Rad51、BRCA2在上皮性卵巢癌組織中的表達及臨床意義

孟 盟，佟秀琴

（1.興安盟人民醫(yī)院婦一科，內(nèi)蒙古 興安盟 137400；2.包頭市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 包頭 014040）

近年來，卵巢癌的發(fā)生率逐年上升且呈年輕化趨勢，成為目前人們關(guān)注的熱點。卵巢癌發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的過程，目前研究較多的是癌基因的激活以及DNA損傷修復機制等。DNA損傷修復機制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到了重要作用，同源重組(HR)是體內(nèi)參與DNA損傷修復的重要機制,而DNA修復蛋白Rad51和乳腺癌易感蛋白（BRCA2）是體內(nèi)參與同源重組性DNA修復的重要因子，并且與腫瘤對放療和化療藥物的耐受性有關(guān)。為分析Rad51與BRCA2在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用，本研究采用免疫組化方法檢測卵巢癌組織中Rad51與BRCA2的表達情況，探討兩者在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 標本來源

收集包頭市中心醫(yī)院婦科2008年1月—2013年1月手術(shù)切除并病理診斷的上皮性良性卵巢腫瘤組織30例，上皮性交界性卵巢腫瘤組織30例及上皮性惡性卵巢腫瘤組織30例，以及經(jīng)因子宮病變而切除的正常卵巢組織30例，所有患者術(shù)前或就診前均未行激素治療、化療或放療。

1.2 主要試劑

兔抗人RAD51多克隆抗體、兔抗人BRCA2多克隆抗體均為北京博奧森公司的產(chǎn)品，免疫組化SP試劑盒、DAB顯色劑、磷酸鹽緩沖液（PBS）均購自上海長島公司。

1.3 免疫組化方法

采用SP法檢測Rad51、BRCA2蛋白的表達。4%多聚甲醛固定標本，石蠟包埋，4um厚切片，脫蠟，水化組織切片，0.1%枸櫞酸鹽緩沖液抗原熱修復，冷卻至常溫，SP免疫組化染色，二甲苯透明中性樹脂封固，顯微鏡下觀察。

1.4 結(jié)果判斷

RAD51、BRCA2以細胞漿、細胞核和細胞膜中出現(xiàn)淡黃至棕黃色顆粒為陽性顯色,以染色強度和陽性細胞比例評定陽性表達:光鏡下隨機選取每張切片中5個高倍視野,每個視野計數(shù)100個細胞，取其平均值。染色強度分級如下:無著色為0,淡黃色為1,棕黃色為2,棕褐色為3,陽性細胞數(shù)分級為:陽性細胞小于5%為0，5～25%為1，26～50%為2，51～75%為3，76%及其以上為4，兩項得分相乘，結(jié)果0為陰性，1～4為（+）,5～8為（++），9～12為（+++）。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用spss17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。采用x2檢驗。RAD51、BRCA2之間的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。采用雙側(cè)檢驗，檢驗水準a=0.05，P＜0.05有統(tǒng)計學意義，P＜0.01有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 Rad51在不同卵巢組織中的表達結(jié)果

免疫組化顯色結(jié)果顯示Rad51定位于上皮性卵巢組織上皮細胞胞核內(nèi)，部分病例細胞漿中同時表達，見圖1-4。Rad51蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率分別為36.67%、46.67%、56.67%和86.67%，呈現(xiàn)上升趨勢，且Rad51在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率與上述各組織中的表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

2.2 BRCA2在不同卵巢組織中的表達結(jié)果

免疫組化顯色結(jié)果顯示BRCA2定位于上皮性卵巢組織上皮細胞胞核內(nèi)，部分病例細胞漿中同時表達，見圖5-8。BRCA2蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率分別為80.00%、66.67%、56.67%和30%，呈現(xiàn)下降趨勢，且BRCA2在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率與上述各組織中的表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1 Rad51、BRCA2在不同卵巢組織中的表達結(jié)果

2.3 Rad51與BRCA2在卵巢癌組織中表達的相關(guān)性

采用spearman相關(guān)分析對30例卵巢上皮性惡性腫瘤中Rad51與BRCA2陽性表達率進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，Rad51與BRCA2的相關(guān)系數(shù)rs為-0.426（P＜0.05）。兩者呈負相關(guān)。見表2。

表2 Rad51與BRCA2在卵巢癌組織中表達的關(guān)系

3 討 論

3.1 Rad51在卵巢癌組織中的表達及意義

同源重組性DNA損傷修復機制在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程起著重要作用，DNA損傷修復系統(tǒng)任何一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常時，都會引起基因修復失敗，導致細胞染色體畸變、基因突變等，從而導致腫瘤的發(fā)生[1]。近年來，Rad51作為同源重組的關(guān)鍵因子,與腫瘤的關(guān)系越來越引起了人們的重視。Rad51在多種惡性腫瘤組織中呈高表達[2]。本研究結(jié)果顯示，Rad51蛋白在卵巢正常組織、卵巢上皮性良性腫瘤組織、卵巢上皮性交界性腫瘤組織及卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率呈現(xiàn)上升趨勢，且Rad51在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率與上述各組織中的表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)?？梢奟ad51在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要作用[3]。Rad51蛋白水平的升高可能會導致腫瘤細胞同源重組修復能力的增加, 從而增加腫瘤細胞對放、化療的耐受性。Connell等[4]在對383例手術(shù)切除的非小細胞肺癌研究時發(fā)現(xiàn), RAD51表達較強的患者其生存中值明顯短于表達弱者,這也說明RAD51與預后有關(guān)。研究表明RAD51 G135C位點的多態(tài)性也與非小細胞肺癌的不良預后密切相關(guān)。

3.2 BRCA2在卵巢癌組織中的表達及意義

大量的研究表明，BRCA2突變與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)。本研究結(jié)果表明，BRCA2在卵巢上皮性惡性腫瘤組織中的陽性表達率與上述各組織中的表達比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這一結(jié)果與乳腺癌的表達趨勢是一致的。說明BRCA2參與了卵巢癌的發(fā)生，并且可能在卵巢癌的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，但其在卵巢癌中的具體作用機制有待進一步研究。等研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌中的BRCA1/BRCA2突變是卵巢癌預后的一個敏感指標[5-6]，抑制BRCA1/BRCA2表達后，用順鉑和紫杉醇治療卵巢癌患者，其生存率明顯提高。由此可見，BRCA2也是與卵巢癌化療放療密切相關(guān)的指標。

3.3 卵巢癌組織中Rad51、BRCA2蛋白表達的相關(guān)性

在本研究中，為了研究Rad51和BRCA2蛋白在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中的相互作用，采用spearman相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，卵巢癌組織中Rad51和BRCA2蛋白的表達呈明顯的負相關(guān)關(guān)系。由此可見，卵巢癌的發(fā)生發(fā)展是復雜、多因素的病理變化過程。

綜上所述，Rad51和BRCA2在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用。