鋸緣閉殼龜模式種的飼養(yǎng)、繁殖要素

路 斌 曹鑫盛 張鳳東 潘建洲 左 騰 陳成勛

鋸緣閉殼龜（Gray，1862）舊稱鋸緣攝龜（Gray，1862）（王培潮，2000），俗稱八角龜、八棱龜、方龜?shù)?。屬淡水龜亞科，閉殼龜屬的一種，在中國分布于廣東、廣西、海南、湖南、云南等地區(qū)（van Dijk et al.，2012）。鋸緣閉殼龜不僅能用于炮制傳統(tǒng)名貴中藥——龜板，還是棲息地原住民所喜愛的食物，并且隨著寵物龜市場的發(fā)展，其寵物價(jià)值還在逐漸增加。該物種為我國及國際自然保護(hù)聯(lián)盟（IUCN）共同列入的瀕危（EN）物種（趙爾宓，1998），甚至于2000年列入瀕危野生動植物國際貿(mào)易公約（CITES）附錄Ⅱ（曾巖，2011）。

因此加強(qiáng)保護(hù)該物種的野生種群，控制非法貿(mào)易，推進(jìn)該物種人工飼養(yǎng)、繁殖相關(guān)研究的進(jìn)展尤為重要。2015年起，試驗(yàn)組聯(lián)合廣西（南寧、桂林、防城港），廣東（茂名、中山、順德）兩地共6戶具有相關(guān)資質(zhì)的養(yǎng)殖戶及全國各地愛好者共12名，對鋸緣閉殼龜?shù)臋z疫防疫、人工飼養(yǎng)、疾病防治等方面進(jìn)行了大膽的探索和研究。在廣西大學(xué)、天津農(nóng)學(xué)院的多名教授的指導(dǎo)下解決了諸多養(yǎng)殖問題，研究中試驗(yàn)組協(xié)助引種的鋸緣閉殼龜首年存活率超過95%，總結(jié)了一定的經(jīng)驗(yàn)和方法。

1 材料與方法

1.1 養(yǎng)殖環(huán)境

試驗(yàn)地點(diǎn)位于廣西省桂林市永?？h（109°36′50″～110°14′19″E，24°37′48″～25°36′39″N），該地區(qū)為亞熱帶季風(fēng)氣候，平均海拔148m，森林覆蓋率74.8%，臺風(fēng)影響小，年平均降水量2000mm以上，年平均氣溫18.8℃。在民房內(nèi)搭建養(yǎng)殖區(qū)（圖1），選取1.5m×4m的室內(nèi)陽臺，設(shè)長3.5m、高2m的通風(fēng)窗（圖1：1），朝西南方向，地面采用糙面瓷磚反鋪的方式，防止鋸緣閉殼龜在求偶、交配、攝食等活動時滑倒。養(yǎng)殖區(qū)通風(fēng)良好，日常光照強(qiáng)度可達(dá)10000Lx。設(shè)水槽4個（圖1：2），水槽長35cm×寬25cm×高10cm，以滿足飲水及涉水的需求。于每年6-8月在養(yǎng)殖區(qū)加入長45cm×寬40cm×高10cm的產(chǎn)卵盆2個（圖1：3），底部鉆小孔透水防積，內(nèi)置8cm厚的消毒腐殖土，供產(chǎn)卵使用。搭設(shè)1m×1m及1m×2m的2個木質(zhì)種植架（圖1：4），架高50cm，起遮陽等作用。在養(yǎng)殖區(qū)內(nèi)陽光直射區(qū)域及非陽光直射區(qū)域各設(shè)1測量點(diǎn)（圖1：5），于每日2：00、8：00、14：00、20：00測量溫度和相對濕度，并每日清潔水槽及養(yǎng)殖區(qū)地面。

圖1 鋸緣閉殼龜養(yǎng)殖區(qū)示意圖

表1 各試驗(yàn)組的鋸緣閉殼龜模式種飼養(yǎng)狀況

表2 鋸緣閉殼龜種龜餌料配方及營養(yǎng)成分

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)動物

試驗(yàn)組自2014年起探尋鋸緣閉殼龜人工養(yǎng)殖、繁殖技術(shù)，至2016年止，將試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)后，于同年聯(lián)合養(yǎng)殖戶共計(jì)6戶，進(jìn)行鋸緣閉殼龜模式種的養(yǎng)殖生產(chǎn)試驗(yàn)。試驗(yàn)共引種鋸緣閉殼龜模式種147只，均采用相似養(yǎng)殖環(huán)境，相同飼養(yǎng)方法及孵化方法進(jìn)行養(yǎng)殖。經(jīng)過1年的飼養(yǎng)，該龜死亡率均低于10%，試驗(yàn)情況如下（表1）。

