婦糜康陰道栓長期給藥對(duì)家兔血液生理生化指標(biāo)的影響

孟 莉 向紹杰 劉小虎 宋達(dá)夫 張慧穎 賈天柱

(1.遼寧省中醫(yī)藥研究院，沈陽 110034)(2. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，大連 116600)

婦糜康陰道栓是由川椒、白癬皮、地骨皮等幾味中藥組成，具有清熱解毒，燥濕、殺蟲止癢功效。用于治療濕熱下注所致的帶下量多、外陰瘙癢，灼熱疼痛等陰道炎。前期藥理實(shí)驗(yàn)表明，婦糜康陰道栓對(duì)白色念球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌有抑制作用，能提高磷酸組織胺所致豚鼠瘙癢反應(yīng)的致癢閾。為進(jìn)一步考察其安全性，以便更好地應(yīng)用于臨床，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)《中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》對(duì)婦糜康陰道栓進(jìn)行家兔長期毒性實(shí)驗(yàn)研究[1]，觀察其對(duì)血液生理生化指標(biāo)的影響，為臨床安全用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

白色家兔48只，雌性，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，由沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購進(jìn)，許可證號(hào)：SCXK(遼)2009-0002。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于遼寧省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)： SYXK(遼) 2012-0003；實(shí)驗(yàn)溫度20～23 ℃，濕度55%～60%。照明時(shí)間采用為10 h(明)/14 h(暗)交替，顆粒飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，許可證號(hào): SCXK(京) 2009-0012。

1.2 受試藥物與試劑

婦糜康陰道栓浸膏粉，每克浸膏粉含9.52 g生藥，批號(hào)：20120701-0。賦形劑為PEG400和PEG4000按重量比1∶1混合。婦糜康陰道栓浸膏粉、賦形劑均由遼寧中醫(yī)研究院提供。血細(xì)胞分析儀用稀釋液，批號(hào)：120911H18；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶試劑盒，批號(hào)12-1023P；天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶試劑盒，批號(hào)12-1024P；堿性磷酸酶試劑盒，批號(hào)12-0912P；白蛋白試劑盒，批號(hào)11-0926；總蛋白試劑盒，批號(hào)11-0510；谷氨酰轉(zhuǎn)移酶試劑盒，批號(hào)12-1114P；血清總膽紅素測定通用試劑盒，批號(hào)12-0915P；總膽固醇試劑盒，批號(hào)12-1015P；甘油三酯試劑盒，批號(hào)12-0828P；尿素氮試劑盒，批號(hào)12-0922P；肌酐液體試劑，批號(hào)12-1015；血糖試劑盒，批號(hào)12-0926P；肌酸磷酸激酶試劑盒，批號(hào)12-0905P，均由金斯?fàn)柼峁?；凝血酶原試劑盒，批?hào)STG20101，由北京世帝公司提供。

1.3 儀器

ABX Pentra 60血細(xì)胞分析儀，上海科華卓越；330全自動(dòng)生化分析儀，北京世帝科學(xué)儀器公司；LG-PABER型血小板聚集凝血因子分析儀，美國雙杰兄弟集團(tuán)有限公司。

1.4 方法[2-7]

1.4.1分組與給藥:健康雌性家兔48只，按體質(zhì)量隨機(jī)分成4組，賦形劑對(duì)照組及婦糜康陰道栓浸膏粉低、中、高3個(gè)劑量組，每組12只。婦糜康陰道栓浸膏粉按0.952 g/kg、2.856 g/kg、8.586 g/kg體質(zhì)量(相當(dāng)于臨床擬給藥劑量的6、20、60倍)陰道給藥，每天1次，連續(xù)給藥6個(gè)月。

1.4.2觀察指標(biāo): 試驗(yàn)期間，每日觀察受試家兔的行為體征、外觀形態(tài)及藥物可能產(chǎn)生的不良反應(yīng)等。每周稱家兔體質(zhì)量1次，觀察其體質(zhì)量最快的變化情況。分別于給藥6個(gè)月及停藥4周后，各組分別取6只家兔，禁食不禁水18 h，麻醉，腹總動(dòng)脈采血，檢測血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 對(duì)家兔一般狀況、體質(zhì)量的影響

給藥期間，各組受試家兔被毛光澤、口周、鼻黏膜無破潰、活動(dòng)正常，攝食、飲水、大小便均未見異常，亦未發(fā)現(xiàn)因藥物中毒引起的受試動(dòng)物死亡或其它毒副反應(yīng)發(fā)生。各給藥組受試家兔體質(zhì)量與賦形劑對(duì)照組比差異無顯著性(P>0.05)。

