山東芫荽精油對(duì)小鼠氧化性以及SOD和POD活性的影響

董巖 王麗燕

摘要 [目的]探討不同濃度山東芫荽精油對(duì)小鼠氧化性以及SOD和POD活性的影響，以期為芫荽的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。[方法]以不同濃度的山東芫荽精油喂食小鼠，研究山東芫荽精油對(duì)半乳糖氧化小鼠模型肝臟、心臟、肌肉丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化物酶（POD）活性的影響。[結(jié)果]山東芫荽精油可以緩解半乳糖氧化模型小鼠肝臟和心臟的氧化程度，但對(duì)肌肉MDA含量的影響不大。喂食芫荽精油可以增加小鼠不同組織中SOD活性。在該試驗(yàn)飼喂的芫荽精油量范圍內(nèi)不能很好地提高小鼠肝臟、心臟、肌肉的POD活性。[結(jié)論]山東芫荽精油可以緩解小鼠肝臟和心臟的氧化傷害。

關(guān)鍵詞 山東芫荽精油; 超氧化物歧化酶; ?丙二醛; ?過氧化物酶

中圖分類號(hào) TS201.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

文章編號(hào) 0517-6611（2019）04-0181-03

Abstract [Objective] To explore the effects of Shandong coriander essential oil on the oxidative performance and SOD，POD activities in mice and provide basis for the utilization of Shandong coriander resources.[Method]The effects of Shandong coriander essential oil on malondialdehyde （MDA），superoxide dismutase （SOD） and peroxidase （POD） activities in the liver，heart and muscle of galactoseoxidized mice were studied.[Result] Shandong coriander essential oil could alleviate the oxidative degree of liver and heart in galactoseoxidized mice，but it had little effect on the content of MDA in the muscle.Feeding mice with coriander essential oil could increase SOD activity in different tissues of mice.Feeding mice with oriander essential oil ?could not improve POD activity in the liver，heart and muscle of mice.[Conclusion] Shandong coriander essential oil could alleviate the oxidative damage to the liver and heart of mice.

Key words Shandong coriander essential oil;Malondialdehyde（MDA）;Superoxide dismutase（SOD）;Peroxidase（POD）

芫荽，又稱胡荽、香菜、香荽，是傘形科芫荽屬植物鞠荽（Coriandrum sativum L.）的全草，傘形花，為一、二年生草本植物。芫荽原產(chǎn)地為地中海沿岸和中亞地區(qū)，目前大部分地區(qū)均有種植。目前國內(nèi)外許多科學(xué)家研究了芫荽的成分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芫荽葉中含有大量人體所需的元素，在根中也含有許多揮發(fā)性芳香族化合物（如萜類、不飽和脂肪酸、糠酸等），對(duì)人體的健康有益，另外還含有黃酮、芳樟醇等天然活性成分，它們是芫荽的主要成分。黃酮是植物的次生代謝產(chǎn)物，也是天然的抗氧化劑，不能在人體內(nèi)合成，但廣泛存在于水果、蔬菜和茶葉中。芫荽中的黃酮類化合物主要包括異槲皮素、蘆丁、槲皮毒-3-葡萄糖醛酸苷等。李峰等[1]使用分光光度法測得芫荽籽中總黃酮含量為5.310 mg/g;楊洋等[2]研究發(fā)現(xiàn)芫荽中黃酮類化合物在葉部濃度最高，與其在藜蒺中的分布相一致。

動(dòng)物體內(nèi)正常代謝活動(dòng)后會(huì)產(chǎn)生自由基，包括超氧陰離子自由基、羥自由基、脂氧自由基、二氧化氮和一氧化氮自由基。過量的自由基會(huì)使得細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)發(fā)生氧化作用，從而導(dǎo)致細(xì)胞膜損壞，影響蛋白質(zhì)以及核酸等物質(zhì)的正常功能，并且自由基在體內(nèi)的過度積累會(huì)加速動(dòng)物體的衰老。近年來，抗氧化劑越來越受到人們的關(guān)注，許多研究表明抗氧化劑可以抑制動(dòng)物體內(nèi)過度氧化導(dǎo)致的癌癥和衰老[3-4]。由于植物能產(chǎn)生大量的抗氧化活性物質(zhì)，能夠防止氧化應(yīng)激造成的損傷，因此某些植物成為膳食抗氧化劑的優(yōu)秀來源。