1.2.2 試驗(yàn)材料

電子數(shù)顯卡尺（150T， Meinaite公司）；爬蟲專用羊毛防滑地毯（美國zoomed公司）；電子天平（DT2000，美國雙杰公司）；紐扣式自動溫濕度記錄儀（DS1923，Maxim公司）；溫控器（JCM-33A-A/M BK，日本神港SHINKO公司）；顯微鏡（13395H2X，Leica公司）；雙筒實(shí)體解剖鏡（SMZ-168，美國motic公司）；水浴鍋（HH-6，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）；恒溫?fù)u床（KYC-10B，上海福瑪試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；低溫高速離心機(jī)（Microfuge 22R Centrifuge，美國Beckman公司）；龜用開口器；鑷子；注射器；藥物；餌料；天然乳膠管；標(biāo)記筆。

1.2.3 方法

試驗(yàn)組在適宜的引種時間，選擇合法引種渠道，挑選適宜引種的體質(zhì)較好的鋸緣閉殼龜模式種親龜（雄性大于400g，雌性大于600g）進(jìn)行引種，雌雄配比為雄性∶雌性等于1∶2.5。引種后應(yīng)在檢疫、消毒后方可引入養(yǎng)殖區(qū)，引入養(yǎng)殖區(qū)后進(jìn)行編號、原生動物等消化道病原驅(qū)殺、對應(yīng)疾病治療、開食馴餌后方可進(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)。

主要餌料選擇特制半水龜糧（表2），其營養(yǎng)組成測定均參考相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)方法。每周添加1次鮮活餌料（新鮮水果、蘑菇及鮮活昆蟲等）進(jìn)行混合投喂（鮮活餌料與龜糧的濕重比為4：1），并在活動區(qū)掛設(shè)墨魚骨（海螵蛸），供其自由啃食補(bǔ)充鈣質(zhì)。

2 飼養(yǎng)、繁殖關(guān)鍵技術(shù)

2.1 鋸緣閉殼龜引種

鋸緣閉殼龜目前尚無具有一定規(guī)模的繁殖單位，因此種源主要依賴自非法捕捉、走私者處解救；辦理相關(guān)證明如“獵捕證”后依法依規(guī)由其分布區(qū)域捕捉；以及在市場或其他養(yǎng)殖戶處購買。但是目前能引種的鋸緣閉殼龜大部分來自于越南等東南亞地區(qū)，運(yùn)輸至我國后往往經(jīng)過長時間高密度運(yùn)輸、冰塊接觸降溫等強(qiáng)應(yīng)激因素影響。并且有部分龜在捕捉時被獵犬咬傷、被釣鉤刺破消化道、被陷阱機(jī)械損傷甚至有些商販為了提高鋸緣閉殼龜?shù)捏w質(zhì)量在出售前向龜腹腔注射水等液體。因此一定要嚴(yán)格把控引種質(zhì)量，避免引種后出現(xiàn)疾病甚至死亡。

2.2 引種時間

鋸緣閉殼龜主要棲息在熱帶及亞熱帶地區(qū)，是一種陸棲性較強(qiáng)的龜類，但是當(dāng)氣溫低于16℃時明顯能觀察到其個體活性下降，抗應(yīng)激性也將會變差。因此在我國兩廣地區(qū)引種的時間建議在春季4-6月及秋季9-11月進(jìn)行（溫度20～28℃為宜）。經(jīng)過4年的摸索，最適宜引種的時間為9-11月，因?yàn)樵?016年4-6月引種時，曾觀察到懷卵雌性個體因運(yùn)輸顛簸導(dǎo)致輸卵管內(nèi)成型龜卵壓迫肝臟導(dǎo)致肝臟機(jī)械損傷而死亡的案例。

2.3 外觀選種方法

挑選引種親龜前，其重點(diǎn)是親龜?shù)慕】?，首先確認(rèn)親龜體表（皮膚和外殼）無傷口、潰爛、鱗片脫落和炎性紅腫；其次觀察親龜眼睛是否有神，紅腫，不嗜睡，口腔無糜爛物，舌部顏色是否呈健康的粉色；最后輕捏親龜前腿，是否肌肉飽滿、有力，同時觀察其爬行姿態(tài)是否協(xié)調(diào)，是否能四肢支撐軀體爬行而不是前肢拖行。

