胎盤組織中KiSS-1及Bcl-2表達(dá)與重度子癇前期及圍生結(jié)局關(guān)系

張安紅 徐桂琴 張文琴 孫 博

南京醫(yī)科大學(xué)附屬江寧醫(yī)院(211100)

子癇前期為孕婦常見的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，其發(fā)生機(jī)制尚未明確，可能與多種因素共同作用有關(guān)[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因-1(KISS-1)和B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(bcl-2)與子癇前期的發(fā)生可能相關(guān)。為觀察胎盤組織中KISS-1、bcl-2表達(dá)水平與重度子癇前期及圍生結(jié)局的相關(guān)性，開展了本次研究，為妊娠期高血壓疾病的預(yù)防和治療開辟新思路。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2017年1月-2018年6月本院收治的行剖宮產(chǎn)的重度子癇前期患者60例為觀察組，同期收治的正常晚期妊娠行剖宮產(chǎn)孕婦30例為對(duì)照組。觀察組納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：①符合人民衛(wèi)生出版社《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版中相關(guān)重度子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②妊娠前無(wú)高血壓、腎病病史；③單胎。排除標(biāo)準(zhǔn)[3]：①輕度子癇前期或子癇的患者。②既往有高血壓、腎病病史。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕38～42周；②無(wú)任何合并癥和并發(fā)癥；③胎兒正常發(fā)育；④單胎妊娠。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有不良妊娠史。②有原發(fā)性高血壓、糖尿病、慢性腎炎等疾病病史。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，兩組孕婦均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

1.2.1標(biāo)本收集和處理剖宮產(chǎn)術(shù)中收集胎盤標(biāo)本，選擇兩塊重量3g母體面胎盤組織，剪膜和漂洗，將一塊-80℃收集蛋白和RNA；另一塊胎盤制作成1.5cm×2cm×3cm組織，放入10%中性甲醛溶液8～24h后取出，制作成蠟塊，-20℃中，行RT - PCR、Western blot、免疫組化方法檢測(cè)。

1.2.2陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)KiSS-1:使用0.1M PBS緩沖液代替一抗作為空白對(duì)照，標(biāo)本細(xì)胞漿著色呈黃色，復(fù)染后細(xì)胞核呈藍(lán)色為陽(yáng)性。bcl-2：染色后細(xì)胞漿為淺黃色、棕黃色、棕褐色為陽(yáng)性結(jié)果。

1.2.3研究指標(biāo)比較兩組KiSS-1及Bcl-2在RT-PCR檢測(cè)中與β-actin的相對(duì)吸光度比值，以及KiSS-1及Bcl-2免疫組化的平均光密度和陽(yáng)性率；分析兩組圍產(chǎn)兒結(jié)局，包括新生兒體重，Apgar評(píng)分，胎兒宮內(nèi)窘迫，胎兒宮內(nèi)生長(zhǎng)受限，新生兒窒息，早產(chǎn)兒，低出生體重兒，圍產(chǎn)兒死亡等。使用Pearson統(tǒng)計(jì)方法分析KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與新生兒窒息、新生兒體重、Apgar評(píng)分等圍生結(jié)局關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況

觀察組年齡(27.4±4.5)歲(22～41歲)，孕(1.5±0.3)次(1～4次)，產(chǎn)(0.7±0.2)次(0～2次)。對(duì)照組年齡(27.8±4.7)歲(22～42歲)，孕(1.5±0.3)次(1～4次)，產(chǎn)(0.8±0.2)次(0～2次)。兩組比較未見差異(P>0.05)。

2.2 兩組KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平比較

觀察組KISS-1/β-actin、Bcl-2/β-actin的相對(duì)吸光度均高于對(duì)照組， KiSS-1及Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)率高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組KiSS-1及Bcl-2表達(dá)比較

2.3 兩組孕產(chǎn)結(jié)局比較

觀察組發(fā)生胎兒宮內(nèi)窘迫、宮內(nèi)生長(zhǎng)受限、新生兒窒息、早產(chǎn)兒、低出生體重兒比例高于對(duì)照組(P<0.05)，圍產(chǎn)兒死亡率兩組無(wú)差異(P>0.05)；新生兒體重和Apgar評(píng)分低于對(duì)照組(P=0.000)見表2。

