非輸血依賴性地中海貧血患者腦血管病變生物標志物S100和NSE水平觀察

付曉英 朱薇 吉莉

[摘要]目的探討非輸血依賴性地中海貧血（NTDT）患者腦血管病變生物標志物血清S100鈣結(jié)合蛋白B（S100B）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）與經(jīng)顱多普勒（TCD）檢測的相關(guān)性。方法將NTDT患者50例作為觀察組和健康者50例作為對照組。通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測兩組血清S100B和NSE蛋白水平;利用酶法檢測血清乳酸脫氫酶（LDH）水平;運用TCD檢測兩組血流動力學變化;分析S100B、NSE分別與LDH和TCD血流參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果觀察組血清S100B、NSE、LDH顯著高于對照組（均P<0.05）。觀察組不同NTDT表型血清S100B、NSE和LDH水平無統(tǒng)計學差異（均P>0.05）。TCD血流動力學參數(shù)平均血流速度（Vm）和收縮期血流峰值速度（Vp）均顯著高于對照組（均P<0.05）。觀察組S100B與LDH、左側(cè)大腦中動脈Vm、左側(cè)大腦中動脈Vp呈正相關(guān)（均P<0.05）;觀察組NSE與LDH、左側(cè)大腦后動脈阻力指數(shù)（RI）、左側(cè)大腦后動脈搏動指數(shù)（PI）呈正相關(guān)（均P<0.05）。結(jié)論TCD血流動力學特征與腦血管病變的生物標志物S100B和NSE相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]非輸血依賴性地中海貧血;S100鈣結(jié)合蛋白B;神經(jīng)元特異性烯醇化酶;經(jīng)顱多普勒

中圖分類號：R743

文獻標識碼：A文章編號：1009-816X（2019）01-0053-04

非輸血依賴性地中海貧血（non-transfusion-dependent thalassemia，NTDT）是指患有地中海貧血但不需要定期輸血的患者，即使它們在某些臨床條件下可能需要偶爾或甚至頻繁的輸血。NTDT主要有三種類型：中間型β地中海貧血、HbE/β地中海貧血和HbHα地中海貧血[1]。近年研究表明，NTDT患者容易發(fā)生血栓栓塞事件，尤其是脾切除的NTDT患者[2]。NTDT患者易發(fā)腦缺血及腦血管病變的相關(guān)因素尚未闡明，探索NTDT患者腦血管病變的有效的檢測手段具有重大意義。S-100鈣結(jié)合蛋白B（S100 calcium binding protein B，S100B）是神經(jīng)膠質(zhì)細胞的標記蛋白;神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）是神經(jīng)元的特異性生化標志物[3]。正常情況下血清中NSE和S100B含量甚少，當神經(jīng)細胞損傷時血清中S100B和NSE含量增加[4]。S100B和NSE被認為是神經(jīng)細胞受損的生物標志物[3，4]。研究發(fā)現(xiàn)地中海貧血癥患者經(jīng)顱多普勒（transcranial Doppler，TCD）血流流速顯著高于健康對照[5]，提示TCD可用于評估NTDT患者腦血管疾病。本研究擬評估NTDT患者的血清腦血管病變生物標志物S100B和NSE水平與TCD血流動力學的關(guān)系。

1資料與方法

1.1一般資料：選取2015年3月至2016年6月本院收治的缺血性腦血管病變的NTDT患者50例作為觀察組?；颊呷毖阅X血管病變采用TCD檢測發(fā)現(xiàn)腦血管血流速度低于正常值。NTDT患者經(jīng)血紅蛋白電泳、肽鏈分析及地中海貧血基因檢測[6]確診為中間型β地中海貧血14例、HbE/β地中海貧血9例和HbHα地中海貧血27例。其中，男31例，女19例，年齡13～53歲，平均（34.82±24.23）歲。所有患者在本研究期間均不依賴輸血，且近期沒有輸血史。排除感染性疾病者，高血壓、糖尿病或未經(jīng)顱多普勒者，有精神疾病史、無嚴重心理認知功能障礙者等。另外，選擇健康者50例作為對照組，其中男30例，女20例，年齡10～55歲，平均（34.52±20.53）歲。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核批準，所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2方法：研究對象晨起空腹時采集靜脈血（無需抗凝），低溫離心10min，轉(zhuǎn)速3000rpm/min，將上清液保存于-80℃冰箱中，待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中S100B、NSE蛋白水平（試劑盒由捷克Bio Vender公司提供）;采用酶法檢測乳酸脫氫酶（lactatede hydrogenase，LDH）活性檢測（試劑盒上?？迫A生物工程股份有限公司）。

所有儀器在使用前均經(jīng)過精密校準，操作步驟嚴格按照說明書進行。研究對象采用TCD檢查（深圳理邦精密儀器有限公司TDD-Ⅱ型）。運用2MHZ脈沖探頭，對患者仰臥位，經(jīng)顳窗探測雙側(cè)大腦中動脈（middle cerebral arteries，MCA）、大腦前動脈（anterior cerebral arteries，ACA）、大腦后動脈（posterior cerebral arteries，PCA）;患者取坐前俯位，經(jīng)枕窗探測雙側(cè)椎動脈（vertebral arteries，VA）和基底動脈（basilar artery，BA），采集血管音頻信號及頻譜圖，自動計算平均血流速度（mean velocity，Vm）、收縮期血流峰值（peak systolic velocity，Vp）、阻力指數(shù)（relative index，RI）、搏動指數(shù)（pulsatility index，PI），分析研究對象血流變化。