選擇鋸緣閉殼龜時，應(yīng)當(dāng)優(yōu)先選擇背甲盾片年輪狀凹刻明顯、個體大、健壯、雙目有神、體表光潔無殘損、肌肉豐滿有力、頭頸伸縮自如、泄殖孔滾圓開闊的成熟的個體。

其性成熟的雄性個體一般體質(zhì)量在400～800g，雌性個體體質(zhì)量在600～1000g，以個體大，背甲盾片年輪狀凹刻不平滑者為好。市場上偶見背甲盾片年輪狀凹刻極其平滑且頭喙部角質(zhì)較為厚重的大個體，這些往往是老齡親龜，沒有用于繁殖的價(jià)值。

2.4 測量選種方法

在鋸緣閉殼龜飼養(yǎng)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)鋸緣閉殼龜?shù)捏w質(zhì)量與其腹甲長度、寬度及外殼高度存在著關(guān)聯(lián)。并且通過對鋸緣閉殼龜野生及人工飼養(yǎng)一年以上的個體各10只進(jìn)行測量，得出鋸緣閉殼龜體質(zhì)量與腹甲長度的相關(guān)性最高，并且野生鋸緣閉殼龜?shù)南嚓P(guān)回歸曲線與人工飼養(yǎng)1年以上個體的存在顯著差異（p＞0.05）（圖2、圖3）。

野生個體體質(zhì)量與腹甲長度的回歸方程為：Y=6.795807X - 490.652159。

人工飼養(yǎng)一年以上個體體質(zhì)量與腹甲長度的回歸方程為：Y=7.810972X-585.150070。

在實(shí)際飼養(yǎng)中也發(fā)現(xiàn)在引種的鋸緣閉殼龜同等腹甲長度的條件下，體質(zhì)量更大的個體存活率更高，體質(zhì)更好。

圖2 野生鋸緣閉殼龜個體體質(zhì)量與腹甲長度的回歸曲線

圖3 人工飼養(yǎng)一年以上鋸緣閉殼龜體質(zhì)量與腹甲長度的回歸曲線

2.5 鑒定性別

可通過外形區(qū)分鋸緣閉殼龜性成熟個體的性別，其中雄性個體往往外殼狹長，腹甲有較明顯的凹陷，并且雄性尾部較為粗大，往往可以通過這些可見特征進(jìn)行區(qū)分。但是在實(shí)際條件下進(jìn)行性別區(qū)分，還是比較依賴操作者的經(jīng)驗(yàn)和熟練程度，并且因個體差異還是會存在誤差。因此在查閱大量文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)可采用內(nèi)窺鏡由泄殖孔探入的檢查方法能準(zhǔn)確地鑒定鋸緣閉殼龜性別。

2.6 檢疫防疫

新引入親龜，尤其是野生個體，普遍攜帶寄生蟲及其他病原微生物。因此在引入親龜后，需要與健康個體隔離飼養(yǎng)，隔離區(qū)域盡量遠(yuǎn)離飼養(yǎng)區(qū)，并確保工具不能混用。一般隔離檢疫時間為2個月，隔離期間需要進(jìn)行統(tǒng)一的消毒及寄生蟲驅(qū)殺，并定期檢查記錄，有異常情況及時處理。

2.7 人工馴餌

大多數(shù)鋸緣閉殼龜在經(jīng)過引種過程的刺激以及生存環(huán)境的變化后，會出現(xiàn)較強(qiáng)的應(yīng)激反應(yīng)，此時應(yīng)在消毒后給予新引進(jìn)親龜維生素C藥浴以增強(qiáng)其抗應(yīng)激能力并且在親龜引入后前三天不建議進(jìn)行投喂。

新引入個體通常較為膽怯，具有較強(qiáng)的負(fù)趨光性（尋找躲避），當(dāng)親龜開始適應(yīng)環(huán)境，不再緊縮殼內(nèi)而是開始探索環(huán)境后，可以進(jìn)行人工誘食。經(jīng)過試驗(yàn)，誘食性最佳的餌料為環(huán)毛蚓、熟香蕉、番茄及蠕動的大麥蟲。在誘食餌料投喂后健康的個體會注視、聞嗅食物，并試圖取食，同時觀察到當(dāng)某一個體開始攝食時，其視野內(nèi)的其他個體也會被吸引，從而開始索餌。

