阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯經(jīng)導(dǎo)管動脈化療栓塞治療肝癌

唐可禺，林 潤，姜 云，李 楠，陳 斌，張 弢，楊建勇，黃勇慧

（1.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院放射介入科，廣東廣州510080；2.南京大學(xué)現(xiàn)代工程與應(yīng)用科學(xué)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系，江蘇南京210093）

原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是我國的多發(fā)病和常見?。?］。HCC起病隱匿，多數(shù)患者確診時已處于無治愈性治療指征的進(jìn)展期。經(jīng)導(dǎo)管動脈化療栓塞（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）是進(jìn)展期肝癌的首選治療方法［2］。傳統(tǒng)的TACE（conventional TACE，cTACE）采用碘化油作為藥物載體和栓塞材料，在阻斷腫瘤血供的同時在腫瘤區(qū)域釋放化療藥物使腫瘤壞死［3］。然而碘化油與含化療藥物水溶液形成的乳化液不穩(wěn)定，混合后快速分離，化療藥物在TACE后迅速釋出，導(dǎo)致其在腫瘤內(nèi)的濃度降低，進(jìn)入體循環(huán)增多，進(jìn)而造成腫瘤細(xì)胞壞死不徹底、全身副作用大［4］，研究新型的藥物載體已經(jīng)成為迫切的臨床需求。近年來，氧化石墨烯（graphene oxide，GO）是生物醫(yī)學(xué)工程等領(lǐng)域的研究熱點。GO的巨大載藥潛力一方面來自其較高的比表面積，另一方面得益于它表面上大量的羥基、羧基等功能基團(tuán)［5］。然而GO表面含有大量親水基團(tuán)，因此無法與碘油混合形成穩(wěn)定的分散系［6］。為了使GO能穩(wěn)定分散于碘油中，本課題組用化學(xué)方法在GO片層上引入了直鏈烷基，獲得了直鏈烷基修飾的氧化石墨烯（linear alkyl grafted graphene oxide，GO-C18），顯著提高了GO的疏水性能，通過與GO片層之間的π-π堆積作用負(fù)載化療藥物，如阿霉素（doxorubicin，DOX），從而使親水的藥物可以均勻分散在疏水介質(zhì)［7］。GO的生物安全性以及作為藥物載體的可行性已經(jīng)有較多研究探討，但是利用碘油混合GO作為藥物載體應(yīng)用于TACE治療的相關(guān)安全性和可行性尚無報道［8］。本研究探究阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯（doxorubicin loaded linear alkyl grafted graphene oxide，DOX@GO-C18）在碘油中的穩(wěn)定性及在TACE中應(yīng)用的可行性。

1 材料與方法

1.1 主要實驗材料

DSA對比劑碘帕醇注射液［典比樂?，c（I）370 mg/mL］、CT對比劑碘普羅胺注射液［優(yōu)維顯?，c（I）370 mg/mL］分別購自 Bracco公司（Milan，Italy）和Bayer公司（Leverkusen，Germany）。石墨烯（KNG-G5，直徑范圍5～20 μm，厚度為1～5層）、十八烷基異氰酸酯［CH3（CH2）17NCO，C18NCO，＞80%］、鹽酸阿霉素（doxorubicin，DOX，＞98%）、4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）分別購自廈門Knano石墨烯技術(shù)有限公司、東京化成工業(yè)株式會社、購于上海阿拉丁試劑公司、Life Technologies（Gaithersburg，MD，USA）。碘化油注射液購于煙臺魯銀藥業(yè)有限公司。戊巴比妥鈉（＞99%）、恩諾沙星（enrofloxacin）購于Merck公司（Darmstadt，Germany）。4 F導(dǎo)管鞘和 2.2 F Carnelian ER微導(dǎo)管分別購上海泰爾茂醫(yī)療產(chǎn)品有限公司和 Tokai Medical Products Inc.（Tokyo，Japan）。