1.3統(tǒng)計學處理：采用SPSS 17.0版軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料符合正態(tài)分布，采用（x-±s）表示，組間比較采用t檢驗，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗;Pearson相關(guān)性分析S100B、NSE與LDH及TCD參數(shù)的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1兩組血清S100B和NSE蛋白水平比較：觀察組血清S100B、NSE、LDH顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計意義（P<0.05），見表1。

2.2觀察組不同NTDT類型血清S100B、NSE蛋白水平比較：觀察組不同NTDT類型血清S100B、NSE和LDH水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表2。

2.3兩組TCD血流動力學參數(shù)比較：TCD血流動力學參數(shù)MCA、ACA、PCA、VA、BA的Vm和Vp均顯著高于對照組（均P<0.05）;MCA、ACA、PCA的RI和PI與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表3。

2.4觀察組血清S100B、NSE與LDH及TCD參數(shù)的相關(guān)性：觀察組S100B與LDH、MCA-LVm、MCA Vp呈正相關(guān)（均P<0.05）;觀察組NSE與LDH、PCA-L RI、PCA-L PI呈正相關(guān)（均P<0.05）。

3討論

血栓栓塞是NTDT患者的主要并發(fā)癥，這主要是由大血管疾病、微血管病變和靜脈血栓形成所導致[7]。非侵入性檢測NTDT患者腦血管病變，對于治療NTDT患者血栓栓塞具有重要意義。S100B是反映神經(jīng)系統(tǒng)損傷的生物標志物。在神經(jīng)系統(tǒng)中大量存在，主要在特定細胞類型中表達，如星形膠質(zhì)細胞、成熟的少突膠質(zhì)細胞、神經(jīng)祖細胞、脂肪細胞、黑素細胞骨骼肌肌纖維和成肌細胞[8]。低水平S100B可作為神經(jīng)營養(yǎng)因子，高水平S100B則起反作用，提示神經(jīng)系統(tǒng)有損傷[9]。研究發(fā)現(xiàn)腦血管疾病患者、腦外傷以及精神分裂癥、癲癇或阿爾茨海默病患者血清中S100B蛋白水平升高[10～12]。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是糖酵解酶烯醇酶的二聚體同工酶。它主要位于神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌起源的細胞內(nèi)，被認為是神經(jīng)元丟失的生物標志物[3]。在多發(fā)性硬化、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、頭部創(chuàng)傷、中風和腦缺氧等患者中血清NSE水平升高[13，14]。LDH是觀察地中海貧血癥患者溶血指標之一。高水平的LDH與增加的一氧化氮（NO）、內(nèi)皮功能障礙和血管病變有關(guān)[15]。研究顯示鐮狀細胞貧血癥患者LDH水平與TCD參數(shù)之間存在相關(guān)性，說明腦微血管病可能與溶血和NO水平有關(guān)[16]。本研究發(fā)現(xiàn)NTDT患者血清NSE和S100B顯著高于對照組，提示NTDT患者有腦血管病變風險。但不同類型NTDT患者血清S100B和NSE水平差異無統(tǒng)計學意義，說明血清S100B和NSE水平可反映NTDT患者有腦血管病變，但不能區(qū)分不同類型NTDT患者的腦血管病變。另外本研究中血清LDH也顯著高于對照組，說明NTDT患者有溶血特征，LDH也可能是觀察NTDT患者病情的重要指標之一。本研究發(fā)現(xiàn)NTDT患者血清S100B和NSE水平與LDH呈正相關(guān)，這說明神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞破壞的生物標記與溶血特征之間存在相關(guān)性，這側(cè)面反映NTDT患者神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的破壞與溶血和NO水平改變之間可能的存在病理關(guān)系。本研究探討NTDT患者血清S100B和NSE水平與TCD血流動力學參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清S100水平與左側(cè)MCA的Vm和Vp、左側(cè)PCA的NSE與RI、PI水平之間呈正相關(guān)。TCD值反映了腦循環(huán)的血流動力學特征，對于評價腦血管疾病及鑒別診斷方面有重要價值。本研究結(jié)果顯示腦血管循環(huán)/血流動力學指標和神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞破壞生物標志物之間存顯著相關(guān)性，但是這種相關(guān)性原因尚不清楚。而且本研究僅發(fā)現(xiàn)左側(cè)MCA和PCA與NTDT患者血清S100B和NSE水平，而不是所有被檢查的動脈，提示TCD參數(shù)與NTDT患者血清S100B和NSE水平的關(guān)系值得進一步探討。本研究研究對象樣本量很小，有必要擴大樣本量，以進一步闡明NTDT患者腦缺血的病理變化產(chǎn)生原因。

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