XpertMTB/RIF技術(shù)對結(jié)核分枝桿菌的診斷價值

陳波 馬曉波 洪國粦

摘要：目的? 對Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌（MTB）的結(jié)果進(jìn)行分析并評估其價值。方法? 采集2017年10月～2018年10月本院就診疑為結(jié)核分枝桿菌感染的患者共580例，利用Xpert MTB/RIF技術(shù)對其痰液（或體液）標(biāo)本進(jìn)行DNA檢測，同時將標(biāo)本進(jìn)行固體培養(yǎng)及涂片抗酸染色并對檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果? Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測MTB的陽性率為18.97%（110/580），和固體培養(yǎng)法的陽性率18.62%（108/580）相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;和抗酸染色法的陽性率15.00%（87/580）相比則更為敏感，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論? Xpert MTB/RIF檢測技術(shù)和固體培養(yǎng)法不相上下，且由于抗酸染色法，可以用于MTB的快速篩選。

關(guān)鍵詞：Xpert MTB/RIF技術(shù);結(jié)核分枝桿菌;篩選;酸染色法;固體培養(yǎng)法

中圖分類號：R542.2+2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.06.056

文章編號：1006-1959（2019）06-0172-02

Abstract：Objective? To analyze and evaluate the results of Xpert MTB/RIF detection of Mycobacterium tuberculosis （MTB）.Methods? A total of 580 patients with suspected Mycobacterium tuberculosis infection were enrolled in our hospital from October 2017 to October 2018. The sputum （or body fluid） specimens were tested for DNA by Xpert MTB/RIF technique. Solid culture and smear acid-fast staining and comparison of test results.Results? The positive rate of MTB detected by Xpert MTB/RIF technique was 18.97%（110/580）， and the positive rate of solid culture method was 18.62% （108/580），the difference was not statistically significant （P>0.05）; The positive rate of staining was 15.00%（87/580）， which was more sensitive，the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion? Xpert MTB/RIF detection technology is comparable to solid culture method， and can be used for rapid screening of MTB due to acid-fast staining.

Key words：Xpert MTB/RIF technology;Mycobacterium tuberculosis;Screening;Acid staining;Solid culture

結(jié)核?。╰uberculosis）是全球十大死因之一，2017年全球因結(jié)核病死亡例數(shù)為總共為160萬例，是高于艾滋病在內(nèi)的單一傳染病中的頭號殺手。根據(jù)世界衛(wèi)生組織2018年的報告，2017年全球的結(jié)核病潛伏感染人群約為17億，潛伏感染率為23%。全球新發(fā)結(jié)核病患者約1000萬，結(jié)核病發(fā)病率為133/10萬，而中國的新發(fā)患者數(shù)為88.9萬（約占全球的8.9%），估算結(jié)核病發(fā)病率為63/10萬[1-3]。早期診斷和及時治療對防控結(jié)核有重要意義。實(shí)驗(yàn)室檢查是確診結(jié)核病的必要依據(jù)，而目前實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)的痰涂片抗酸檢查法作為篩查方法操作繁瑣，耗時費(fèi)力，且敏感度和特異性也難以滿足臨床的實(shí)際需要[4-6]。因此，臨床急需一種簡易快速，敏感度高，特異性強(qiáng)的新型檢測手段來填補(bǔ)這一需求。隨著分子診斷技術(shù)的發(fā)展，一種新型的全自動基因檢測系統(tǒng)Xpert MTB/RIF系統(tǒng)于2010年開始被WHO推薦用于MTB及多重耐藥結(jié)核菌的快速診斷。本研究將同時采用Xpert MTB/RIF系統(tǒng)、涂片抗酸染色法以及羅氏固體培養(yǎng)法對疑似結(jié)核患者的標(biāo)本進(jìn)行檢測，以評估Xpert MTB/RIF系統(tǒng)對MTB的診斷價值。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2017年10月～2018年10月在廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院及門診就診懷疑為結(jié)核菌感染的疑似患者共580例，其中男性332例，女性248例，留取其痰標(biāo)本、肺泡灌洗液標(biāo)本或者尿液標(biāo)本。

