• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    安溪肉桂清咽保健功效評價研究

    2019-04-17 07:35:06譚蓉張穎聰王靜張志騰楊秀芳
    中國茶葉加工 2019年1期
    關(guān)鍵詞:足趾棉球安溪

    譚蓉 , 張穎聰 , 王靜 , 張志騰 , 楊秀芳 *

    (1.中華全國供銷合作總社杭州茶葉研究院,浙江杭州 310016;2.浙江省茶資源跨界應用技術(shù)重點實驗室,浙江杭州 310016;3.安溪縣穎昌茶廠,福建安溪 362400)

    安溪肉桂產(chǎn)自安溪縣大坪鄉(xiāng)坪洲村。民間對肉桂茶清咽利喉的效果反饋良好,為了驗證這一特殊功效,文章擬通過體內(nèi)外試驗進行功效評價研究。以細菌感染引起的急慢性咽炎為評價指標,進行安溪肉桂的體外抑菌試驗研究,同時以《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003)的要求進行大鼠棉球植入試驗和大鼠足趾腫脹試驗,進一步對安溪肉桂清咽保健功效進行評價。

    1 材料和方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 體外抑菌試驗

    試驗菌種:普通變形桿菌 CMCC(B)49027,肺炎鏈球菌ATCC49619,乙型溶血性鏈球菌ATCC21059,上海魯微科技有限公司。

    試驗樣品:穎昌牌安溪肉桂干茶樣(茶多酚總量14.8%,兒茶素總量7.8%),安溪縣穎昌茶廠提供。

    試驗試劑:甲醇、無水乙醇、氯化鈉、濃硫酸、氯化鋇,均為分析純;營養(yǎng)瓊脂,血瓊脂平板。

    1.1.2 體內(nèi)功效評價

    試驗動物:SD大鼠,清潔級,80只,體重160~180 g。購自浙江省醫(yī)學科學院實驗動物中心(動物質(zhì)量合格證號:0008677,許可證號:SCXK(浙)2008-0033)。于室溫 23±2 ℃,相對濕度 50%~70%飼養(yǎng),自由飲食飲水。

    試驗樣品:穎昌牌安溪肉桂提取濃縮液,1 g/mL,分別用蒸餾水稀釋5倍、10倍和20倍,配制成濃度為0.2 g/mL、0.1 g/mL和0.05 g/mL的藥液備用。

    陽性對照:清熱散結(jié)膠囊(江西普正制藥有限公司,批號 150508);規(guī)格:0.35 g×12 ?!? 板,根據(jù)人用劑量和動物劑量換算,將膠囊內(nèi)含物用蒸餾水配制成濃度為63 mg/mL溶液備用。

    致炎劑:用生理鹽水稀釋雞蛋清配成濃度為10%的蛋清溶液。

    試驗試劑:TNF-α ELISA試劑盒,批號20151102B,上海源葉生物科技有限公司;IL-6 ELISA試劑盒,批號20151102B,上海源葉生物科技有限公司;IL-1β ELISA試劑盒, 批號20151102B,上海源葉生物科技有限公司。

    1.2 儀器與設備

    AL-204型電子天平;DK-S24型電熱恒溫水浴鍋;DHG-9070A型電熱恒溫鼓風干燥箱;SYQDSX-280A型手提式不銹鋼壓力蒸汽滅菌鍋;SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱;YLS-7A型足趾容量測量儀,山東省醫(yī)學科學院設備站;Powerwave 340酶標儀,美國Bio-TEK公司;DGG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱,上海森信實驗儀器有限公司;CP114電子天平,奧豪斯儀器(上海)有限公司;Hirayama HVP-50高壓滅菌鍋,日本Hirayama;Heraeus Biofuge Stra冷凍離心機,德國Heraeus;DS-671電子計重秤,上海寺岡電子有限公司。

    1.3 試驗方法

    1.3.1 紙片抑菌法

    參考WS/T 125—1999《紙片法抗菌藥物敏感試驗標準》進行試驗,其中部分步驟稍微修改,具體如下:

