頂空氣相色譜法測(cè)定硫酸莨菪堿原料藥中有機(jī)溶劑殘留量

劉冬梅 ，郭成林 ，官倩倩 ，宋 軍 ，楊慈海

（1.湖北省荊門市食品藥品質(zhì)量檢驗(yàn)所，湖北 荊門 448124； 2.湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，湖北 荊門 448000）

莨菪堿為副交感神經(jīng)抑制劑[1-2]，藥理作用類似阿托品，但水溶性不佳，為滿足制劑需求，將莨菪堿制成硫酸鹽后增加了溶解性但不改變藥理作用。硫酸莨菪堿具有止痛解痙功能，對(duì)坐骨神經(jīng)痛有較好療效，有時(shí)也用于治療癲癇、暈船等。由于其生產(chǎn)過(guò)程中用到乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯4種有機(jī)溶劑，根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0861殘留溶劑測(cè)定法[3]的規(guī)定，二氯甲烷為二類溶劑，限度為0.06%，乙醇、丙酮、乙酸乙酯均屬三類溶劑，限度均為0.50%。本研究中參考2015年版《中國(guó)藥典(四部)》[3]64-65和相關(guān)文獻(xiàn)[4-11]，采用頂空氣相色譜法測(cè)定硫酸莨菪堿中4種有機(jī)溶劑的殘留量，可為藥品生產(chǎn)過(guò)程的質(zhì)量控制提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TRACE1300型氣相色譜儀，TRIPLUS300型自動(dòng)頂空進(jìn)樣器（美國(guó)Thermo Electron公司）；BP211D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）。

1.2 試藥

硫酸莨菪堿（湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為 318-180406，318-170505，318-170502）；二甲基亞砜為色譜純，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 氣相色譜條件

色譜柱：DB-624氣相色譜柱（30 m×0.53 mm ×3.0 μm）；檢測(cè)器：火焰離子化檢測(cè)器，程序升溫（35 ℃保持10min，以35℃ ／min的速率升溫至180℃，保持6min；以40℃ ／min的速率升溫至200℃，保持10 min）；檢測(cè)器溫度：250 ℃；進(jìn)樣器溫度：160 ℃；柱流速： 1.0mL／min；空氣流速：400 mL ／min；氫氣流速：40 mL ／min；氮?dú)饬魉伲?0 mL ／min；分流比：10 ∶1；頂空瓶平衡溫度：100 ℃，平衡時(shí)間 30 min；頂空瓶體積：20 mL；樣品體積：5 mL。頂空定量環(huán)體積：1 mL，加熱箱溫度：100℃，定量環(huán)溫度：110 ℃，傳輸線溫度：200 ℃；進(jìn)樣時(shí)間：0.5 min，循環(huán)時(shí)間：33 min，樣品瓶平衡時(shí)間：30 min，壓力平衡時(shí)間：0.5 min。

2.2 溶液制備

稱取乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯各適量，精密稱定，分置裝有二甲基亞砜的10 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，作為Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ號(hào)母液，各取適量，置同一100 mL容量瓶中，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯質(zhì)量濃度分別為 0.998 0，0.996 6，0.532 8，0.991 8 mg／mL的混合溶液。精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，搖勻；再精密量取10 mL，置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，作為混合對(duì)照品溶液。?、瘢颍?，Ⅳ號(hào)母液各適量，分別置4個(gè)容量瓶中，加二甲基亞砜稀釋，制成乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯質(zhì)量濃度分別為 99.80，99.88，52.80，98.52 μg ／mL 的定位溶液。取樣品約0.2 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加二甲基亞砜5 mL使溶解，作為供試品溶液。以二甲基亞砜作為空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、供試品溶液、定位溶液、空白溶液各適量，按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖(見(jiàn)圖1)。結(jié)果空白溶液在與對(duì)照品溶液色譜圖中相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明專屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密量取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.5，5.0，10.0 mL，各置 50 mL 容量瓶中，加二甲基亞砜定容，量取2 mL，各置50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，即得1～3號(hào)線性溶液；精密量取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液 2，5，10 mL，各置 50 mL容量瓶中，加二甲基亞砜定容，即得4～6號(hào)線性溶液。精密量取1～6號(hào)線性溶液各5 mL，置頂空瓶中，按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X，μg／mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見(jiàn)表1。

檢測(cè)限測(cè)定：分別精密量取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，倍比稀釋，并按2.1項(xiàng)下氣相色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以信噪比(S／N)3∶1計(jì)算檢測(cè)限。結(jié)果見(jiàn)表1。

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯峰面積的 RSD分別為1.1%，1.6% ，0.9% ，0.8%（n ＝ 6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效氣相色譜圖

表1 回歸方程、線性范圍與檢測(cè)限

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量樣品（批號(hào)為318-180406）0.2 g，共 6 份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣，記錄峰面積，并計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 樣品中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

取3批樣品各適量，分別按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按2.1項(xiàng)下條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定3次，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為 318-180406，318-170505，318-170502的樣品中乙醇含量分別為0.025% ，0.014% ，0.018% ，丙酮含量分別為 0.068% ，0.092%，0.053%，其他 2種成分未檢出。

3 討論

3.1 進(jìn)樣方式選擇

硫酸莨菪堿生產(chǎn)過(guò)程中用到的乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯，根據(jù)2015年版《中國(guó)藥典(四部)》通則和人用藥品注冊(cè)技術(shù)規(guī)定國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)規(guī)則，應(yīng)作為控制溶劑[3]105-109。二氯甲烷為二類控制溶劑，采用頂空進(jìn)樣法測(cè)定可避免樣品溶液對(duì)色譜柱的污染及樣品基質(zhì)的干擾，也無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行前處理，進(jìn)樣量大，可提高有機(jī)溶劑殘留量的檢測(cè)力度。

3.2 溶劑選擇

硫酸莨菪堿在二甲基亞砜中易溶，選擇二甲基亞砜有利于殘留溶劑的檢出。開(kāi)始使用分析純二甲基亞砜，結(jié)果乙醇、丙酮有干擾峰存在；后又選擇了色譜純二甲基亞砜，結(jié)果消除了干擾峰。

3.3 分析條件選擇

采用程序升溫，開(kāi)始以25℃ ／min的速率直接升溫到 200 ℃，保持 10 min，柱流速 2.5 mL ／min，結(jié)果乙醇和丙酮峰重疊，分離度達(dá)不到要求；后改為以35℃ ／min的速率升溫至180℃，保持6 min，再以40℃ ／min的速率升溫至 200 ℃，保持 10 min，柱流速 1.0 mL ／min，乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯均能達(dá)到良好分離，重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

綜上所述，該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性、精密度好，可用于硫酸莨菪堿原料藥中有機(jī)溶劑殘留量的控制。參考文獻(xiàn)：

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