芫荽中含有大量的黃酮類化合物。眾所周知，黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗氧化作用，能夠有效清除體內(nèi)的自由基。Sreelatha等[5]認(rèn)為芫荽提取物對(duì)由四氯化碳引起的大鼠肝臟氧化應(yīng)激反應(yīng)具有明顯的保護(hù)作用，不同劑量的提取物（100和200 mg/kg）可以顯著降低四氯化碳處理后大鼠體內(nèi)血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和巴比妥的水平。Anilakumar等[6]用芫荽籽粉喂食大鼠，研究其對(duì)六氯環(huán)己烷誘導(dǎo)的大鼠肝臟氧化應(yīng)激的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)芫荽籽可減少大鼠體內(nèi)注射六氯環(huán)己烷引起的肝臟中共軛二烯、過氧化氫和丙二醛含量的增加以及肝臟中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和谷胱甘肽還原酶活性的降低。

目前，芫荽的開發(fā)主要集中在芫荽精油的開發(fā)和提取物的功效2個(gè)方面。與提取物相比，芫荽精油具有更顯著的生物活性，芫荽中以芫荽籽的精油產(chǎn)率最高，并且芫荽精油因其抗炎癥和抗氧化功效而受到人們的關(guān)注。

芫荽以及芫荽精油都可作為一種食品添加劑應(yīng)用到食品行業(yè)中。Burdock等[7]曾評(píng)估了芫荽精油的食用安全性，證實(shí)了芫荽精油即使在傳統(tǒng)使用濃度下，即500 mg/（kg·d），既不是光敏劑，也不會(huì)成為有毒藥劑，具有較高的食用安全性。同時(shí)，從人類食用芫荽的漫長歷史來看，即使對(duì)芫荽精油的毒性研究很少，但亦無不良影響的記載，總而言之芫荽的食用安全性還是讓人放心的。

山東省芫荽屬植物資源豐富，但對(duì)其研究、開發(fā)和利用卻不夠深入。筆者在提取山東芫荽精油的基礎(chǔ)上，對(duì)提取的有效成分進(jìn)行抗氧化試驗(yàn)，以期為山東省芫荽的開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

昆明白小鼠，購自山東大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;山東芫荽籽精油，由德州學(xué)院化學(xué)實(shí)驗(yàn)室制備并保存。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥。

選擇出生環(huán)境相同的幼鼠，出生時(shí)間相差不大于3 d。將幼鼠在溫度（22±3）℃、相對(duì)濕度40%～55%的條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)10 d，根據(jù)體重隨機(jī)分為A（空白組）、B（對(duì)照組）、C（精油0.04 ?mL/g）、D（精油0.06 mL/g）、E（精油0.08 mL/g）5組，每組15只。除空白組（A組）外，其余組下午皮下注射D-半乳糖（0.3 mg/g）。

1.2.2 測試樣品的準(zhǔn)備。

給藥30 d后，小鼠禁食、不禁水14 h。小鼠乙醚致死后，迅速開胸取出肝臟、心臟和肌肉組織，除去大血管和結(jié)締組織，用濾紙吸干表面血液。分別取各器官組織，按照質(zhì)量與體積比1∶9加入0.9%的冷生理鹽水，充分研磨制成10%的組織勻漿（反應(yīng)全程在冰上進(jìn)行），4 000 r/ min離心10 ?min，上清液即為酶提取液，置于-70 ℃下保存。