表2 兩組孕產(chǎn)結(jié)局比較

2.4 KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與圍生結(jié)局相關(guān)性

Pearson統(tǒng)計(jì)分析,KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與新生兒窒息、新生兒體重、Apgar評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與圍生結(jié)局相關(guān)性

3 討論

子癇前期的發(fā)生與多種因素有關(guān)[4]，其特征性病理生理變化包括滋養(yǎng)細(xì)胞異常分化造成胎盤淺著床和血管內(nèi)皮損傷，重鑄螺旋動(dòng)脈失敗以及嚴(yán)重的炎性反應(yīng)的發(fā)生，最主要原因被認(rèn)為是胎盤缺陷[5]。子宮基質(zhì)和血管受到滋養(yǎng)層細(xì)胞的滋潤(rùn)，進(jìn)而為胎盤提供養(yǎng)分和血液，使胎盤能夠順利的發(fā)育[6]。目前對(duì)于造成子癇前期發(fā)生滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕水平降低的原因還沒有統(tǒng)一結(jié)論，但是子宮壁能夠被滋養(yǎng)層有效滋養(yǎng)，這個(gè)能力的神奇之處和腫瘤頗為相似。

作為一種新型的抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的基因，KiSS-1不僅能為妊娠期滋養(yǎng)細(xì)胞提供滋養(yǎng)能力和促進(jìn)滋養(yǎng)行為發(fā)生，更是胎盤形成發(fā)育過程中必不可少的一種基因，任何與滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)異常的相關(guān)性疾病都和KiSS-1有關(guān)。Horikoshi等[7]研究表明人類胎盤組織滋養(yǎng)細(xì)胞可使KiSS-1表達(dá)，且在不同妊娠周期和孕周中表達(dá)不同，孕周越大在絨毛組織中表達(dá)越明顯，因此認(rèn)為KiSS-1基因可能參與孕早期滋養(yǎng)細(xì)胞侵潤(rùn)的調(diào)控。Bcl- 2作為一種線粒體膜蛋白，有抑制和調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡作用，能夠?qū)Ω鞣N因子導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡產(chǎn)生抑制作用，增加細(xì)胞的存活時(shí)間，是一種十分關(guān)鍵的調(diào)節(jié)性因子，在很多生理以及病理凋亡中起重要作用。Bcl- 2對(duì)線粒體釋放Cytc有抑制作用，且能夠使誘導(dǎo)因子凋亡，對(duì)Caspase- 3激活與合成起到抑制作用，兩者呈負(fù)相關(guān)性。這種平衡一旦被打破，則滋養(yǎng)細(xì)胞就會(huì)出現(xiàn)過度凋亡，進(jìn)而造成遷移入蛻膜和侵襲子宮肌層螺旋動(dòng)脈減少, 增加子宮胎盤阻力, 造成胎盤和胎兒缺血缺氧，導(dǎo)致血壓升高、蛋白尿等相關(guān)臨床癥狀[8]。

本研究中觀察組KISS-1/β-actin、Bcl-2/β-actin的相對(duì)吸光度及KiSS-1及Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)率均高于對(duì)照組，說明胎盤組織中的KISS-1及Bcl-2表達(dá)水平與重度子癇前期密切相關(guān)，可能參與了重度子癇前期的發(fā)生發(fā)展過程[9-11]。觀察組發(fā)生胎兒宮內(nèi)窘迫、宮內(nèi)生長(zhǎng)受限、新生兒窒息、早產(chǎn)兒、低出生體重兒比例高于對(duì)照組，說明重度子癇前期對(duì)圍生結(jié)局有影響作用,與張君娜等結(jié)果一致[12]。新生兒體重和Apgar評(píng)分低于對(duì)照組，KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與新生兒窒息、新生兒體重、Apgar評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)，說明KiSS-1及Bcl-2的降低可能與不良圍生結(jié)局相關(guān)[13]。

綜上所述，胎盤組織中KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平與重度子癇前期及圍生結(jié)局密切相關(guān)，通過對(duì)KiSS-1及Bcl-2表達(dá)水平的研究能夠?yàn)槿焉锲诟哐獕杭膊〉念A(yù)防和治療開辟新途徑，同時(shí)對(duì)降低孕產(chǎn)婦和圍生兒的病死率有極其重要的意義。