腫瘤壞死因子-α 、白介素-10 及腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白-2在母胎免疫調(diào)節(jié)中作用的研究

賈亦鴻 王麗麗 趙 敏

1.山西省晉中市榆次區(qū)婦幼保健院(030600 )2.山西醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)院;3.山西省婦幼保健院

研究顯示，母胎界面Thl型細(xì)胞/Th2型細(xì)胞(Th1/Th2)的平衡與妊娠結(jié)局關(guān)系密切[1-3]。本研究通過(guò)測(cè)定復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(RSA)婦女和正常妊娠婦女胎盤絨毛組織中腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白-2(TIPE2)的表達(dá)，探討其在母胎免疫調(diào)節(jié)中的作用。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

選擇2017年9月-2018年8月本院收治的RSA稽留流產(chǎn)患者30例為病例組，均經(jīng)詳細(xì)詢問(wèn)病史及系統(tǒng)檢查，排除染色體異常、感染性疾病及內(nèi)分泌、遺傳、 解剖、自身免疫等方面的異常。選擇同期就診要求終止妊娠的33例正常健康早孕婦女作為對(duì)照組，既往無(wú)不良孕史，本次妊娠期間無(wú)腹痛、陰道流血等先兆流產(chǎn)的癥狀和體征，經(jīng)超聲證實(shí)胚胎發(fā)育正常，因故放棄妊娠。兩組均行負(fù)壓吸引術(shù)終止妊娠。本研究通過(guò)山西省婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，標(biāo)本的收集均經(jīng)本人及家屬知情同意并簽字。

1.2 樣本收集和處理

收集兩組負(fù)壓吸引術(shù)后的絨毛組織，經(jīng)無(wú)菌生理鹽水洗滌至表面無(wú)明顯的血跡后，置10%中性甲醛溶液中固定，乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋及切片，貼附于三氨丙基二乙氧甲硅烷( APES)處理的載玻片上，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 檢測(cè)方法

石蠟標(biāo)本4mm連續(xù)切片，經(jīng)65℃烤箱中過(guò)夜，脫蠟，水化，檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，滴加一抗?jié)窈?℃過(guò)夜，PBS沖洗3次，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明及中性樹脂封片，顯微鏡下觀察顯色結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

陽(yáng)性細(xì)胞染色定位于細(xì)胞胞漿，呈棕黃色。采用雙盲法觀察染色強(qiáng)度：不著色為陰性(-)；淡棕黃色及深棕黃色為陽(yáng)性(+) 。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman相關(guān)分析法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

兩組對(duì)象均為單胎，年齡、孕產(chǎn)次及妊娠時(shí)間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組對(duì)象一般情況比較

2.2 絨毛組織中TNF-α、IL-10、TIPE2的表達(dá)

病例組絨毛組織中TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)比率高于對(duì)照組，IL-10、TIPE2的陽(yáng)性表達(dá)比率低于對(duì)照組(增P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 兩組絨毛組織中TNF-α、IL-10、TIPE2表達(dá)比較[例(%)]

2.3 絨毛組織中TIPE2與TNF-α、IL-10相關(guān)性

采用Spearman相關(guān)分析，病例組中TIPE2與TNF-α呈負(fù)相關(guān)(r=-0.725，P<0.05)，與IL-10呈正相關(guān)(r=0.915，P<0.05)。對(duì)照組中TIPE2 與TNF-α、IL-10均無(wú)相關(guān)性(r=0.032，P>0.05；r=0.186，P>0.05)。

3 討論

隨著免疫學(xué)的迅速發(fā)展，RSA的免疫學(xué)病因日益受到重視。正常妊娠中，胚胎的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞具有極強(qiáng)的侵襲能力，能夠通過(guò)水解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜侵入子宮蛻膜，進(jìn)而使胚胎順利植入[4]。當(dāng)母胎界面免疫耐受無(wú)法順利建立、母體免疫應(yīng)答對(duì)胚胎產(chǎn)生排斥時(shí)，多種細(xì)胞因子能夠攻擊胚胎的絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡和損傷[5]。Thl型細(xì)胞分泌TNF-α等，Th2型細(xì)胞則分泌IL-10等，正常情況下，Th1與Th2動(dòng)態(tài)平衡，兩者通過(guò)負(fù)反饋調(diào)節(jié)，相互影響及制約，但Th1型細(xì)胞因子增高不利于妊娠的維持，母體對(duì)胎兒的識(shí)別及妊娠的維持主要是通過(guò)占優(yōu)勢(shì)的Th2型細(xì)胞因子實(shí)現(xiàn)[6]。Wegmann等[7]發(fā)現(xiàn)，正常妊娠是以Th2型細(xì)胞因子為主的生理現(xiàn)象。Rezaei等[8]也發(fā)現(xiàn)RSA組血清中TNF-α水平明顯高于正常早孕組，并認(rèn)為Th1型細(xì)胞因子的表達(dá)水平升高可被看作預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局的指標(biāo)。董瑞英等[9]等研究證實(shí)，RSA患者經(jīng)被動(dòng)或主動(dòng)免疫治療后，Th2型細(xì)胞因子表達(dá)水平明顯提高，Th1型細(xì)胞因子表達(dá)水平下調(diào)，促進(jìn)Th1/Th2平衡向Th2型細(xì)胞因子轉(zhuǎn)換，自然殺傷細(xì)胞(NK)活性下降，誘導(dǎo)免疫耐受，有助于RSA患者妊娠成功。楊華等[10]認(rèn)為 Th1型細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)不利于受精卵著床及胎兒存活。Yuan等[11]研究發(fā)現(xiàn)，RSA患者 Th1/Th2比值顯著增大。趙英等[12]研究結(jié)果顯示，RSA患者外周血Th1/Th2比值向Th1偏移，蛻膜組織中細(xì)胞凋亡加重，進(jìn)而造成RSA。本研究結(jié)果顯示，病例組絨毛組織中TNF-α高于對(duì)照組、IL-10低于對(duì)照組，與以往研究結(jié)果一致，母-胎界面的免疫耐受的關(guān)鍵在于Th1與Th2型因子之間動(dòng)態(tài)平衡，Th1與Th2型細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)平衡被打破，可能導(dǎo)致病理妊娠的發(fā)生。

TIPE2是2002年由孫宏宏等發(fā)現(xiàn)的一種基因[13], 在炎癥和維持免疫穩(wěn)態(tài)方面具有負(fù)調(diào)節(jié)作用。 TIPE2可促進(jìn)M2型巨噬細(xì)胞分化[14]，并在調(diào)節(jié)性Treg細(xì)胞(T細(xì)胞)的免疫抑制功能中發(fā)揮重要作用[15]。因此，通過(guò)促進(jìn)M2巨噬細(xì)胞的分化，TIPE2可能在支持妊娠中發(fā)揮重要作用。 本研究結(jié)果顯示病例組絨毛組織中TNF-α表達(dá)高于對(duì)照組，IL-10及TIPE2的表達(dá)低于對(duì)照組，TIPE2和IL-10呈正相關(guān)，TIPE2和TNF-α之間呈負(fù)相關(guān)，而對(duì)照組絨毛組織中TIPE2與TNF-α、IL-10無(wú)相關(guān)性。TIPE2可能與母胎界面Th1/Th2平衡有關(guān)，從而導(dǎo)致RSA的發(fā)生。