非小細胞肺癌并發(fā)糖尿病患者uPA異常表達的影響因素分析

孔冉冉 馬躍峰 馬震川 孫良章 張丹杰 李少民 姜建濤

非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)占全部肺癌的80%～85%，雖然我國肺癌切除率已提高至70%～97%，但患者術后5年生存率僅為27.2%～40.6%，其原因與多數(shù)患者明確診斷時病情已進展至晚期有關[1]。與健康人群相比，NSCLC患者免疫功能顯著下降，而最新研究顯示，糖尿病與免疫反應密切相關，糖尿病患者內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡調節(jié)失控所致糖代謝紊亂，可引發(fā)大量代謝產(chǎn)物堆積，進而加劇機體免疫功能異常，形成惡性循環(huán)[2]。因此，了解影響NSCLC合并糖尿病患者預后的因素，對于指導臨床干預有著重要意義。尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinase plasminogen activator, uPA)是一種特異性絲氨酸蛋白水解酶，被認為與腫瘤的浸潤、轉移和腫瘤血管生成有關，且uPA的高表達可導致患者生存率下降[3]。本文就NSCLC并發(fā)糖尿病患者uPA異常表達的影響因素進行了分析，旨在為患者預后的評估與預測提供參考依據(jù)。

資料與方法

一、一般資料

選取我院2016年3月至2019年3月收治的127例NSCLC并發(fā)糖尿病患者，以及同期39例NSCLC患者，分別納入研究組、對照組。選取標準：①于我院接受NSCLC外科手術治療，經(jīng)術后病理組織學檢查明確NSCLC診斷[4]；②癌組織及癌旁組織病理組織標本保存完整，臨床資料保存完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②癌旁組織距癌組織距離不足5 cm；③術前行放療或化療。研究組男76例，女51例，年齡37～71歲，平均年齡57.91歲；對照組男25例，女14例，年齡35～68歲，平均年齡58.17歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

二、研究方法

1. 檢測方法： 使用鏈霉素親生物素過氧化物酶連接法行免疫組化染色：取厚度4 μm癌組織、癌旁組織石蠟標本，置于烤箱中，于60 ℃環(huán)境下使用二甲苯脫蠟，每次15 min，重復2次；使用無水乙醇洗除二甲苯，每次10 min，重復2次；依次使用95%、90%、80%、70%梯度酒精和蒸餾水洗滌標本，各5 min；而后使用PBS溶液沖洗3次，每次5 min。標本處理完畢后，使用新鮮配制的3%過氧化氫溶液室溫封閉30 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性。PBS緩沖液清洗3次后，采用石蠟切片微波爐抗原修復法完成抗原熱修復，PBS緩沖液清洗3次，使用正常羊血清工作液封閉，室溫孵育30 min。棄血清，滴加PBS緩沖液稀釋的第一抗體(uPA單克隆抗體1︰50稀釋)，50 μl/片，4 ℃孵育過夜。自冰箱內(nèi)將切片取出，恢復至室溫后，PBS溶液漂洗3次，每次5 min。而后依次滴加生物素標記的第二抗體、辣根酶標記鏈霉卵白素工作液、新鮮配置的DAB溶液，室溫顯色。蘇木素復染、鹽酸酒精分化、自來水充分沖洗藍化后，使用梯度濃度酒精處理、二甲苯透明，中性樹膠封固，顯微鏡下觀察結果。

2. 觀察指標： 以胞漿內(nèi)存在棕黃色或棕褐色顆粒為陽性細胞，根據(jù)染色強度、陽性細胞數(shù)量，判斷uPA表達情況：染色強度：淺黃色、棕黃色、棕褐色分別計1分、2分、3分。陽性細胞百分比：≤10%、11%～50%、51%～75%、>75%分別計1分、2分、3分、4分?？偡?染色強度計分+陽性細胞百分比計分?？偡?～3分為陰性，總分>3分為陽性[5]。