2.8 交配與交配創(chuàng)傷

鋸緣閉殼龜在交配時雄性會啃咬雌龜?shù)念i盾，很多時候會導(dǎo)致雌性的皮膚破裂甚至頸盾缺損（圖4），同時雄性的鋸緣閉殼龜也會出現(xiàn)較為嚴(yán)重的求偶打斗現(xiàn)象。因此在鋸緣閉殼龜親龜飼養(yǎng)時，尤其是交配期需要將雌性和雄性分開飼養(yǎng)，如果有條件雄性個體應(yīng)當(dāng)單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，避免不必要的損失。

圖4 因交配頸盾缺損的鋸緣閉殼龜雌性個體

2.9 產(chǎn)卵及孵化記錄

鋸緣閉殼龜?shù)姆敝持饕譃樗膫€階段：求偶發(fā)情；爬背交配；營巢產(chǎn)卵；龜卵孵化。人工養(yǎng)殖條件下，鋸緣閉殼龜求偶發(fā)情、爬背交配每年4-11月均有發(fā)生，高峰期為每年5-6月，平均交配成功率為11.7%；營巢產(chǎn)卵時間為每年6-8月，成年雌性個體每年產(chǎn)卵1～4窩，每窩產(chǎn)1～3枚，正常龜卵質(zhì)量為（13.59±2.03，n=65）g，卵長徑（38.985±7.335，n=65）mm，卵短徑（23.22±2.43，n=65）mm，龜卵孵化時間（91.5±5.5，n=15）日。

3 常見疾病與分析

3.1 寄生生物感染

3.1.1 體表寄生生物感染

鋸緣閉殼龜常見體外寄生生物主要是山蛭、軟蜱，其中尤其以軟蜱最為常見，均多見于親龜腿窩或脖頸上。山蛭可用氯化鈉、生石灰等直接殺滅，軟蜱則可用細(xì)線扎緊軟蜱口器刺入皮膚部分的根部，小心拔除防止口器斷裂引起感染，并需要對傷口進(jìn)行消毒、抗感染處理。

3.1.2 原生動物感染

新引入的親龜由于各種刺激的存在，均易出現(xiàn)免疫力下降的現(xiàn)象，此時消化道內(nèi)原生動物就非常容易暴發(fā)、感染，常見的原生動物感染源有：毛滴蟲、球蟲及變形蟲。在試驗(yàn)過程中，采用口服硝基咪唑類抗生素——奧硝唑（用量100～250mg/kg）對消化道內(nèi)原生動物進(jìn)行驅(qū)殺，同時還能殺滅、抑制腸道內(nèi)部分有害菌類的暴發(fā)。（圖5）

圖5 鋸緣閉殼龜后腸內(nèi)寄生蟲卵或原生動物孢囊

3.1.3 消化道寄生蟲感染

鋸緣閉殼龜野生個體消化道寄生蟲數(shù)量通常較多，其中常見種類主要為線蟲動物門的蛔蟲、蟯蟲，扁形動物門的絳蟲和棘頭動物門的棘頭蟲等。在本試驗(yàn)中選擇口服左旋咪唑（用量15mg/kg）配合肌肉注射伊維菌素（用量0.05mg/kg）治療消化道寄生蟲感染，并在實(shí)踐中得到了較好的反饋（圖5）。

3.2 病原微生物感染

3.2.1 皮膚感染和甲殼損傷

龜類在運(yùn)輸過程中，非常容易因?yàn)榕鲎病⒛Σ梁蜖坷仍斐赏鈧l(fā)皮膚感染和甲殼損傷，引發(fā)感染。除此之外，鋸緣閉殼龜作為陸地棲息習(xí)性較強(qiáng)的龜類，如果長期飼養(yǎng)在過于潮濕且密閉的環(huán)境中，也非常容易導(dǎo)致外殼、皮膚感染，出現(xiàn)潰爛。因此在鋸緣閉殼龜飼養(yǎng)時應(yīng)給予其自由選擇干濕度的環(huán)境，例如較干旱的環(huán)境搭配飲水盆的組合。

3.2.2 細(xì)菌性消化道感染

鋸緣閉殼龜新引進(jìn)個體的腸道細(xì)菌感染常常伴隨著原生動物感染共同發(fā)生，其最主要的癥狀為病龜乏力、嗜睡、糞便惡臭并成果凍狀（雞蛋清狀）。主要病原為點(diǎn)狀氣單胞菌、大腸桿菌、嗜水氣單胞菌等，驅(qū)殺原生動物的奧硝唑?qū)捬蹙延休^強(qiáng)的殺滅作用，如果感染嚴(yán)重可配合恩諾沙星等抗生素共同投喂。

