蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵培養(yǎng)基的研究

李志濤　彭蕊　朱冰清　王暉

摘要：以蛹蟲(chóng)草的菌絲體為目的產(chǎn)物，采用L18（37）正交試驗(yàn)研究蛹蟲(chóng)草最佳液體菌種培養(yǎng)基配方。試驗(yàn)結(jié)果表明，葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲體含量有顯著影響；最佳配方為：葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%，在此條件下的菌絲體含量達(dá)24.17 mg/mL。

關(guān)鍵詞：液體發(fā)酵；培養(yǎng)基配方；蛹蟲(chóng)草；正交試驗(yàn)；菌絲體

中圖分類(lèi)號(hào)：TS201.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2019）02-0003-03

蛹蟲(chóng)草又稱(chēng)北冬蟲(chóng)夏草，是一種食藥兩用的大型真菌，其藥用成分與冬蟲(chóng)夏草相近，具有降壓、抗衰老、鎮(zhèn)靜、保肺、益腎、止血、抗疲勞、提高人體免疫力、抗癌等功能，醫(yī)藥價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值均較高。目前，我國(guó)一般采用固體菌種方式培養(yǎng)蛹蟲(chóng)草，但這種培養(yǎng)方式具有菌齡長(zhǎng)而不一，出菇不整齊的缺點(diǎn)。與固體菌種培養(yǎng)相比，液體菌種制種具有菌齡一致、周期短、出菇整齊等優(yōu)點(diǎn)，因此，以蛹蟲(chóng)草的菌絲體為目的產(chǎn)物，研究蛹蟲(chóng)草的最佳液體菌種培養(yǎng)基配方，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)蛹蟲(chóng)草提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蛹蟲(chóng)草：衡水學(xué)院食品學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

PDA斜面培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL，pH值自然。

葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1。

1.2 儀器與設(shè)備

Alpha1506型分光光度計(jì)：上海譜元儀器有限公司；AE523型電子天平：上海恒平有限公司；SPX-100B-Z型生化培養(yǎng)箱：蘇州江東精密儀器有限公司；HH-6型恒溫水浴鍋：上海析達(dá)公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蛹蟲(chóng)草菌絲生長(zhǎng)量測(cè)定 蛹蟲(chóng)草菌絲提取流程為：蛹蟲(chóng)草斜面菌種（PDA斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)）→搖瓶液體發(fā)酵→蛹蟲(chóng)草發(fā)酵液→收獲蛹蟲(chóng)草菌絲體→60 ℃條件下干燥→稱(chēng)量。

搖瓶液體發(fā)酵的培養(yǎng)基成分為葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1。將不同發(fā)酵培養(yǎng)基分別裝入三角瓶（裝量為100 mL/250 mL，接種量為10%），在轉(zhuǎn)速150 r/min、24 ℃條件下振蕩培養(yǎng)6 d。

菌絲生長(zhǎng)量測(cè)定公式為：

蛹蟲(chóng)草菌絲體含量=菌絲體的干重（mg）/

發(fā)酵液體積（mL） （1）

1.3.2 正交試驗(yàn) 選用葡萄糖、玉米粉、蛋白胨、磷酸二氫鉀、碳酸鈣、硫酸鎂、維生素B1為試驗(yàn)因素，進(jìn)行L18（37）正交試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 正交試驗(yàn)

L18（37）正交試驗(yàn)結(jié)果及分析見(jiàn)表2。

由表2得知，按培養(yǎng)基成分對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲體含量影響順序?yàn)椋篊>F>D>A>G>B>E，即蛋白胨>硫酸鎂>磷酸二氫鉀>葡萄糖>維生素B1>玉米粉>碳酸鈣。說(shuō)明蛋白胨對(duì)蛹蟲(chóng)草菌絲體含量的影響最大，葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂對(duì)菌絲生長(zhǎng)有顯著影響（p<0.05）。

由表2中的數(shù)據(jù)還可知：最佳試驗(yàn)組合為A2B2C2D2E2F2G1，即葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%。。

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

采用最佳組合進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果取3次平行試驗(yàn)的平均值，確定菌絲體含量為24.17 mg/mL，明顯高于正交試驗(yàn)（表1）中的最高值。

3 結(jié)論

采用正交試驗(yàn)確定的蛹蟲(chóng)草的最佳培養(yǎng)基配方為：葡萄糖2.5%、玉米粉1.0%、蛋白胨0.5%、磷酸二氫鉀0.15%、碳酸鈣0.05%、硫酸鎂0.10%、維生素B1 0.003%。在此最佳條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，菌絲體含量達(dá)24.17 mg/mL。

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