    使用劃線法活化菌株,選擇平板上形態(tài)相同的菌落至少4~5個,用接種環(huán)挑起,移至5 mL的生理鹽水中,將菌液濃度調(diào)節(jié)至0.5麥氏單位比濁管。使用無菌棉簽,蘸取菌液,并在上端管壁旋轉(zhuǎn)擠壓幾次,去掉過多菌液,用棉簽涂布平板表面,保證涂布均勻。空白藥敏紙片(直徑6 mm)在提取液中浸泡1 h后,37℃下烘干,用于下一步的抑菌試驗。接種平板后,貼上已經(jīng)制備好的藥敏紙片,用鑷子壓一下紙片使其與培養(yǎng)基表面貼牢,每塊培養(yǎng)基貼6片。隨后將平板倒置放在35.5℃的生化培養(yǎng)箱中。經(jīng)16~18 h培養(yǎng)后觀察結(jié)果,測量抑菌圈大小,平行3次。

    1.3.2 動物試驗方法

    (1)分組與給藥

    選取健康雄性SD大鼠40只,按體重隨機分為5組,每組8只,即陰性對照組、陽性對照組(清熱散結(jié)膠囊0.63 g/kg)、安溪肉桂提取物(0.5 g/kg)組、安溪肉桂提取物(1 g/kg)組、安溪肉桂提取物(2 g/kg)組。所有大鼠均給予基礎飼料,自由采食飲水。除陰性對照組灌服純凈水外,其余各給藥組分別灌服相應藥物,每日1次,按1 mL/100 g體重的標準,足趾腫脹模型連續(xù)給藥29 d,棉球肉芽腫模型連續(xù)給藥40 d。

    (2)指標測定

    足趾腫脹度測定:實驗結(jié)束灌服1 h后,將大鼠固定,于足外踝處畫1道橫線作標記。用容積測量法測足趾容積,將大鼠后肢拉直放入測量儀玻璃筒內(nèi),觀察筒內(nèi)液體水平線與鼠足橫線標記處重疊時,測量儀數(shù)字顯示屏將顯示足趾容積數(shù)值(mL)。給藥前先測一次足趾容積;給藥后0.5 h,自足趾中部皮下注入致炎劑(10%蛋清)0.1 mL/只;分別于致炎 1 h、2 h、4 h、6 h后測量大鼠足趾腫脹程度。足趾腫脹度(mL)=給藥后足趾體積-給藥前足趾體積。

    棉球肉芽腫重量測定:將脫脂棉制成約20 mg左右緊致的小棉球,經(jīng)高壓滅菌后,置恒溫干燥箱60°C干燥3 h,取出在無菌條件下稱重,干燥保存,備用。肉芽腫的形成和測定實驗結(jié)束前8 d,用脫毛器脫去大鼠兩側(cè)腹股溝處的毛,水合氯醛麻醉大鼠,碘伏消毒,在無菌條件下切開大鼠兩側(cè)腹股溝皮膚,植入備用的棉球,縫合切口,繼續(xù)給予樣品。末次給藥后禁食12 h,水合氯醛麻醉大鼠,在原縫合處剪開皮膚,剝離并取出棉球肉芽組織,恒溫干燥箱60°C干燥3 h后稱重,計算肉芽腫凈量。

    肉芽腫凈量 (mg)=干燥后棉球肉芽腫重量-原棉球重量。

    (3)炎癥因子測定

    末次給藥后禁食12 h,水合氯醛麻醉大鼠,腹主動脈取血,離心制備血清,酶聯(lián)免疫法測定血清中 TNF-α、IL-6、IL-1β 含量。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    使用Excel 2007對數(shù)據(jù)進行描述性分析,使用SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。計量資料數(shù)據(jù)以±SD表示,組間比較采用 t-test,p<0.05表示差異有顯著性。

    表1 不同提取溶劑對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 1 Influence of different extraction solvents on disc diffusion zone diameters (Unit:mm,±SD )

    表1 不同提取溶劑對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 1 Influence of different extraction solvents on disc diffusion zone diameters (Unit:mm,±SD )

    注:不同字母表示存在顯著性差異,p<0.05;-表示不抑菌,下同。Note: different letters indicated significant differences, p<0.05.“-” indicated no bacteriostasis, the same as followed.

    提取溶劑E x t r a c t i o n s o l v e n t乙型溶血性鏈球菌β-H e m o l y t i c s t r e p t o c o c c u s水--7.7 5±0.3 5 c普通變形桿菌P r o t e u s v u l g a r i s肺炎鏈球菌S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e 7 0%乙醇 - 9.6 7±0.2 9 b 9.8 0±0.2 7 b 7 0%甲醇 - 1 0.4 0±0.5 5 a 1 0.8 3±0.7 6 a