1.2 制備與表征阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯

1.2.1 DOX@GO-C18的制備和表征 方法見課題組前期文章［7］。利用π-π堆積作用將阿霉素（doxorubicin，DOX）負(fù)載于GO-C18獲得阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯（doxorubicin loaded linear alkyl grafted graphene oxide，DOX@GOC18），方法如下。取10 mg GO-C18置于10 mL無水乙醇，用超聲使GO-C18均勻分散。取10 mg DOX溶解于30 mL超純水，然后將GO-C18溶液與DOX溶液混合，震蕩10 min后置于37℃的水浴搖床中，頻率為100 r/min。24 h后，將混合溶液離心5 min，4 000 r/min（r=7.6 cm），并收集底部沉淀物于37℃下真空干燥12 h，獲得DOX@GO-C18，于4℃下保存?zhèn)溆?。采用課題組前期文章類似的方法以傅里葉紅外光譜（Fourier translation infrared spectrum，F(xiàn)T-IR）、X射線衍射譜（X-ray diffraction spectrum，XRD）等方法表征石墨、GO、GO-C18以及DOX@GO-C18［7］。

1.2.2 DOX@GO-C18碘油分散液穩(wěn)定性檢測將100 mg DOX@GO-C18加入20 mL碘油中，經(jīng)超聲破碎儀（Digital Sonifier?450，Danbury，USA）分散，參數(shù)為振幅40%，時長1 min，每次持續(xù)1 s，間隔1 s。取4mL含DOX@GO-C18的碘油（5 mg/mL）置于容器中，加入生理鹽水2 mL，靜置3 d后，觀察DOX@GO-C18的穩(wěn)定性。

1.3 建立兔VX2肝癌模型

動物實驗方案通過中山大學(xué)動物倫理委員會批準(zhǔn)。雄性新西蘭大白兔購自南方醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心，飼養(yǎng)在中山大學(xué)實驗動物中心（北校區(qū)）。VX2細(xì)胞株購于中山大學(xué)實驗動物中心。兔VX2肝癌實驗動物模型的制備方法見課題組前期文章［9］，簡述如下。實驗動物于術(shù)前禁食12 h，術(shù)前予30 mg/kg戊巴比妥鈉靜脈注射麻醉實驗動物，備皮、消毒鋪巾后，取腹部正中切口開腹，暴露肝左葉，用20 mL注射器針頭于肝左葉最厚處穿刺構(gòu)成隧道，將VX2瘤塊（體積約1 mm3）埋入隧道深部，再用明膠海綿片封堵，縫合關(guān)腹，包扎，并予恩諾沙星每千克體質(zhì)量2 mg肌注預(yù)防感染。約2周后肝內(nèi)腫瘤生長至適合介入操作的大小，直徑約15～20 mm，行經(jīng)增強CT掃描（Aquilion One，Toshiba Co，Tokyo，Japan）確定腫瘤情況。增強CT掃描的參數(shù)為：球管電壓80 kV，電流80 mA，螺旋時間0.275 s，像素間隔1 mm及重建層厚0.5 mm。對比劑使用高壓注射器（MEDRAD，USA）經(jīng)耳緣靜脈以流速0.5 mL/s，總量1.5 mL/kg注入。

1.4 TACE治療

術(shù)前CT檢查后3 d內(nèi)在兔VX2肝癌模型上行TACE治療，操作方法見課題組前期文章［9］，簡述如下。實驗動物術(shù)前禁食12 h，以前述方法麻醉瘤兔后，取仰臥位固定，雙側(cè)腹股溝備皮、消毒鋪巾，切開皮膚并分離股動脈，在直視下進(jìn)行穿刺，引入4 F導(dǎo)管鞘、2.2 F微導(dǎo)管，在飛利浦平板血管造影系統(tǒng)（Allura Xper FD20，Philips，the Netherlands）及數(shù)字減影血管造影（digital subtraction angiography，DSA）引導(dǎo)下運用導(dǎo)絲和導(dǎo)管配合選擇性插管至腹腔干并造影，明確腫瘤供血動脈后，超選擇性插管至肝段的腫瘤供血動脈，予DOX@GO-C18碘油分散液（5 mg/mL）約0.4 mL栓塞，至栓塞后造影見腫瘤染色基本消失為止。術(shù)畢拔出導(dǎo)管及導(dǎo)管鞘，結(jié)扎股動脈，逐層縫合切口，包扎，并予恩諾沙星每千克體質(zhì)量2 mg肌注預(yù)防感染。