3. 影響因素： 對比研究組、對照組癌組織、癌旁組織uPA表達情況，并按照研究組癌組織uPA表達情況，將其分別納入陽性組、陰性組，對比兩組患者年齡、性別、病理分型、組織學分級等臨床資料，運用Logistic多因素回歸分析，總結影響NSCLC并發(fā)糖尿病患者uPA異常表達的相關因素。

三、統(tǒng)計學方法

結 果

研究組癌組織uPA陽性率為74.80%(95/127)，高于對照組的58.97%(23/39)，差異有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，兩組患者癌旁組織uPA表達均為陰性。陽性組與陰性組淋巴結轉移情況、TNM分期比較，差異有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 陽性組與陰性組臨床資料比較[n(%)]

Logistic多因素回歸分析示，淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期均為影響NSCLC并發(fā)糖尿病患者uPA異常表達的獨立危險因素(P<0.05)，見表2。

表2 影響NSCLC并發(fā)糖尿病患者uPA異常表達的多因素回歸分析結果

討 論

合并糖尿病的惡性腫瘤患者機體免疫功能較差，術后易發(fā)生院內(nèi)感染，術后恢復緩慢；同時，有研究顯示，腫瘤及長期高血糖所致機體免疫功能低下，與腫瘤復發(fā)、轉移等不良預后也具有密切關聯(lián)[6-8]。最新研究顯示，uPA可激活纖溶酶原，使之成為有活性的纖溶酶，進而導致大部分細胞外基質蛋白降解[9-10]；此外，uPA還可激活基質金屬蛋白酶，通過多種信號傳導途徑，調控多種基因的轉錄和表達，進而參與細胞增殖、遷移及血管生成等過程[11-13]。

有研究顯示，NSCLC合并糖尿病患者有著更高的病死率，而其病死率的上升與uPA異常表達有關[14-17]，與單純NSCLC患者相比，NSCLC合并糖尿病患者uPA陽性率高達74.80%，印證了上述結論。因此，了解影響NSCLC合并糖尿病患者uPA異常表達的危險因素，對于指導臨床預后評估與預測有著至關重要的意義。通過多因素分析，可以發(fā)現(xiàn)，發(fā)生淋巴結轉移、TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期是導致患者uPA異常表達的獨立危險因素，其機制可能為：①基質降解是腫瘤細胞發(fā)生侵襲和轉移的重要前提，細胞外基質的成分包括膠原、糖蛋白、蛋白多糖等，上述成分組成的結構，是阻止正常細胞組織和大分子物質穿過的有力屏障[18-20]。淋巴結轉移的發(fā)生意味著基質降解的加劇，同時，腫瘤細胞亦可促進單鏈酶原結構Pro-uPA的大量分泌，Pro-uPA與腫瘤細胞膜上特異性受體結合后，可激活生成雙鏈活性uPA，進而降解細胞外基質、基底膜，提高腫瘤細胞的侵襲、轉移能力，形成惡性循環(huán)[21-26]。因此，淋巴結轉移不僅是uPA異常表達的重要基礎，也是uPA異常表達的結果之一，故存在淋巴結轉移的NSCLC合并糖尿病患者有著更高的uPA陽性率與更差的預后結果；②uPA主要分布于腫瘤邊緣而非腫瘤中心，TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期腫瘤往往具有膨脹性生長的趨勢，故腫瘤細胞可分泌大量uPA以利于自身趨化、移行[27-28]。此外，惡性腫瘤患者凝血系統(tǒng)的異常與uPA表達升高有關，其原因與uPA激活纖溶酶原轉化為纖溶酶，進而啟動纖溶系統(tǒng)有關[29-30]，因此，隨著TNM分期的升高，患者凝血系統(tǒng)異常愈發(fā)嚴重，其uPA異常表達風險也有所上升。

綜上所述，NSCLC并發(fā)糖尿病患者癌組織uPA陽性率明顯高于單純NSCLC患者，而導致患者uPA異常表達的因素包括淋巴結轉移、TNM分期升高等，重視患者淋巴結轉移狀態(tài)與TNM分期的評估，有助于指導臨床預后的預測，從而指導治療決策與干預方案。