3.3 胃插管給藥

消化道原生動物或細(xì)菌感染嚴(yán)重的個體往往嗜睡且出現(xiàn)食欲廢絕癥狀，甚至出現(xiàn)便血、肢體腫脹等癥狀。此時藥浴和拌餌投喂均難以治愈，應(yīng)選用插胃管的方式經(jīng)胃部給藥。試驗(yàn)組曾對鋸緣閉殼龜消化道進(jìn)行解剖，其結(jié)構(gòu)與地龜非常相似，因此在胃管插入時可參考地龜?shù)南澜Y(jié)構(gòu)，使用無毒軟乳膠管插入，膠管另一端連接注射器給藥。在2016年時，曾記錄到養(yǎng)殖戶直接經(jīng)口灌喂藥液，導(dǎo)致藥液進(jìn)入肺部引起鋸緣閉殼龜肺炎的案例。

4 分析與討論

4.1 雌雄飼養(yǎng)比例

理論上鋸緣閉殼龜雌性個體數(shù)量一定的條件下，龜卵受精率、孵化率與雄性的數(shù)量成正比，但考慮到雄性需要單獨(dú)隔離飼養(yǎng)，空間成本較高。因此本試驗(yàn)中雌雄飼養(yǎng)比例為1∶2.5，經(jīng)統(tǒng)計(jì)，鋸緣閉殼龜繁殖率、受精率、交配率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他文章所記錄的數(shù)據(jù)，但是最優(yōu)雌雄比尚有待進(jìn)一步的研究。

4.2 恢復(fù)消化道微生物群落

在腸道病原微生物驅(qū)殺過程中，有益微生物（益生菌）群落結(jié)構(gòu)也會受到影響，并且由于飼養(yǎng)環(huán)境與親龜原生境的不同，其腸道益生菌群落結(jié)構(gòu)也存在差異。因此，如何恢復(fù)、保持消化道益生菌群落的穩(wěn)態(tài)，一直是困擾試驗(yàn)組的問題。經(jīng)過查閱資料及整理，試驗(yàn)組大膽嘗試用人工飼養(yǎng)一年以上健康的鋸緣閉殼龜糞便與餌料混合，投喂新引種的鋸緣閉殼龜。事實(shí)證明這個方法起到了非常好的效果，鋸緣閉殼龜?shù)囊N成活率超過91%（表1），遠(yuǎn)高于同類文章的記錄。下一步我們擬對鋸緣閉殼龜腸道微生物的種類、組成進(jìn)行測定，試圖進(jìn)一步了解其腸道微生物結(jié)構(gòu)。

5 小結(jié)

本試驗(yàn)組致力于對鋸緣閉殼龜?shù)难芯?，于全人工條件下連續(xù)兩年成功繁殖、孵化出子一代個體，屬國內(nèi)首例。并將鋸緣閉殼龜從引種、飼養(yǎng)、繁殖等三個方面進(jìn)行要點(diǎn)總結(jié)，進(jìn)行分析，并在試驗(yàn)中取得了較為理想的成果。本試驗(yàn)組將會繼續(xù)對鋸緣閉殼龜進(jìn)行深入的研究，隨著研究的深入我們將為鋸緣閉殼龜?shù)娜斯し敝澈鸵巴夥N源保護(hù)提供更多更有價(jià)值的參考。

致謝：天津農(nóng)學(xué)院教師孫學(xué)亮、石紅鑰老師及研究生陳繼楚、楊澤寧，本科生唐一然、羅升略；廣西大學(xué)研究生李琳、龐海峰、王叢剛等，本科生楊悅等；校外人員盧沛侖、劉宏寶、張海、韋川源等給予本研究在試驗(yàn)場地建設(shè)，繪圖及數(shù)據(jù)測量、統(tǒng)計(jì)方面的幫助；以及養(yǎng)殖者劉洪高、凌維鑫、等提供引種資源及養(yǎng)殖數(shù)據(jù)；最后感謝張藝琦和王松琪獸醫(yī)師、彭玉凱同學(xué)在消化道寄生生物辨認(rèn)的幫助及相關(guān)用藥咨詢，在此一并致以誠摯的謝意。