    2 結(jié)果與分析

    2.1 體外抑菌試驗

    2.1.1 提取溶劑對抑菌圈大小的影響

    分別選擇水、70%甲醇及70%乙醇作為提取溶劑,料液比為1∶4(w/v)(此處由于水作為溶劑時,提取料液比最高只能達到1∶4,再提高時基本沒有提取液),提取時間為20 min,提取溫度為70℃。三種提取溶劑所獲得的提取液抑菌效果如表1所示。由上表可知,70%甲醇提取液的抑菌效果較佳。隨后,又進行了不同濃度的甲醇提取液對抑菌效果的研究,料液比為 3∶10(w/v),其余提取條件一致,結(jié)果如表2所示。從結(jié)果可以看出,隨著甲醇濃度的增加,對三種菌的抑菌圈大小均呈先增大后減小的趨勢,且在70%的甲醇條件下,抑菌效果最佳。因此,后續(xù)試驗選擇70%甲醇作為提取溶劑。

    表2 不同濃度的甲醇對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 2 Influenceofdifferentconcentrationsofmethanolondiscdiffusionzonediameters (Unit: mm,±SD)

    表2 不同濃度的甲醇對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 2 Influenceofdifferentconcentrationsofmethanolondiscdiffusionzonediameters (Unit: mm,±SD)

    甲醇濃度M e t h a n o l c o n c e n t r a t i o n乙型溶血性鏈球菌β-H e m o l y t i c s t r e p t o c o c c u s 6 0%甲醇 7.0 0±0.0 0 a 9.2 5±0.3 5 b 9.7 5±0.3 5 b 7 0%甲醇 7.2 5±0.3 5 a 1 0.5 0±0.7 1 a 1 1.7 5±0.3 5 a 8 0%甲醇9 0%甲醇普通變形桿菌P r o t e u s v u l g a r i s肺炎鏈球菌S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e- -9.0 0±0.0 0 b-9.2 5±0.3 5 b 8.0 0±0.0 0 c

    2.1.2 提取溫度對抑菌圈大小的影響

    分別選擇60℃、70℃、80℃和90℃為提取溫度,料液比為 3∶10(w/v),提取時間為 20 min,考察相應提取液抑菌圈的大小,結(jié)果如表3所示.從結(jié)果可以看出,70℃和90℃提取時提取液抑菌圈最大,且與另外兩個提取溫度下提取液的抑菌圈大小均存在顯著性的差異(p<0.05)。綜合考慮,后續(xù)使用70℃作為提取溫度。

    表3 不同提取溫度對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 3 Influence of different extraction temperatures on disc diffusion zone diameters ( Unit: mm,±SD )

    表3 不同提取溫度對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 3 Influence of different extraction temperatures on disc diffusion zone diameters ( Unit: mm,±SD )

    溫度T e m p e r a t u r e乙型溶血性鏈球菌β-H e m o l y t i c s t r e p t o c o c c u s 6 0 ℃ - 7.7 5±0.3 5 b 8.5 0±0.0 0 b 7 0 ℃ 7.2 5±0.3 5 b 1 0.5 0±0.7 1 a 1 1.1 7±0.2 9 a 8 0℃9 0℃普通變形桿菌P r o t e u s v u l g a r i s肺炎鏈球菌S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e-9.2 5±0.3 5 a 7.7 5±0.3 5 b 9.2 5±0.3 5 a 8.7 5±0.3 5 b 1 1.5 0±0.7 1 a

    2.1.3 提取時間對抑菌圈大小的影響

    分別選擇 5 min、10 min、20 min 和 30 min 為提取時間,料液比為 3∶10(w/v),考察相應提取液抑菌圈的大小,結(jié)果如表4所示,從表中可以看出,提取時間在20 min時,對三種菌的抑菌圈效果較好,且與30 min的結(jié)果沒有顯著性的差異。因此,后續(xù)試驗選擇20 min作為提取時間。

    表4 不同提取時間對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 4 Influence of different extraction time on disc diffusion zone diameters ( Unit: mm,±SD )

    表4 不同提取時間對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 4 Influence of different extraction time on disc diffusion zone diameters ( Unit: mm,±SD )

    乙型溶血性鏈球菌β-H e m o l y t i c s t r e p t o c o c c u s 5 m i n - 8.7 5±0.3 5 b 9.7 5±0.3 5 b 1 0 m i n - 9.5 0±0.5 0 b 9.8 3±0.2 9 b 2 0 m i n 3 0 m i n時間T i m e普通變形桿菌P r o t e u s v u l g a r i s肺炎鏈球菌S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e 7.2 5±0.3 5 a 7.3 3±0.2 9 a 1 0.5 0±0.7 1 a b 1 0.7 5±0.3 5 a 1 1.1 7±0.2 9 a 1 1.2 5±0.3 5 a

