不同血小板含量血液在不同靜置時間對濃縮血小板第2次分離回收率影響分析

連曉征 陳玉燕 陳惠民

福建省泉州市中心血站 352000

依據(jù)原國家衛(wèi)生計生委所發(fā)的“關(guān)于2017年全血液安全技術(shù)核查情況通報(國衛(wèi)辦醫(yī)函[2018]346號)”中的提高手工分離血小板利用率的要求，我站從2019年7月1日起開展白膜法分離制備濃縮血小板。為探討不同血小板含量獻(xiàn)血者所獻(xiàn)血液在不同靜置時間該袋血液濃縮血小板第2次分離回收率是否差異有統(tǒng)計學(xué)意義，特別是靜置多長時間其2次分離回收率達(dá)到高值，特對80袋不同血小板含量的300ml血液在不同靜置時間第2次分離血小板回收情況進(jìn)行比較，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》[1]的獻(xiàn)血者所獻(xiàn)全血300ml，只有300ml血液采集流暢性及采集完成時間符合文獻(xiàn)[2]要求才從該袋血液留樣袋中留取血樣2ml于EDTA-K2真空管內(nèi)，用Sysmex1000i全自動血細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行血小板計數(shù)，且血小板計數(shù)≥150×109/L的血液才用于白膜法手工分離制備成濃縮血小板。其中血小板計數(shù)在(150～250)×109/L和(251～350)×109/L的300ml血液各40袋。

1.2 隨機(jī)編號 對血小板計數(shù)在(150～250)×109/L這組40袋血液分別按順序編1、2、3…號，在隨機(jī)數(shù)字表中查得相應(yīng)的數(shù)字(重復(fù)的棄去不計)賦到血袋順序編號，將所得的隨機(jī)數(shù)由小到大編秩排列，將編秩排列號在1～10、11～20、21～30、31～40歸到A、B、C、D四個組，對血小板計數(shù)在(251～350)×109/L這組40袋血液也采取相同方法分成四組。

1.3 儀器與方法 300ml血液采集完成后立即放入電子生物冷鏈運輸箱(上海向成生物科技有限公司XC-XXB35L)(22±2)℃保存不超過6h，將(22±2)℃保存血液用Heraeus6000i離心機(jī)離心15min[1 160g，(22±2)℃]，將離心好的血液安放于Sepamatic-SL(Ⅲ)全自動全血成分血分離機(jī)分離得到約80ml白膜層與血漿混合液，把該混合液輕輕混勻后于無菌接管機(jī)(902880/compodock)留取標(biāo)本約2ml用Sysmex1000i全自動血細(xì)胞計數(shù)儀測量血小板含量。A、B、C、D四個組白膜層與血漿混合液每組10袋存放在離心杯內(nèi)于Heraeus6000i離心機(jī)內(nèi)(22±2)℃分別靜置0、1、2、4h后再第2次離心10min[215g，(22±2)℃]，把離心后的白膜層與血漿混合液安放于Sepamatic-SL(Ⅲ)全自動全血成分血分離機(jī)制備成濃縮血小板約50ml，將濃縮血小板放置在美國Helmer血小板振蕩保存儀內(nèi)保存24h后從交叉血辮內(nèi)留取樣本約1ml進(jìn)行血小板計數(shù)。

1.4 觀察指標(biāo) 濃縮血小板第2次分離回收率=(成品血小板計數(shù)×成品容量)/(白膜層與血漿混合液小板計數(shù)×白膜層與血漿混合液容量)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件包處理數(shù)據(jù)，80袋不同血小板含量的300ml血液在不同靜置時間的第2次分離血小板回收情況進(jìn)行比較用I×J兩因素資料方差分析求F值。

2 結(jié)果

不同血小板含量獻(xiàn)血者所獻(xiàn)血液在不同靜置時間該袋血液血小板第2次分離回收率比較見表1。其I×J因素資料方差分析F值見表2。不同血小板含量獻(xiàn)血者所獻(xiàn)血液在不同靜置時間該袋血液血小板第2次分離回收率升降趨勢見圖1。

表1不同血小板含量血液在不同靜置時間血小板第2次分離回收率比較

表2不同血小板含量血液在不同靜置時間血小板第2次分離回收率比較方差分析

圖1回收率與靜置時間關(guān)系趨勢(h)

3 討論

隨著輸血技術(shù)的發(fā)展，成分輸血的優(yōu)勢越來越被認(rèn)同，一袋血可以分離多種血液成分，既做到最大程度保留各個血液成分的有效性，滿足不同疾病患者的需求，又節(jié)約了寶貴的血源[3]。美國2011年機(jī)采血小板用量比2008年增長了11.9%，但手工血小板的用量與2008年變化不大[4]。為提高手工制備濃縮血小板的血小板含量，有文獻(xiàn)報道隨白膜層儲存時間的延長，血小板對外界刺激的敏感性降低，使本已經(jīng)形成微聚體的血小板充分解聚[5]，因血小板解聚后，其在第2次輕離心時的回收率可能會提高。

通過對血小板計數(shù)為(150～250)×109/L和(251～350)×109/L的300ml血液各40袋，經(jīng)第1次強(qiáng)離心所產(chǎn)生的白膜層與血漿混合液在(22±2)℃分別靜置0、1、2、4h后再進(jìn)行第2次輕離心，對所得到的濃縮血小板第2次分離回收率比較發(fā)現(xiàn)，在不考慮不同靜置時間因素影響情況下，血小板計數(shù)(150～250)×109/L和(251～350)×109/L血液所得到的濃縮血小板第2次分離回收率均值分別為0.77和0.75，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(F=0.59P>0.05)，說明不同血小板含量的獻(xiàn)血者所獻(xiàn)的血液制備濃縮血小板第2次分離回收率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。在不考慮不同血小板含量因素的影響下，靜置時間為0、1、2、4h后再進(jìn)行第2次輕離心，所得到的濃縮血小板第2次分離回收率分別為0.67、0.77、0.80、0.78，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，說明靜置時間對血小板的制備是有影響的。同時通過回收率與靜置時間關(guān)系趨勢圖可以看出，靜置到2h，其回收率值最高為0.80。考慮到血小板的要在(22±2)℃且要振蕩保存，因此筆者認(rèn)為白膜層與血漿混合液在(22±2)℃靜置時間并不是越長越好，靜置2h就能達(dá)到較高的回收率。獻(xiàn)血者不同血小板含量與不同靜置時間之間不存在交互作用，也就是不同血小板含量在不同靜置時間回收率的變化值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

綜上所述，不同血小板含量獻(xiàn)血者所獻(xiàn)血液對制備濃縮血小板第2次分離回收率不產(chǎn)生影響，但不同靜置時間對制備濃縮血小板第2次分離回收率會產(chǎn)生影響，靜置2h即可使?jié)饪s血小板第2次分離回收率達(dá)到高值，不必進(jìn)一步延長靜置時間，以免影響血小板的質(zhì)量。