析來(lái)看，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的影響因素主次為D>A>C>B。進(jìn)一步對(duì)收據(jù)到的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，由表5的方差分析結(jié)果來(lái)看，影響因素A、C、D均有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異，根據(jù)上述情況來(lái)確定提取工藝條件為A1B2C3D3。即青白痛痹方藥用SBE法提取的工藝條件為：3煎用水的pH依次為2.0、7.0、9.0；本試驗(yàn)對(duì)藥物的提取時(shí)間依次為2.0 h、1.5 h、1.5 h。

2.11 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn):嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)操作方法取中藥飲片粗粉，并按照上述處方比例對(duì)藥物進(jìn)行稱(chēng)取，稱(chēng)量80 g，平行3份，依照優(yōu)選出的工藝條件進(jìn)行提取并制備出樣品溶液以及對(duì)各評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定，平行3份。從實(shí)驗(yàn)得到的數(shù)據(jù)結(jié)果來(lái)看，工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)提取液的綜合評(píng)價(jià)值是接近于其預(yù)測(cè)值的，具體的數(shù)據(jù)情況見(jiàn)表6。

表4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析

討 論

青白痛痹方臨床上主治風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕、痛風(fēng)、骨關(guān)節(jié)病等所致的關(guān)節(jié)腫脹、僵硬、疼痛、屈伸不利。青風(fēng)藤中青藤堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制的藥理活性；白芍中含有的活性成分芍藥苷，具有抗自由基損傷，抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載和抗神經(jīng)毒性等活性，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明其有降低血液黏度、抗血小板聚集、擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抗氧化等多種生物學(xué)效應(yīng)；甘草中甘草次酸具有抗炎及增強(qiáng)免疫、抗氧化、抑菌、腎上腺皮質(zhì)激素樣作用等藥理作用，這些與該方的功能與主治相一致，故選擇這三個(gè)單體成分為提取工藝的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

表6 3批驗(yàn)證性試驗(yàn)結(jié)果

注:括號(hào)內(nèi)為標(biāo)準(zhǔn)化處理后數(shù)值。

中藥中，已知單體活性化合物絕大多數(shù)為小分子物質(zhì)，故本次提取工藝評(píng)價(jià)引入分子量≤1000Da的提取物這個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，能體現(xiàn)中藥整體、綜合、客觀、模糊的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的工藝評(píng)價(jià)采用了多指標(biāo)綜合評(píng)判，為了消除各指標(biāo)的單位和量綱的不同，以及各指標(biāo)變量范圍相差懸殊所造成的影響，對(duì)原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化處理，并根據(jù)各指標(biāo)在工藝選擇中的主次地位，給予不同的加權(quán)系數(shù)，這樣，優(yōu)選出的SBE法工藝條件更科學(xué)、合理。本次實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的青白通痹方藥的半仿生提取的工藝條件為3次提取用水的pH值依次為2.0、7.0、9.0；提取時(shí)間依次為2.0 h、1.50 h、1.50 h。后續(xù)我們?cè)诖嘶A(chǔ)上再優(yōu)選青白通痹方藥半仿生-生物酶法提取(SBEE)、青白通痹方藥醇提取(AE)的工藝條件，以期對(duì)青白通痹方藥藥效物質(zhì)的提取進(jìn)行系統(tǒng)研究。