1.3 部分生理指標(biāo)的測定

1.3.1 丙二醛（MDA）含量的測定。

吸取上清液2 mL（對(duì)照組添加2 mL 0.9%生理鹽水），加入2 mL 0.6%TBA溶液，充分混勻，混勻物沸水水浴15 min，迅速冷卻后再離心。取上清液置于450和532 nm波長處測定吸光值。

按照以下計(jì)算公式計(jì)算MDA含量：MDA（μmol/g）=MDA濃度×提取液體積/動(dòng)物組織鮮重。

1.3.2 超氧化物歧化酶（SOD）活性的測定。

測定前在54 mmol/L 甲硫氨酸中分別加入0.1 mmol/L EDTA、2.25 mol/L NBT、60 μmol/L核黃素溶液各2 mL，混勻，此為反應(yīng)混合液。在盛有3 mL反應(yīng)混合液的試管中，加入50 μL粗酶提取液，充分混勻后放在透明試管架上，置于光照培養(yǎng)箱中光照20 min，迅速置于560 nm波長處測定吸光度值。對(duì)照為不加酶液照光管，按照以下公式計(jì)算SOD活性：SOD（U/g）=[（A0-AS）×VT]/（A0×0.5×FW×V1）。其中，A0為照光對(duì)照管光吸收值，AS為樣品光的吸光值，VT為樣液總體積，V1為測定時(shí)樣品液體積，F(xiàn)W為取材的鮮重。

1.3.3 過氧化物酶（POD）活性的測定。

在3 mL反應(yīng)體系中（含2 mL 2%過氧化氫、0.95 mL 0.2%愈創(chuàng)木酚、pH 7.0的PBS溶液50 μL），加入0.1 mL酶粗提取液，在波長470 nm處測定吸光度值。以吸光度值每分鐘變化0.1，作為一個(gè)酶活力單位。按照以下公式計(jì)算POD活性：POD[U/（g·min]=（A3-A1）×VT/（0.01×V1×t×FW）。其中，A3為3 min時(shí)的吸光度值，A1為0 min時(shí)的吸光度值，VT為研磨時(shí)加入的提取液總體積，V1為測定時(shí)所用酶液量，t為最后一次讀數(shù)時(shí)間，即3 min，F(xiàn)W為取材鮮重。

2 結(jié)果與分析

2.1 山東芫荽精油對(duì)小鼠肝臟、心臟以及肌肉MDA含量的影響

正常情況下，動(dòng)物體內(nèi)的自由基生成和消亡處于動(dòng)態(tài)平靜中，當(dāng)平衡失調(diào)時(shí)動(dòng)物體內(nèi)累積的大量自由基會(huì)使機(jī)體產(chǎn)生衰老癥狀。目前，由于機(jī)體衰老引起的肝硬化已成為人類健康的第二大殺手，所以肝臟的氧化態(tài)已成為檢測機(jī)體衰老程度的重要指標(biāo)[8]。丙二醛（MDA）是膜脂過氧化的產(chǎn)物之一，其產(chǎn)生也會(huì)增加膜損傷。因此，產(chǎn)生丙二醛的量可以代表膜脂質(zhì)的過氧化程度，也可以間接反映動(dòng)物和植物組織抗氧化能力的強(qiáng)弱。從圖1可以看出，與對(duì)照組（A組）相比，喂食半乳糖后（B組）小鼠肝臟、心臟的MDA含量明顯升高，分別為對(duì)照組的1.31、1.77和1.14倍;在喂食半乳糖的同時(shí)喂食不同劑量的芫荽精油（C、D、E組），可以使肝臟和心臟組織中的MDA含量降低，肝臟中MDA含量隨著精油喂食量的增高，C、D、E組小鼠肝臟中MDA含量分別為半乳糖模型組（B組）的85.47%、59.28%和73.39%，C、D、E組小鼠心臟中MDA含量分別為半乳糖模型組（B組）的97.28%、98.19%和61.68%，而小鼠肌肉中MDA含量變化不明顯。