1.5 安全性以及療效評估

于TACE術(shù)前、術(shù)后1、3、7以及14 d取瘤兔外周靜脈血液樣本，靜置于4℃冰箱內(nèi)8 h后，置于離心機中（Sigma 4K15，Sigma Laborzentrifugen GmbH，Germany），4 200 r/min（r=7.6 cm），溫度4 ℃，離心10 min，取上層血清置于-20℃冰箱內(nèi)保存。將所取的血清置于全自動生化分析儀（AU5800，Beckman Coulter Inc.，USA）測定谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）以及總膽紅素（total bilirubin，TBIL）含量。試劑為儀器配套。然后對瘤兔行行增強CT掃描以明確療效，掃描參數(shù)如前所述。在治療前后的CT圖像上，測量腫瘤的橫斷面最大直徑，用RECIST1.1標(biāo)準(zhǔn)（Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1）評價療效［10］。增強CT掃描后以過量麻醉法處死實驗動物，并分離腫瘤組織，切取腫瘤最大截面，固定在10%多聚甲醛緩沖溶液并包埋在蠟塊中，制成厚度為4 μm切片分別行HE染色、油紅染色及DAPI染色，然后置于顯微鏡（Axio Imager Z1，ZEISS，Germany）下觀察腫瘤壞死程度，GO-C18、碘油以及DOX的分布。

1.6 統(tǒng)計分析

圖像繪制及統(tǒng)計學(xué)分析均在IBM SPSS statistics 22或GraphPad prism 6軟件上進(jìn)行分析，所有數(shù)值均行Kolmogorov-Smirnov正態(tài)分布檢驗，若為正太分布則表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（），否則則表示為 P50（P25～P75）。腫瘤最大直徑采用 paired student-t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。ALT、AST及TBIL采用重復(fù)測量單因素ANOVA或Friedman秩和檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間兩兩比較采用配對t檢驗或秩和檢驗，配對4次，重復(fù)檢驗名義水準(zhǔn)α′=0.05/4=0.012 5，P＜0.012 5為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 DOX@GO-C18的制備和表征

DOX@GO-C18的成功制備由傅里葉紅外光譜（FT-IR）、X射線衍射譜（XRD）等方法證實（圖1A，B）。圖1A為石墨（graphite）、GO、GO-C18和DOX@GO-C18的傅里葉紅外光譜。其中石墨的紅外光譜曲線幾乎是一條直線；以改良Hummers法氧化后的氧化石墨烯（GO），由于片層上引入了羥基、羧基以及環(huán)氧基，其紅外譜圖在3 400 cm-1處有一個典型的O-H伸縮振動吸收峰，在1 716 cm-1和1 055 cm-1處出現(xiàn)了羰基的伸縮振動吸收峰，在1 621 cm-1和1 224 cm-1處分別出現(xiàn)了C-O的伸縮振動吸收峰和搖擺振動吸收峰。經(jīng)疏水性修飾的GO-C18，甲基和亞甲基群的搖擺振動吸收峰分別出現(xiàn)在2 921 cm-1和2 848 cm-1處，這表明長鏈烷基被成功接枝到了GO上。最后，DOX@GO-C18紅外譜圖與GO-C18的不同，也可以說明阿霉素已經(jīng)被成功負(fù)載到GO-C18上。在X射線衍射譜上（圖1B），石墨的衍射峰出現(xiàn)在2θ≈26.4°處，屬于（002）晶面衍射；被氧化成GO后，由于含氧基團(tuán)的引入以及片層的剝離，片層間距變大，衍射峰向左偏移，出現(xiàn)在2θ≈10.4°處，屬于（001）晶面衍射。而對于GO-C18，衍射峰繼續(xù)向左移，出現(xiàn)在2θ≈7.5°處，這表明石墨烯的片層間距進(jìn)一步增加；負(fù)載阿霉素后，衍射峰進(jìn)一步左移至2θ≈5.2°處。分析表明，隨著制備深入，樣品衍射峰不斷向左移動，即石墨烯層間距不斷增大，根據(jù)布拉格方程依次可算得層間距為0.34 nm（石墨）、0.85 nm（GO）、1.18 nm（GO-C18）、1.70 nm（DOX@GOC18）。