    2.1.4 不同料液比對抑菌圈大小的影響

    根據(jù)上述獲得的較優(yōu)提取條件,考察不同料液比對三種菌的抑菌效果,結(jié)果如表5所示,從結(jié)果中可以看出,抑菌圈的大小都隨著料液比的增加而增大。當料液比達到3.5∶10后,三種菌的抑菌圈均不再顯著增加(p<0.05)。但是三種菌的最佳料液比有一定的差異,以最先出現(xiàn)顯著性差異的結(jié)果為最佳比例,普通變形桿菌為3.5∶10,肺炎鏈球菌為 2.5∶10,乙型溶血性鏈球菌為 3∶10。

    表5 不同料液比對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 5 Influence of different solid-liquid ratio on disc diffusion zone diameters(Unit:mm,±SD)

    表5 不同料液比對抑菌圈大小的影響(單位:mm,±SD)Table 5 Influence of different solid-liquid ratio on disc diffusion zone diameters(Unit:mm,±SD)

    料液比S o l i d-L i q u i d r a t i o乙型溶血性鏈球菌β-H e m o l y t i c s t r e p t o c o c c u s 1∶1 0 - - -1.5∶1 0 2∶1 0普通變形桿菌P r o t e u s v u l g a r i s肺炎鏈球菌S t r e p t o c o c c u s p n e u m o n i a e---9.2 5±0.3 5 b 8.2 5±0.3 5 c 1 0.2 5±0.3 5 b 2.5∶1 0 3∶1 0 3.5∶1 0 4∶1 0-7.2 5±0.3 5 b 7.6 7±0.2 9 a 8.6 7±0.2 9 a 1 0.4 0±0.5 5 a 1 0.5 0±0.7 0 a 1 0.1 0±0.2 2 a 1 0.5 0±0.5 0 a 1 0.8 3±0.7 a b 1 1.1 7±0.2 9 a 1 1.4 0±0.2 2 a 1 1.5 0±0.5 0 a

    綜上,安溪肉桂對三種菌均有一定的抑制效果,其中對乙型溶血型鏈球菌的抑制效果最佳,其次是肺炎鏈球菌,對普通變形桿菌的抑制效果較弱。

    2.2 動物體內(nèi)功效評價試驗

    2.2.1 大鼠足趾腫脹試驗結(jié)果

    與陰性對照組比較,陽性組及安溪肉桂提取物組在致炎后1 h開始對大鼠足趾腫脹有顯著的抑制作用(p<0.05)。安溪肉桂提取物高劑量組(2 g/kg)于致炎后1 h開始即可顯著減輕大鼠足趾腫脹度,抗炎作用一直持續(xù)至致炎后6 h(p<0.05)。安溪肉桂提取物低劑量組(0.5 g/kg)及中劑量組(1 g/kg)在致炎后2 h內(nèi)有明顯減輕足趾腫脹度的作用。由上述結(jié)果可以看出安溪肉桂提取物對蛋清所致的大鼠足趾腫脹有明顯的抑制作用。

    2.2.2 大鼠棉球肉芽腫試驗結(jié)果

    與陰性對照組比較,陽性組及安溪肉桂提取物組的肉芽腫重量有顯著性的下降(p<0.05)。安溪肉桂提取物3個劑量均可極顯著地減輕大鼠肉芽腫重量(p<0.01)。由上述結(jié)果可以看出安溪肉桂提取物對棉球所致的大鼠肉芽腫有明顯抑制作用。

    表6 大鼠足趾腫脹試驗結(jié)果(±SD)Table 6 Results of paw edema experiment in rats(±SD)

    表6 大鼠足趾腫脹試驗結(jié)果(±SD)Table 6 Results of paw edema experiment in rats(±SD)

    注:與陰性對照組比較,* 表示差異顯著(p<0.05),** 表示極顯著差異(p<0.01),下同。Note:Compared with the negative control group,*indicated significance at p<0.05,**indicated significance at p<0.01,the same as followed.

