析因設(shè)計評價元七膠囊配伍對小鼠睡眠的影響

李 然 隋得志 王斌勝

濱州醫(yī)學(xué)院中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院 煙臺 264003

失眠是一種臨床常見病，通常呈慢性化病程，在1～10年的隨訪研究中，成人失眠持續(xù)率為30%～60%[1]。目前，用于治療失眠的藥物主要針對γ-氨基丁酸(GABA)受體、褪黑激素受體、組胺受體、食欲素和血清素受體[2]。中藥酸棗仁、遠(yuǎn)志、茯神等也廣泛用于治療失眠癥[3]。雖然西藥鎮(zhèn)靜催眠作用明顯，但不良反應(yīng)、副作用大[4]，長期服用還會產(chǎn)生戒斷效應(yīng)[5]。中醫(yī)藥治療睡眠障礙的研究多基于辯證分型論治，專病專藥的研究較少，以三七、元胡為主要組分的研究更是未見報道。所以研制療效好又無毒副作用的新型催眠藥物，仍是目前亟待解決的問題。

元七膠囊是在臨床實踐中反復(fù)篩選優(yōu)化而得的失眠臨床效方，由三七和元胡兩味天然藥物組成，臨床上顯現(xiàn)出適用于失眠多種證候的專病專藥潛質(zhì)，我們已然申請了國家發(fā)明專利，為將元七膠囊開發(fā)為新型鎮(zhèn)靜催眠藥物，我們就元七膠囊藥物組成對睡眠的影響進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康昆明小鼠24只，體重18～22 g，SPF級，雄性，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司生產(chǎn)，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(魯)20140007。

1.2 實驗用藥 元七膠囊由元胡、三七兩味藥組成，購自北京同仁堂藥店煙臺分店，元胡生產(chǎn)批號為 160701，三七生產(chǎn)批號為20160702，經(jīng)檢驗均為正品。戊巴比妥鈉，北京嵐泰化工科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為20191115。艾司唑侖片，廣州白云山明興制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號為160809。

1.3 灌胃藥液配制 分別用95%乙醇超聲提取3次，提取液減壓回收溶劑所得浸膏再冷凍干燥為粉末，再加蒸餾水稀釋，分別配制成元胡灌胃液(含生藥25 mg·mL-1),三七灌胃液(含生藥25 mg·mL-1)和元七膠囊灌胃液(含生藥50 mg·mL-1)。

1.4 實驗方法

1.4.1 動物分組及給藥 昆明小鼠隨機分為4組，空白組、元胡組、三七組、元七膠囊組，每組6只。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后稱重給藥，空白組給蒸餾水，其余組分別給予元胡、三七、元七灌胃液，各組均按0.5 mL一次灌胃，連續(xù)用藥7 d。

1.4.2 戊巴比妥鈉睡眠實驗 末次給藥2小時后，腹腔注射戊巴比妥鈉0.04 mg·g-1，觀察各組小鼠睡眠潛伏期及睡眠時間。

1.4.3 統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組件比較采用析因設(shè)計方差分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 對睡眠潛伏期的影響 戊巴比妥鈉閾上劑量睡眠實驗結(jié)果顯示，元七膠囊可明顯縮短正常小鼠睡眠潛伏期，延長睡眠時間，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。析因分析結(jié)果表明元七組與正常組相比可以明顯縮短小鼠睡眠潛伏期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，在析因分析中，我們可以確定，元胡、三七發(fā)揮主效應(yīng)(P<0.01)，兩藥配伍無明顯交互作用(表1、2，圖1)。

表1 描述統(tǒng)計量

表2 主體間效應(yīng)的檢驗

注：a. R 方 =.459(調(diào)整 R 方 = .378)。

2.2 對睡眠時間的影響 觀察對睡眠時間的影響，元胡、三七、元七膠囊均可以延長正常小鼠睡眠時間(P<0.01)，析因分析結(jié)果表明元胡、三七對延長小鼠睡眠時間有單獨效應(yīng)(P<0.01)，元胡與大黃有交互作用(P<0.01)，對因變量的變化有顯著影響(表3、4，圖2)。實驗證實，元七膠囊中元胡與三七合用對促進(jìn)小鼠睡眠方面配伍合理，其組方具有科學(xué)性。

圖1 睡眠潛伏期交互效應(yīng)圖

分組極小值極大值均值標(biāo)準(zhǔn)差正常組77110 86.511.88元胡組751039112.44三七組741128715.23元七組1101361218.53

表4 主體間效應(yīng)的檢驗

注：a.R 方 = .621(調(diào)整 R 方 = .564)。

圖2 睡眠時間交互效應(yīng)圖

3 討論

本研究通過元七膠囊拆房醇提物對正常小鼠戊巴比妥鈉睡眠協(xié)同實驗中睡眠潛伏期及睡眠時間的影響，采用析因設(shè)計方差分析方法，得出結(jié)論，元胡、三七均具有鎮(zhèn)靜催眠的單獨效應(yīng)(P<0.01)，且兩藥合用效果更佳，有交互作用(P<0.01)，對因變量變化有顯著影響。證實元七膠囊對促進(jìn)小鼠睡眠采用元胡、三七配伍使用，組方合理，具有科學(xué)性。

元七膠囊方用三七、元胡配伍而成。三七具有養(yǎng)血而不凝血，祛瘀而不傷正的特點，且很多現(xiàn)代藥理和臨床研究都證實了三七具有鎮(zhèn)靜催眠作用[6]。其中三七所含人參皂苷Rbl具有抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)、鎮(zhèn)靜和催眠作用，且臨床試驗證明：三七能強化水合氯醛和戊巴比妥鈉的催眠作用，增強氯丙嗪的安眠作用[7]。元胡有效成分延胡索乙素、延胡索丑素和延胡索癸素均有鎮(zhèn)靜和催眠作用，其中以乙素的作用最強，較大劑量的延胡索乙素能使動物閉眼似睡，催眠作用明顯。延胡索乙素和丑素均能加強巴比妥催眠的作用，從而確定延胡索具有鎮(zhèn)靜作用[8]。

睡眠是生理行為, 也是保障身心健康的重要條件。長時間失眠會給患者帶來巨大的身心損害, 嚴(yán)重影響人們的生活和工作。對于能夠有效改善睡眠且不產(chǎn)生依賴性的藥物是當(dāng)前研究的重點及熱點。在多年的臨床診療經(jīng)驗中，我們發(fā)現(xiàn)元七膠囊即有此特點，且無需辯證，對各種癥候類型的失眠均有良好的療效。綜上所述元七膠囊能明顯延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠時間, 縮短巴比妥鈉誘導(dǎo)的睡眠潛伏期,說明其具有鎮(zhèn)靜、催眠作用。其組方既符合中醫(yī)傳統(tǒng)理論依據(jù)，也符合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論觀點，具有科學(xué)性。為將元七膠囊開發(fā)為中藥新藥提供了科學(xué)理論，也打下了堅實基礎(chǔ)，具有很高的研究價值和臨床使用價值。