1.2方法? ?所有疑似患者的痰標(biāo)本、肺泡灌洗液標(biāo)本及尿液標(biāo)本都同時采用萋-尼氏抗酸染色法（試劑購于珠海貝索生物技術(shù)有限公司），固體培養(yǎng)法（試劑購于珠海貝索生物技術(shù)有限公司）和Xpert MTB/RIF系統(tǒng)（美國Cepheid公司）進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的檢測。①萋-尼氏抗酸染色法：參考《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》對標(biāo)本進(jìn)行涂片制備、染色及鏡檢，檢出1條及以上分枝桿菌即為涂片陽性[1]。②固體培養(yǎng)法：參考《分枝桿菌分離培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊》將中和離心后的標(biāo)本混懸液接種于固體培養(yǎng)基并放在孵箱中培養(yǎng)[2]。在第3、7天觀察培養(yǎng)基中菌落的生長狀況，之后每周觀察1次，至少連續(xù)30 d以上未有分枝桿菌生長方可報陰性。③Xpert檢測法：標(biāo)本和前處理液按1：2的比例混勻后靜置15 min以上，待標(biāo)本中沒有明顯細(xì)顆粒存在即可用專用吸管吸取2 ml處理后的樣品液加入到反應(yīng)盒中。將反應(yīng)盒放入Xpert檢測系統(tǒng)中完成樣品DNA的自動提取、擴(kuò)增及檢測，以檢出目標(biāo)序列為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析? 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用百分比（%）來表示，組間比較采用配對四格表？字2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Xpert MTB/RIF技術(shù)與固體培養(yǎng)法陽性結(jié)果比較? 疑似患者共580例，固體培養(yǎng)法檢出陽性標(biāo)本108例，陽性率為18.62%;Xpert MTB/RIF系統(tǒng)檢出陽性標(biāo)本110例，陽性率為18.97%。Kappa檢驗(yàn)提示兩種方法診斷結(jié)果一致性良好（Kappa=0.932），McNemer檢驗(yàn)的結(jié)果表明兩者的差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.774），見表1。

2.2 Xpert MTB/RIF技術(shù)與抗酸染色法陽性結(jié)果比較? 疑似患者共580例，Xpert MTB/RIF系統(tǒng)檢出陽性標(biāo)本110例，陽性率為18.97%;抗酸染色法檢出陽性標(biāo)本87例，陽性率為15.00%。Kappa檢驗(yàn)提示兩種方法診斷結(jié)果一致性較好（Kappa=0.848），McNemer檢驗(yàn)的結(jié)果提示兩種方法診斷結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

3討論

結(jié)核病是一種在世界范圍內(nèi)廣泛分布的常見傳染病，在中國其發(fā)病率約為63/10萬，因此對其防控不容忽視。傳統(tǒng)的涂片抗酸染色法步驟較為繁瑣，耗時較長，對制片質(zhì)量及染色的效果均有嚴(yán)格的要求[1，7]。而且鏡檢需要有經(jīng)驗(yàn)的工作人員進(jìn)行檢測，對鏡檢人員數(shù)量及單日閱片量亦有要求。而對于含菌量較少的痰液或者體液標(biāo)本采用涂片鏡檢法時有可能會出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象。而傳統(tǒng)作為金標(biāo)準(zhǔn)的的培養(yǎng)法則耗時更長，對患者來說容易延誤治療[2，8]。隨著分子診斷技術(shù)的發(fā)展，以實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的Xpert MTB/RIF技術(shù)被應(yīng)用到MTB及其耐藥相關(guān)基因檢測中。該方法兼具耗時少（約2 h），靈敏度高，操作封閉安全等優(yōu)點(diǎn)，而且還能同時檢測常見的結(jié)核桿菌耐藥基因，因此得到了世界衛(wèi)生組織的推薦。劉亞芹及劉婷等人以培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)和Xpert MTB/RIF技術(shù)進(jìn)行比較未發(fā)現(xiàn)兩者的陽性結(jié)果有顯著差異[3，4]。周洪經(jīng)[6]等的研究則認(rèn)為Xpert MTB/RIF技術(shù)檢出MTB的陽性率高于培養(yǎng)法及抗酸染色法。

本文對580例疑似結(jié)核患者同時采用抗酸染色法、固體培養(yǎng)法和Xpert MTB/RIF技術(shù)進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌的檢測，結(jié)果顯示Xpert 技術(shù)檢測MTB的陽性率和固體培養(yǎng)法相比一致性較好，且差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;和抗酸染色法陽性率相比則更為敏感。與鄒遠(yuǎn)嫵及馬秀珍等人的結(jié)論較為一致[9，10]。固體培養(yǎng)法常常被作為結(jié)核桿菌檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于結(jié)核桿菌分裂增殖緩慢，所以其在培養(yǎng)基上要觀察到陽性結(jié)果需要較長的時間，尤其是標(biāo)本含菌量少的情況下其所需要的時間更長，這很難滿足患者及臨床醫(yī)生的診治需要。而抗酸涂片法作為常規(guī)結(jié)核的過篩實(shí)驗(yàn)耗時費(fèi)力，敏感性低，對人員和安全設(shè)備有較高的要求，操作也比較繁瑣，且較低的陽性檢出率也一直困擾著大家。從本次研究的結(jié)論可以看出，Xpert MTB/RIF系統(tǒng)有著和固體培養(yǎng)法不相上下的陽性檢出率，且整個檢測過程快速安全，可作為臨床快速篩查MTB的一種有效手段，為臨床預(yù)防和診治結(jié)核提供有效幫助。

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收稿日期：2018-12-20;修回日期：2018-12-30

編輯/成森