    致炎后6 h 6 h o u r a f t e r i n f l a m m a t i o n s陰性對照組 8(1 6) - 0.6 6±0.1 9 0.6 1±0.1 7 0.4 9±0.2 0 0.4 0±0.1 7陽性對照組 8(1 6) 0.6 3 0.4 6±0.2 4** 0.4 6±0.1 6** 0.4 5±0.1 4 0.3 2±0.1 7組別T r e a t m e n t s動物數(shù)(足趾數(shù))N u m b e r o f a n i m a l(n u m b e r o f t o e s)劑量(g/k g)D o s a g e致炎后不同時間足趾腫脹度(m L)R a t e o f r a t p a w e d e m a致炎后1 h 1 h o u r a f t e r i n f l a m m a t i o n致炎后2 h 2 h o u r a f t e r i n f l a m m a t i o n致炎后4 h 4 h o u r a f t e r i n f l a m m a t i o n安溪肉桂提取物8(1 6) 0.5 0.5 2±0.1 7* 0.4 8±0.1 4* 0.4 6±0.1 6 0.3 4±0.1 6 8(1 6) 1 0.5 0±0.2 2* 0.4 0±0.1 5** 0.3 8±0.1 9 0.2 6±0.1 6*8(1 6) 2 0.4 7±0.1 6** 0.4 6±0.1 6* 0.3 8±0.1 6* 0.2 7±0.1 0*

    表7 大鼠棉球植入試驗結(jié)果(±SD)Table 7 Results of cotton ball implantation experiment in rats(±SD)

    表7 大鼠棉球植入試驗結(jié)果(±SD)Table 7 Results of cotton ball implantation experiment in rats(±SD)

    肉芽腫重量(m g)N e t w e i g h t o f r a t g r a n u l o m a陰性對照組 8(1 6) - 1 3 8.1 8±6 3.2 4陽性對照組 8(1 6) 0.6 3 9 6.1 5±4 9.5 9*組別T r e a t m e n t動物數(shù)(肉芽腫數(shù))N u m b e r o f a n i m a l劑量(g/k g)D o s a g e安溪肉桂提取物8(1 6) 0.5 9 0.3 2±3 1.7 1**8(1 6) 1 8 5.8 4±3 3.4 5**8(1 6) 2 7 0.0 5±3 3.1 7**

    2.2.3 對血清炎癥因子的影響

    與陰性對照組比較,陽性組及安溪肉桂提取物高劑量組(2 g/kg)的三種炎癥因子均有顯著性的下降(p<0.05)。安溪肉桂提取物低劑量(0.5 g/kg)和中劑量(1 g/kg)未見此效果。由上述結(jié)果可以看出安溪肉桂提取物(2 g/kg)可顯著性地降低大鼠血清中的 TNF-α、IL-6、IL-1β 含量(p<0.05)。

    表8 對大鼠血清炎癥因子的影響Table 8 Effect on serum inflammatory factors in rats

    3 討論

    王潤明[1]對0~7歲兒童咽部感染病原菌的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)了肺炎鏈球菌、普通變形桿菌、大腸埃希氏菌等。同時,在對清熱顆粒、清熱利咽茶和對急慢性咽炎藥物的體外抑菌性研究中,均使用到了乙型溶血型鏈球菌、肺炎鏈球菌和普通變形桿菌[2-4]。因此,研究選用了乙型溶血型鏈球菌、肺炎鏈球菌和普通變形桿菌這三種菌作為受試菌種。在預試驗研究中發(fā)現(xiàn),使用一般沖泡的方法進行提取獲得的提取液并沒有明顯的抑菌效果,因此隨后使用了有機試劑進行提取。較多研究發(fā)現(xiàn),黃酮對普通變形桿菌[5-6]、肺炎鏈球菌[7-8]和乙型溶血性鏈球菌[9-10]都有良好的抑菌作用,且黃酮對乙型溶血性鏈球菌的抑菌性要優(yōu)于肺炎鏈球菌,盡管所測肉桂中茶多酚含量不高,但其良好的抑菌效果可能與其兒茶素組成及黃酮類物質(zhì)占比有關(guān),具體結(jié)果還需要進一步驗證。

    體內(nèi)外試驗說明安溪肉桂提取物具有較明顯的抗炎作用,具有干預急性炎癥(足趾腫脹)和慢性炎癥(肉芽腫形成)的作用,并能減少炎癥因子的產(chǎn)生。根據(jù)保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范(2003版)可得出,動物試驗證明安溪肉桂茶具有一定的清咽保健功效,但還需要后續(xù)人體試食實驗來進一步驗證。