2.2 對(duì)血液生理指標(biāo)的影響

給藥6個(gè)月及停藥4周后，各組受試家兔血液生理指標(biāo)測試，結(jié)果見表1、2。由結(jié)果可知，婦糜康陰道栓浸膏粉低、中劑量組家兔血液生理指標(biāo)與賦形劑對(duì)照組比差異無顯著性(P>0.05)。婦糜康陰道栓浸膏粉高劑量組家兔紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細(xì)胞壓積與賦形劑對(duì)照組比均明顯增多(P<0.05)，其它血液生理指標(biāo)與賦形劑對(duì)照組比差異無顯著性(P>0.05)。停藥4周后，恢復(fù)正常。給藥組對(duì)血液其它生理指標(biāo)無明顯影響(P>0.05)。

表1 婦糜康陰道栓浸膏粉陰道給藥6個(gè)月對(duì)家兔血液生理指標(biāo)的影響Table 1 Effect of Administration of Bomixiao Vaginal Suppository on blood hematology indexes in rabbits after six

注:賦形劑與對(duì)照組比較：*P<0.05

Note:vs.normal control group：*P<0.05

2.3 對(duì)血液生化指標(biāo)的影響

給藥6個(gè)月及停藥4周后，各組受試家兔血液生化學(xué)指標(biāo)測試結(jié)果見表3、4。由結(jié)果可知，各給藥組受試家兔血液生化學(xué)指標(biāo)與空白對(duì)照組比，差異無顯著性(P>0.05)。

表2 婦糜康陰道栓浸膏粉陰道給藥對(duì)停藥4周后家兔血液生化指標(biāo)的影響Table 2 Effect of Administration of Bomixiao Vaginal Suppository on blood hematology indexes in rabbits after drug withdrawal for 4

表3 婦糜康陰道栓浸膏粉陰道給藥6個(gè)月對(duì)家兔血液生化指標(biāo)的影響Table 3 Effect of Administration of Bomixiao Vaginal Suppository on blood biochemical indexes in rabbits after six

表4 婦糜康陰道栓浸膏粉陰道給藥停藥4周后對(duì)家兔血液生化學(xué)的影響Table 4 Effect of Administration of Bomixiao Vaginal Suppository on blood biochemical indexes in rabbits after drug withdrawal for 4

3 討論

長期毒性試驗(yàn)是指試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多日接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)。它是藥物非臨床安全性研究的有機(jī)組成部分，是藥物非臨床毒理學(xué)研究中綜合性最強(qiáng)、獲得信息最多和對(duì)臨床指導(dǎo)意義最大的一項(xiàng)毒理學(xué)研究，而血液學(xué)和血液生化檢測是長期毒性試驗(yàn)重要的檢測指標(biāo)之一，對(duì)于判定毒性的劑量和靶器官都有重要意義[8-9]。

本課題組前期進(jìn)行了婦糜康陰道栓的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究，未測得LD50，最大耐受量(MTD)8.568 g生藥/kg，相當(dāng)于擬臨床日用量的60倍。為進(jìn)一步探討婦糜康陰道栓的安全性，本文考察了婦糜康陰道栓長期給藥對(duì)家兔血液學(xué)及血液生化學(xué)的影響。按照《中藥、天然藥物長期毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[1]，本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高(0.952 g/kg、2.856 g/kg、8.586 g/kg)3個(gè)劑量組，分別相當(dāng)于人臨床擬用量的6倍、20倍和60倍。給藥6個(gè)月及停藥4周后，各給藥組受試動(dòng)物一般行為狀態(tài)及體質(zhì)量增長與賦形劑對(duì)照組相比差異無顯著性(P>0.05)，婦糜康陰道栓浸膏粉高劑量組(8.568 g/kg)受試家兔比賦形劑對(duì)照組家兔的紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細(xì)胞壓積增加(P<0.05)，停藥4周后，恢復(fù)正常。說明婦糜康陰道栓浸膏粉高劑量組對(duì)受試家兔組紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細(xì)胞壓積的影響是可逆的，至于高劑量組為何引起這3個(gè)指標(biāo)變化，還有待今后進(jìn)一步研究。。給藥6個(gè)月及恢復(fù)4周后，各給藥組受試家兔血液生化學(xué)指標(biāo)與賦形劑對(duì)照組比差異均無顯著性(P>0.05)。

綜上所述，家兔陰道給予婦糜康陰道栓浸膏粉2.856 g/kg，相當(dāng)于臨床擬用量的20倍，對(duì)家兔血液學(xué)及血液生理生化指標(biāo)沒有影響。提示婦糜康陰道栓家兔陰道給藥安全劑量應(yīng)低于2.865 g/kg。