2.2 山東芫荽精油對(duì)小鼠肝臟、心臟以及肌肉SOD活性的影響

超氧化物歧化酶（SOD）是廣泛存在于動(dòng)植物、微生物中的一種金屬酶。它可以催化超氧自由基在生物體內(nèi)的歧化反應(yīng)，是體內(nèi)超氧自由基的天然消除劑[9]，從而延緩機(jī)體自我保護(hù)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)中由自由基引起的衰老現(xiàn)象，在生物體的自我保護(hù)系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)中也有非常重要的作用[10]。從圖2可以看出，與對(duì)照組相比，喂食半乳糖后（B組）的小鼠肝臟、心臟、肌肉中SOD活性降低，分別為對(duì)照組的85.53%、84.39%和92.45%。在喂食半乳糖的同時(shí)給小鼠飼喂不同濃度的精油（C、D、E組），可以提高小鼠不同組織的SOD活性，但不同精油濃度對(duì)不同組織SOD活性的影響不同，C、D、E組肝臟、心臟、肌肉中的SOD活性分別達(dá)到最高值，分別為B組的1.17、1.44和1.07倍。

2.3 山東芫荽精油對(duì)小鼠肝臟、心臟以及肌肉POD活性的影響

過氧化物酶（POD）是一類氧化還原酶，它們可以催化許多反應(yīng)。POD的主要功能是水解過氧化氫，過氧化氫是氧化酶催化的氧化還原反應(yīng)中產(chǎn)生的一種細(xì)胞毒性物質(zhì)，從而對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。從圖3可以看出，與對(duì)照組相比，喂食半乳糖后（B組）小鼠肝臟、心臟中POD活性增強(qiáng)，分別為對(duì)照的1.85和1.55倍，但肌肉中的POD活性變化不同，B組小鼠肌肉中POD活性下降，為對(duì)照組的67.22%。飼喂半乳糖的同時(shí)添加不同濃度精油（C、D、E組），小鼠肝臟中的POD活性分別為飼喂半乳糖組的44.25%、80.62%和49.12%，心臟中的POD活性分別為飼喂半乳糖組的51.93%、62.02%和86.60%;C、D、E組小鼠肌肉中的POD活性變化不明顯。

3 討論

芫荽作為一種食藥兼?zhèn)涞闹参?，近年來芫荽的抗氧化功能成為國?nèi)外研究者的研究熱點(diǎn)。陸占國等[11]研究表明，芫荽莖葉芳香精油不僅具有明顯的 NaNO2 清除作用，而且具有清除 DPPH 自由基的能力。戴國彪等[12]研究表明，芫荽籽精油具有較強(qiáng)的清除·OH、還原 Fe3+ 的能力，其總抗氧化效果與相同濃度下常見的人工抗氧化劑 BHT、PG 及維生素 C 接近。Tang 等[13]對(duì)芫荽根莖葉籽各部分的抗氧化作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明芫荽根部的抗氧化性要弱于其他部位，

同時(shí)各部位還具有DNA損傷保護(hù)的作用。芫荽提取物對(duì)

DNA、蛋白質(zhì)生物大分子具有保護(hù)作用[4]，但這些研究主要集中在體外試驗(yàn)。該試驗(yàn)結(jié)果表明，通過飼喂小鼠芫荽精油可以降低肝臟和心臟中MDA中的MDA含量，而對(duì)肌肉中MDA含量的影響不明顯，同時(shí)喂食芫荽精油可以增加小鼠不同組織中SOD的活性。該試驗(yàn)結(jié)果還表明，在該試驗(yàn)飼喂的芫荽精油量范圍內(nèi)不能很好地提高小鼠肝臟、心臟、肌肉中POD活性。

該研究為芫荽的抗氧化性提供了定性和定量的依據(jù)，研究了山東芫荽精油對(duì)小鼠氧化性的影響，為進(jìn)一步的對(duì)芫荽的開發(fā)和利用提供了科學(xué)的依據(jù)。目前的研究擴(kuò)寬了抗氧化活性的評(píng)價(jià)方法，也為今后研制出更多的無毒、天然的抗氧化功能性新食品提供了新思路。

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