DOX@GO-C18分散于碘油（5 mg/mL）中靜置3 d后經(jīng)觀察無明顯聚集沉積等現(xiàn)象（圖1C）。在加入生理鹽水后，靜置3 d，DOX@GO-C18仍能穩(wěn)定分散在碘油相中（圖1C）。

圖1DOX@GO-C18的表征與穩(wěn)定性Fig.1 Characterization and stability of DOX@GO-C18

2.2 兔VX2肝癌模型建立及TACE治療

兔VX2肝癌模型的建立以動態(tài)增強CT掃描確認(rèn)，并選取成功成瘤的5只兔進(jìn)行下一步治療。在CT平掃圖像上，VX2肝癌呈類圓形低密度區(qū)（圖2A）；增強掃描腫瘤呈環(huán)形強化，腫瘤中心為無強化的壞死區(qū)（圖2B）。DSA選擇性腹腔干以及肝動脈造影中，VX2肝癌表現(xiàn)為增粗絮亂的腫瘤血管，周圍血管呈弧形“抱球征”（圖2C）。經(jīng)TACE治療后，DSA造影可見病灶區(qū)域大部血管影消失，腫瘤血供明顯減少（圖2F）。在栓塞周后的CT平掃圖像上，碘油仍沉積在前述環(huán)形強化的血管中，中央?yún)^(qū)域幾乎無碘油沉積（圖2D），增強掃描腫瘤區(qū)域無明顯強化血管影（圖2E）。

2.3 TACE治療療效

根據(jù)RECIST1.1標(biāo)準(zhǔn)，在治療前后的CT影像中選取病灶橫斷面最大直徑進(jìn)行測量和比較。經(jīng)測量，治療前的病灶最大直徑為（2.40±0.33）cm，治療后的病灶最大直徑為（2.43±0.35）cm，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.974，P=0.3746，P ＞ 0.05）。

2.4 TACE術(shù)后的病理學(xué)檢查

在HE染色中，腫瘤組織內(nèi)可見核大畸形、深染的腫瘤細(xì)胞，部分細(xì)胞可見分葉核、多核，核漿比例明顯增大。部分區(qū)域可見片狀無核、均質(zhì)的壞死區(qū)。腫瘤血管內(nèi)（紅色箭頭）及周圍（黃色箭頭）可見DOX@GO-C18沉積（圖3A）。在油紅染色中，腫瘤血管內(nèi)部、血管周圍以及腫瘤組織內(nèi)均可見DOX@GO-C18（紅色箭頭）沉積（圖3B、C）。在DAPI染色的熒光圖片中可以清楚的觀察到TACE術(shù)后DOX（紅色熒光）經(jīng)腫瘤血管進(jìn)入腫瘤組織，在同一位置的油紅染色中可確認(rèn)DOX分布在DOX@GO-C18與碘油所在的腫瘤血管及組織周圍（圖3D-G）。

圖2 治療前后CT圖像及栓塞前后DSA造影圖Fig.2 CT and DSA images before and two weeks after TACE

圖3 TACE術(shù)后腫瘤的HE染色、油紅染色及熒光圖像Fig.3 HE staining，Oil Red O staining and fluorescence images of VX2 tumor after TACE

2.5 TACE前后的血清學(xué)檢測

TACE術(shù)前的ALT、AST及TBIL分別為（41.34±3.33）U/L、21.60（19.55～23.58）U/L以及（2.60±0.19）μmol/L。術(shù)后第1、3、7以及14天ALT分別為（880.70±86.21）、（532.70±82.03）、（171.40±92.21）和（52.88±7.48）U/L。術(shù)前與術(shù)后差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=134.05，P ＜0.0001）；僅術(shù)后第1天（P ＜0.0001；圖4A）及第3天（P ＜0.0001，圖4A）與術(shù)前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第1、3、7以及14天AST分別為 1449（1267～2144）、629.8（538.2～783.6）、231.8（211.0～300.6）和28.00（23.55～37.05）U/L。術(shù)前與術(shù)后差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（Q=19.36，P=0.0010）；僅術(shù)后第1天（P=0.0010；圖4B）與術(shù)前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。而相應(yīng)的TBIL在術(shù)后分別為（2.84±0.43）、（3.61±0.44）、（2.59±0.17）和（2.59±0.08）μmol/L。術(shù)前與術(shù)后差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（F=11.87，P=0.0046）；僅術(shù)后第3日的TBIL與術(shù)前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.078；圖4C）。對于所有的肝功能指標(biāo)，術(shù)前與術(shù)后14 d均無統(tǒng)計學(xué)差異。

