50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑的HPLC分析

饒鐳 李保同

摘要：采用Zorbax Eclipse XDB-C18反相色譜柱建立一種利用HPLC測(cè)定50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑中有效成分的分析方法，以乙腈+水（體積比60 ∶ 40）為流動(dòng)相，在檢測(cè)波長(zhǎng)323 nm條件下測(cè)定待測(cè)試樣中雙環(huán)磺草酮的含量。雙環(huán)磺草酮的線性相關(guān)系數(shù)（r2）為0.999 9，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.480，變異系數(shù)為0.954%，平均回收率為99.95%。該分析方法具有操作簡(jiǎn)便、分離效果好、精密度和準(zhǔn)確度較高、線性相關(guān)性好的優(yōu)點(diǎn)，可用于雙環(huán)磺草酮懸浮劑的定量分析。

關(guān)鍵詞：雙環(huán)磺草酮;懸浮劑;高效液相色譜;分析

Abstract：An analytical method for the determination of active ingredients in 50% bicyclosulfone suspension by HPLC using Zorbax Eclipse XDB-C18 reversed phase column was developed，using a mixture solution of acetonitrile and water （60 ∶ 40，by vol） as the mobile phase under a detection wavelength of 323 nm. The linear correlation coefficient was 0.999 9，the standard deviation was 0.480，the coefficient of variation was 0.954%，and the average recovery rate was 99.95%. The analytical method has the advantages of simple operation，good separating effect，high precision and accuracy，and a good linear relationship. It can be used for the quantitative analysis of dicyclosulfone suspension agents.

Key words：benzobicyclon; SC; HPLC; analysis

1 材料與方法

1.1 試劑和溶液

雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品（≥98.0%，江西農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院），50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑（日本SDS生物公司），乙腈（色譜純），超純水。

1.2 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，帶全波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器（DAD檢測(cè)器）和自動(dòng)控溫進(jìn)樣器;色譜柱：Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）不銹鋼柱;紫外分光光度計(jì)（德國(guó)Eppendorf公司）;萬分之一天平（日本島津公司）;SB-5200DT超聲波清洗器;0.22 μm有機(jī)濾膜。

1.3 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈-水（體積比60 ∶ 40）;流速 0.8 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)323 nm;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量10 μL;雙環(huán)磺草酮的保留時(shí)間為4.577 min。典型的雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖見圖2。

1.4 測(cè)定步驟

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 稱取0.010 5 g雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈溶解，超聲波水浴助溶 10 min，冷卻至室溫，乙腈定容，配制成200 mg/L母液，搖勻備用。

1.4.2 試樣溶液的配制 稱取50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑0.020 0 g（精確至0.000 2 g）于50 mL容量瓶中，適量乙腈溶解，超聲波水浴助溶，冷卻至室溫，乙腈定容，搖勻，上清液過0.22 μm有機(jī)濾膜，備用。

1.4.3 測(cè)定 在上述色譜條件下，待儀器泵的壓力和基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，當(dāng)相鄰2針峰面積變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)品溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的順序進(jìn)樣，進(jìn)行分離與測(cè)定。

1.4.4 計(jì)算 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和試樣溶液中雙環(huán)磺草酮的峰面積，采用外標(biāo)法定量，根據(jù)公式計(jì)算試樣溶液中雙環(huán)磺草酮的含量W2（%），計(jì)算公式如下：

W2（%）=A2×m1×W1A2×m2。

式中：A1為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中雙環(huán)磺草酮峰面積的平均值，A2為試樣溶液中雙環(huán)磺草酮的峰面積平均值，m1為雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量（g），m2為雙環(huán)磺草酮試樣的質(zhì)量（g），W1為雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

采用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)配制的雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行光譜掃描，得到紫外吸收光譜（圖3）。從圖3可以看出，雙環(huán)磺草酮在323 nm附近吸收波長(zhǎng)最大，各種雜質(zhì)對(duì)組分測(cè)定不干擾，因此確定323 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的確定

采用Zorbax Eclipse XDB-C18反相色譜柱反復(fù)測(cè)試不同比例的乙腈-水、甲醇-水體系作為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)使用乙腈-水為流動(dòng)相（體積比 60 ∶ 40）、流速為0.8 mL/min、柱溫30 ℃時(shí)，雙環(huán)磺草酮能與雜質(zhì)能較好地分離，基線平穩(wěn)，峰形對(duì)稱，分離時(shí)間適中，可滿足分析的需要。

2.3 線性相關(guān)性的測(cè)定

用乙腈將雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行再稀釋，逐步配制成質(zhì)量濃度分別為50.00、10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述色譜檢測(cè)條件下，用外標(biāo)法（峰面積）進(jìn)行定量分析。以雙環(huán)磺草酮的質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積作為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。雙環(huán)磺草酮檢測(cè)方法的線性回歸方程為y=14.534 0x+4.247 5，r2=0.999 9（圖4）。結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度為0.01～50.00 mg/L時(shí)，峰面積與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。表明該方法可用于雙環(huán)磺草酮的分析和檢測(cè)。

2.4 精密度測(cè)定

按照上述色譜條件，從同一雙環(huán)磺草酮懸浮劑中稱取5份樣品測(cè)定雙環(huán)磺草酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，得到標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)（表1）。該方法的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.480，變異系數(shù)為0.954%，變異系數(shù)滿足國(guó)際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)（CIPAC）的要求（<1.71%）。

2.5 準(zhǔn)確度測(cè)定

稱取5份已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑于 50 mL 容量瓶中，分別加入一定量的雙環(huán)磺草酮標(biāo)準(zhǔn)品，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)理論添加量與實(shí)際測(cè)得量計(jì)算其回收率，結(jié)果表明雙環(huán)磺草酮的回收率在99.37%～100.80%之間，平均回收率為99.95%（表2）。

3 結(jié)論

本研究以C18反相色譜柱為分離柱，乙腈+水（體積比60 ∶ 40）為流動(dòng)相， 323 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，建立了50%雙環(huán)磺草酮懸浮劑的高效液相色譜定量分析方法。該方法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，線性相關(guān)性良好，精密度和準(zhǔn)確度較高，適用于雙環(huán)磺草酮懸浮劑的質(zhì)量檢測(cè)。

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