    猜你喜歡
    足趾棉球安溪
    可愛的棉球
    莫愁(2022年36期)2022-12-16 03:25:02
    可愛的棉球
    小棉球
    足趾及耳尖放血治療風熱客瞼型瞼腺炎驗案1則
    預防病毒
    和好,還是絕交
    除夕夜中的煙花
    安溪壽星愛品茗
    海峽姐妹(2016年2期)2016-02-27 15:15:57
    對足趾移植再造手指早期行下肢平衡功能訓練的研究
    足趾移植術(shù)后足部并發(fā)癥的臨床研究
    啦啦啦啦在线视频资源| 国产高清三级在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 老熟妇仑乱视频hdxx| 免费电影在线观看免费观看| 天美传媒精品一区二区| 91精品国产九色| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产午夜福利久久久久久| 国产免费av片在线观看野外av| 成人午夜高清在线视频| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 日本与韩国留学比较| 精品久久国产蜜桃| 1024手机看黄色片| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 联通29元200g的流量卡| or卡值多少钱| 国产精品久久久久久精品电影| 久久精品国产自在天天线| 国产精品免费一区二区三区在线| 最近视频中文字幕2019在线8| 搡老熟女国产l中国老女人| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 亚洲不卡免费看| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 日韩欧美三级三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 黄色配什么色好看| 赤兔流量卡办理| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲精品影视一区二区三区av| 69av精品久久久久久| 国产人妻一区二区三区在| 精品免费久久久久久久清纯| 国产高清激情床上av| 乱人视频在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲午夜理论影院| 麻豆成人av在线观看| 国产精品无大码| 亚洲av.av天堂| 精品久久国产蜜桃| 18禁在线播放成人免费| 久久午夜福利片| 日本欧美国产在线视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 少妇的逼水好多| 亚洲三级黄色毛片| 日日夜夜操网爽| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 色av中文字幕| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产精品久久久久久久久免| 91精品国产九色| 成年免费大片在线观看| 51国产日韩欧美| aaaaa片日本免费| 欧美色视频一区免费| 国产美女午夜福利| 真人一进一出gif抽搐免费| 禁无遮挡网站| 一本一本综合久久| 好男人在线观看高清免费视频| 国内精品宾馆在线| 桃色一区二区三区在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 人妻少妇偷人精品九色| 久久久国产成人精品二区| 极品教师在线视频| 99热这里只有精品一区| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲美女搞黄在线观看 | 日韩欧美 国产精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产伦精品一区二区三区四那| 69人妻影院| 国产高清有码在线观看视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 午夜精品久久久久久毛片777| 欧美极品一区二区三区四区| 国产免费男女视频| 国产乱人视频| 亚洲精品色激情综合| 一夜夜www| 两人在一起打扑克的视频| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲av二区三区四区| 男女啪啪激烈高潮av片| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久人人爽人人爽人人片va| 在线免费观看的www视频| 午夜日韩欧美国产| 一本精品99久久精品77| 亚洲天堂国产精品一区在线| av专区在线播放| 在线播放无遮挡| 亚洲在线自拍视频| 日韩欧美在线乱码| 尾随美女入室| 国内精品美女久久久久久| 亚洲美女黄片视频| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲av美国av| 哪里可以看免费的av片| 免费大片18禁| 午夜老司机福利剧场| 亚洲成人久久爱视频| 麻豆av噜噜一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲精华国产精华精| 最近在线观看免费完整版| 亚洲av成人av| 深夜精品福利| 乱人视频在线观看| 久久久久九九精品影院| 麻豆成人午夜福利视频| 一进一出抽搐动态| 色av中文字幕| 天堂网av新在线| 韩国av一区二区三区四区| 国产黄片美女视频| 欧美bdsm另类| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 久久久久久久久久久丰满 | 日本黄色片子视频| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av熟女| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲性夜色夜夜综合| 综合色av麻豆| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美性感艳星| 亚洲欧美清纯卡通| 99久国产av精品| 免费人成在线观看视频色| 成年版毛片免费区| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一a级毛片在线观看| 91在线观看av| 欧美日本视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲精品在线观看二区| 99久久精品热视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产精品久久视频播放| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 一级av片app| 精品久久久久久久久久久久久| 欧美潮喷喷水| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲精品成人久久久久久| 99热网站在线观看| 色综合站精品国产| 一本久久中文字幕| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费av观看视频| 欧美区成人在线视频| www日本黄色视频网| 有码 亚洲区| 高清毛片免费观看视频网站| 久久精品国产亚洲网站| 国产久久久一区二区三区| 国产在视频线在精品| 在线播放无遮挡| 身体一侧抽搐| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美一区二区国产精品久久精品| 欧美成人a在线观看| 三级毛片av免费| 99热这里只有是精品50| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱| or卡值多少钱| 日本欧美国产在线视频| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日韩欧美在线乱码| 免费av不卡在线播放| 日韩欧美精品v在线| 成年女人永久免费观看视频| 中国美女看黄片| 性欧美人与动物交配| 人人妻人人看人人澡| 99视频精品全部免费 在线| 国产爱豆传媒在线观看| 