圖4 術(shù)后的ALT、AST和TBIL血清濃度Fig.4 Post TACE serum concentrations of ALT,AST,and TBIL

3 討論

TACE是進(jìn)展期肝癌的主要治療方法之一，可有效地延長患者的生存期［11］。TACE一方面阻斷腫瘤血供使其缺血缺氧從而導(dǎo)致壞死和凋亡，另一方面利用載體將化療藥物輸送至腫瘤組織起到局部釋放并殺傷腫瘤細(xì)胞的作用［12］。臨床上傳統(tǒng)TACE術(shù)（conventional TACE，cTACE）通常采用碘化油（lipiodol）作為藥物載體和微循環(huán)臨時性栓塞劑。然而大多數(shù)化療藥物為水溶性，在碘化油中溶解度極低［13］。行TACE術(shù)時需要在使用前將化療藥物溶于水溶液并與碘化油混合形成乳化液［4］。然而一方面此類乳化液穩(wěn)定性不佳，混合后的乳化液會快速分離，化療藥物被迅速釋出，導(dǎo)致化療藥物在腫瘤內(nèi)的濃度降低，進(jìn)入體循環(huán)增多，進(jìn)而造成療效降低、全身副作用增大［14］。另一方面，乳化液內(nèi)部的化療藥物分布不均勻，使化療藥物在腫瘤內(nèi)部的分布亦不均衡，從而造成腫瘤壞死的不均勻［4］。目前臨床新型栓塞載體材料的研發(fā)聚焦于藥物洗脫微球（drug eluting beads，DEB），放射性微球（Y90 radiating microspheres）等。這些新型栓塞載體雖然具有全身副作用較輕、或局部腫瘤壞死率高等優(yōu)勢，但仍然存在治療繁瑣，操作復(fù)雜，無法避免嚴(yán)重并發(fā)癥，生存獲益未能顯著提高等缺陷［15］。因此，進(jìn)一步研發(fā)更加高效安全的TACE載藥栓塞劑十分必要。

近年來，GO及其衍生物因其特殊的物理化學(xué)性質(zhì)在疾病診斷、腫瘤治療、微生物控制等生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域有廣泛研究和應(yīng)用［16］。GO獨特的平面二維結(jié)構(gòu)賦予了其較高的比表面積，而GOV的離域電子使之能通過π-π堆積等作用高效地結(jié)合含芳香環(huán)結(jié)構(gòu)的藥物分子，此外還可根據(jù)應(yīng)用目的，可通過表面修飾使GO具備靶向特異性（targeting）、響應(yīng)釋放（on-demand release）等特殊性質(zhì)，具備多功能載體平臺的能力［17］。堆積然而GO表面含有羧基和羥基等親水性基團(tuán)，在碘油中不能穩(wěn)定分散［7］。因此，課題組考慮通過引入含12或18個碳原子的直鏈烷基來增加GO的疏水性，使GO-C12或GO-C18能夠負(fù)載化療藥物的同時在碘油中保持穩(wěn)定分散。在本課題組的前期研究中［7］，GO，GO-C12在水溶液中迅速沉淀，而經(jīng)直鏈烷基修飾的GO-C12可以長時間穩(wěn)定、均勻地分散在碘油中。在本實驗中，課題組利用GO表面的羥基/羧基與長鏈單異氰酸酯的反應(yīng)，并以π-π堆積將DOX負(fù)載至CO上，成功制備并表征了阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯（doxorubicin loaded linear alkyl grafted graphene oxide，DOX@GO-C18），并研究了DOX@CO-C18在碘油中的穩(wěn)定性。實驗表明：DOX@GO-C18經(jīng)過3 d后仍能在碘油中穩(wěn)定分散。隨后在DOX@GO-C18碘油分散液中加入生理鹽水，靜置3 d后，DOX@GO-C18仍穩(wěn)定分散在碘油中，這一結(jié)果為穩(wěn)定地將化療藥物隨碘油輸送至腫瘤組織中并緩釋奠定了基礎(chǔ)。