亚州av有码| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产成人影院久久av| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 黄片wwwwww| 一级毛片久久久久久久久女| 精品一区二区三区视频在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 一个人看的www免费观看视频| 久久久国产成人免费| 精品日产1卡2卡| 看片在线看免费视频| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 变态另类丝袜制服| 春色校园在线视频观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美激情国产日韩精品一区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 深夜精品福利| www.www免费av| 亚洲不卡免费看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 不卡一级毛片| 色噜噜av男人的天堂激情| а√天堂www在线а√下载| 免费在线观看成人毛片| av在线老鸭窝| 一区二区三区激情视频| 亚洲av.av天堂| www.www免费av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲最大成人中文| 亚洲成人精品中文字幕电影| 有码 亚洲区| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费av观看视频| 久久精品人妻少妇| 长腿黑丝高跟| 最近在线观看免费完整版| 亚洲人成网站高清观看| 国产视频一区二区在线看| 精品一区二区免费观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品99久久久久久久久| 97碰自拍视频| 听说在线观看完整版免费高清| 成人性生交大片免费视频hd| 久久精品国产亚洲网站| 日本三级黄在线观看| 免费av观看视频| 此物有八面人人有两片| 此物有八面人人有两片| 五月玫瑰六月丁香| 久久久久久国产a免费观看| videossex国产| 欧美高清性xxxxhd video| 黄色配什么色好看| 男人舔女人下体高潮全视频| 一夜夜www| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 免费看a级黄色片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 日韩欧美精品免费久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产成人av教育| 精品一区二区三区av网在线观看| 在线观看66精品国产| 精品国产三级普通话版| 欧美在线一区亚洲| 亚洲人成网站在线播| 日韩精品中文字幕看吧| 日本与韩国留学比较| 听说在线观看完整版免费高清| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 99热这里只有是精品50| 久久精品91蜜桃| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美在线一区亚洲| 欧美成人免费av一区二区三区| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产欧美日韩一区二区精品| 免费观看精品视频网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 嫩草影视91久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产69精品久久久久777片| 欧美日韩国产亚洲二区| 色综合亚洲欧美另类图片| 夜夜爽天天搞| 精品久久久久久久久久久久久| 全区人妻精品视频| 美女黄网站色视频| 精品一区二区三区视频在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产免费一级a男人的天堂| 免费高清视频大片| 亚洲国产色片| 人人妻人人看人人澡| av在线观看视频网站免费| 精品久久国产蜜桃| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久久国内视频| 久久人妻av系列| 亚洲成人久久性| 久久久久久久午夜电影| 很黄的视频免费| 91在线观看av| 日本色播在线视频| 亚洲黑人精品在线| 直男gayav资源| 动漫黄色视频在线观看| 精品午夜福利在线看| 午夜激情欧美在线| 伦精品一区二区三区| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲精品影视一区二区三区av| 黄色丝袜av网址大全| 在线观看av片永久免费下载| 九九热线精品视视频播放| 能在线免费观看的黄片| 中文资源天堂在线| 日韩中字成人| 97热精品久久久久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久精品人妻少妇| 欧美一区二区亚洲| 欧美成人免费av一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美bdsm另类| 男插女下体视频免费在线播放| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲乱码一区二区免费版| av视频在线观看入口| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 九色成人免费人妻av| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 草草在线视频免费看| 麻豆国产av国片精品| 色综合婷婷激情| 国内揄拍国产精品人妻在线| 桃红色精品国产亚洲av| 赤兔流量卡办理| 美女免费视频网站| 亚洲av熟女| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产高潮美女av| 乱人视频在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| av福利片在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲av成人av| 成人鲁丝片一二三区免费| 淫妇啪啪啪对白视频| 免费观看在线日韩| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 欧美一区二区亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品久久久久久久久av| 美女高潮的动态| 白带黄色成豆腐渣| 波多野结衣高清作品| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久久久久久久中文| 男人舔女人下体高潮全视频| 天天躁日日操中文字幕| 免费观看精品视频网站| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 色播亚洲综合网| 美女被艹到高潮喷水动态| 午夜影院日韩av| 欧美黑人巨大hd| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲无线在线观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费观看在线日韩| 午夜亚洲福利在线播放| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩欧美 国产精品| 岛国在线免费视频观看| 天堂影院成人在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| bbb黄色大片| 网址你懂的国产日韩在线| 有码 亚洲区| 国产精品久久久久久久久免| 小说图片视频综合网站| 十八禁网站免费在线| 极品教师在线视频| 在线观看免费视频日本深夜| 久久精品影院6| 亚洲欧美精品综合久久99| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品久久久久久成人av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美激情在线99| 