兔VX2肝癌實驗動物模型的成功構(gòu)建通過CT掃描、DSA造影以及后續(xù)的病理檢查等證實。本研究應(yīng)用DOX@GO-C18的碘油分散液的有效性及安全性，并以RECIST1.1評價標(biāo)準(zhǔn)評價療效。結(jié)果顯示，TACE治療后腫瘤血供顯著減少，術(shù)后的CT顯示腫瘤周圍的肝實質(zhì)可見少量高密度的碘油分布，病灶中的碘油沉積較為理想，增強掃描未見明顯強化，可一定程度上表明活性腫瘤組織減少。對比治療前后的CT影像，腫瘤最大直徑無明顯變化，病灶治療反應(yīng)為疾病穩(wěn)定（stable disease，SD）。術(shù)后的病理檢測證實了DOX@GOC18與碘油分布在腫瘤的末梢血管以及腫瘤組織中。同時利用DOX自發(fā)熒光的性質(zhì)，在熒光圖像中觀察到在腫瘤的末梢血管以及腫瘤組織中DOX的熒光，碘油、GO-C18、DOX分布的一致性說明DOX@GO-C18能隨同碘油進(jìn)入腫瘤血管及組織間隙及DOX可從從載體上脫落并進(jìn)入腫瘤中。并且腫瘤實質(zhì)中可見均質(zhì)、片狀的壞死區(qū)域，分布在碘油和DOX@GO-C18周圍，證明運用DOX@GO-C18碘油分散液的TACE治療是有效的，可降低腫瘤負(fù)荷，減緩腫瘤生長速率，一定程度上抑制了腫瘤發(fā)展。

GO的生物相容性與劑量有著密切關(guān)系。多項體內(nèi)實驗表明［18］，隨著靜脈注射劑量增加，GO可在體內(nèi)引起一定的毒性反應(yīng)。其主要為肺部的炎癥及水腫，局部形成的膠質(zhì)瘤。在兩項涉及新西蘭兔的研究中［9，19］，靜脈中GO類材料的用量分別2.8及3.125 mg/kg，均未能發(fā)現(xiàn)明顯的生物毒性。在另一項研究中，研究員經(jīng)動脈注射含GO（3 mg/kg）的藥物后，僅在靶器官中發(fā)現(xiàn)GO沉積，血清學(xué)和病理學(xué)檢查均未發(fā)現(xiàn)明顯異常［20］。故我們在實驗中采用了較低的1 mg/kg濃度。

即使在cTACE和DEB-TACE治療中，肝功能損傷也是不可避免的，也是各種TACE技術(shù)改進(jìn)中相關(guān)安全性重點關(guān)注的問題［21］。因此本研究檢測了實驗動物TACE術(shù)前術(shù)后的肝酶學(xué)和總膽紅素的變化，結(jié)果顯示術(shù)后實驗動物出現(xiàn)了肝酶學(xué)和膽紅素的升高，并在2周后基本恢復(fù)正常。另外，術(shù)后觀察實驗動物除一過性食欲下降外，未見出現(xiàn)其他明顯不良反應(yīng)，可見其肝實質(zhì)損傷是有限并可逆的。本實驗結(jié)果與既往在DEB-TACE的動物實驗中的肝功能變化趨勢是類似的［22］，說明在適當(dāng)劑量控制下，GO-C18作為cTACE的藥物載體，其安全性是可以接受的。

綜上所述，本研究制備并表征了阿霉素負(fù)載的直鏈烷基修飾氧化石墨烯（DOX@GO-C18）。并證明了DOX@GO-C18混合碘油作為TACE栓塞材料具有很高的穩(wěn)定性。應(yīng)用DOX@GO-C18對肝癌行TACE治療后，能夠在腫瘤中觀察到DOX@GO-C18與碘油沉積，以及DOX的釋放，治療能顯著減少腫瘤血供并減緩肝臟腫瘤生長。而術(shù)前和術(shù)后的血清學(xué)檢查表明TACE治療后的肝功能損傷是有限并可逆的，同時未發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥。本研究結(jié)果初步證明了以直鏈烷基修飾氧化石墨烯作為化療藥物的載體行TACE術(shù)治療肝癌是安全并有效的，為臨床改進(jìn)TACE治療肝癌療效提供新的方向與思路。