免费在线观看日本一区| eeuss影院久久| 国产人妻一区二区三区在| 黄色一级大片看看| 99热只有精品国产| 一级黄片播放器| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久精品综合一区二区三区| 91精品国产九色| 久久热精品热| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产在线男女| 美女黄网站色视频| 欧美3d第一页| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 偷拍熟女少妇极品色| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产av在哪里看| 国内精品宾馆在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久精品国产清高在天天线| 久久99热6这里只有精品| 国产极品精品免费视频能看的| 91在线精品国自产拍蜜月| 男女那种视频在线观看| 午夜福利18| 1024手机看黄色片| 搞女人的毛片| 99久久中文字幕三级久久日本| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲av五月六月丁香网| 国产黄a三级三级三级人| 中出人妻视频一区二区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 一个人免费在线观看电影| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产三级在线视频| 一进一出抽搐动态| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲中文字幕日韩| 国产精品,欧美在线| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美不卡视频在线免费观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 如何舔出高潮| 村上凉子中文字幕在线| 国产日本99.免费观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 男人的好看免费观看在线视频| 97热精品久久久久久| 高清毛片免费观看视频网站| 伦精品一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 九九在线视频观看精品| 欧美日韩乱码在线| 久久久久久久久久成人| 超碰av人人做人人爽久久| 免费av观看视频| 免费电影在线观看免费观看| 九色成人免费人妻av| 黄色丝袜av网址大全| 免费看a级黄色片| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲图色成人| 色在线成人网| 精品人妻熟女av久视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产一区二区在线观看日韩| 干丝袜人妻中文字幕| 22中文网久久字幕| 午夜老司机福利剧场| 免费无遮挡裸体视频| 天美传媒精品一区二区| 成人一区二区视频在线观看| 久久中文看片网| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品成人久久久久久| 久久精品国产亚洲网站| 人妻夜夜爽99麻豆av| 免费观看的影片在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 岛国在线免费视频观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久久久久午夜电影| 99热这里只有是精品50| www.色视频.com| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 午夜激情福利司机影院| 日韩欧美 国产精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国语自产精品视频在线第100页| 一个人免费在线观看电影| 91在线观看av| 丰满乱子伦码专区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品人妻久久久影院| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲精品成人久久久久久| 如何舔出高潮| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产日本99.免费观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 男人和女人高潮做爰伦理| 熟女电影av网| 午夜老司机福利剧场| 黄色一级大片看看| 超碰av人人做人人爽久久| 国产亚洲精品av在线| 极品教师在线免费播放| 在线播放无遮挡| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 国产免费男女视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 真人做人爱边吃奶动态| 哪里可以看免费的av片| 午夜精品一区二区三区免费看| 88av欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av成人av| 99热精品在线国产| 国产男人的电影天堂91| 国产色爽女视频免费观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 99久久成人亚洲精品观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 成年免费大片在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜影院日韩av| 日本黄色片子视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 在线观看舔阴道视频| 乱人视频在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 成人精品一区二区免费| 久久久久久大精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 偷拍熟女少妇极品色| 欧美人与善性xxx| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲性久久影院| 91久久精品国产一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 长腿黑丝高跟| 成人美女网站在线观看视频| АⅤ资源中文在线天堂| 18+在线观看网站| 亚洲精品国产成人久久av| 波多野结衣巨乳人妻| 99久久中文字幕三级久久日本| 日本一本二区三区精品| 亚洲熟妇熟女久久| 窝窝影院91人妻| 嫩草影院精品99| 免费看光身美女| 日韩av在线大香蕉| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99久久精品国产国产毛片| 色综合色国产| 观看美女的网站| 桃色一区二区三区在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 能在线免费观看的黄片| 国产极品精品免费视频能看的| videossex国产| 久久精品91蜜桃| 亚洲va在线va天堂va国产| av福利片在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久6这里有精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美激情在线99| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 禁无遮挡网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| 久99久视频精品免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产不卡一卡二|