李輝斌 吳坤河 凌月仙 張江宇
(廣東省婦幼保健院 病理科,廣東 廣州 511400)
乳腺癌易感基因(breast cancer susceptibility gene,BRCA)是重要的抑癌基因,包括BRCA1和BRCA2。BRCA1/2基因是評(píng)估乳腺癌、卵巢癌和其他相關(guān)癌癥的重要生物標(biāo)志物,也是影響患者個(gè)體化治療方案選擇的生物標(biāo)志物,所以BRCA基因檢測(cè)具有重要臨床意義[1]。本研究以二代測(cè)序?yàn)榧夹g(shù)手段,分析16例胚系基因BRCA1/2突變情況及其不同的臨床病理特征。
1.1 臨床資料 本研究為回顧性分析,選擇2017年1月至2019年3月廣東省婦幼保健院通過高通量測(cè)序檢測(cè)確定攜帶胚系基因BRCA1/2突變患者16例,并收集患者相關(guān)年齡、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)狀態(tài)以及ER、PR、HER-2狀態(tài)等臨床病理資料。所有患者均簽署知情同意書。
1.2 方法 采集患者外周靜脈血5ml,使用乙二胺四乙酸抗凝管低溫(4℃)運(yùn)輸并在4天內(nèi)進(jìn)行基因檢測(cè)。標(biāo)本采用全自動(dòng)核算提取儀進(jìn)行DNA提取。取1μl DNA進(jìn)行Illumina標(biāo)準(zhǔn)文庫構(gòu)建,形成可進(jìn)行高通量測(cè)序的文庫,經(jīng)檢測(cè)合格后采用Roche NimbleGen雜交捕獲技術(shù)進(jìn)行BRCA1、BRCA12基因目標(biāo)序列捕獲,捕獲所得的外顯子文庫通過實(shí)施熒光定量核酸擴(kuò)增檢測(cè)系統(tǒng)(real-time quantitative PCR,QPCR)進(jìn)行文庫精確定量,然后進(jìn)行上機(jī)測(cè)序。其中全自動(dòng)核酸提取儀和DNA抽提試劑盒購自美國KAPA公司,高通量測(cè)序儀Nextseq 500購自美國Illumina公司。
2.1BRCA1/2基因突變位點(diǎn)及突變類型 本研究16例胚系基因BRCA1/2突變的患者,共檢測(cè)到BRCA1突變位點(diǎn)9個(gè),其中c.4837A>G、c.3548A>G、c.3113A>G、c.2612C>T 這4個(gè)位點(diǎn)錯(cuò)義突變最為常見,其次是同樣4個(gè)位點(diǎn)c.C2612T、c.A3113G、c.A3548G、c.A4837G點(diǎn)突變,這4個(gè)位點(diǎn)上的兩種突變類型均為良性突變,以及1個(gè)c.5335delC位點(diǎn)的移碼突變,該突變?yōu)橹虏⊥蛔?。檢測(cè)到BRCA2突變位點(diǎn)8個(gè),包括c.7397T>C、c.1114A>C、c.865A>C、c.2971A>G、c.10234A>G錯(cuò)義突變和c.T7397C、c.A1114C、c.T5836C點(diǎn)突變,其中c.7397T>C位點(diǎn)錯(cuò)義突變頻率最高,c.T5836C點(diǎn)突變是一個(gè)意義不明的突變,其余突變均為良性突變(表1)。
表1 16例胚系基因BRCA1/2突變位點(diǎn)及突變類型
2.2BRCA1/2基因突變攜帶者臨床相關(guān)病理學(xué)特征 16例BRCA1/2基因突變攜帶者,其中3例確診為卵巢腫瘤,3例乳腺導(dǎo)管原位癌,9例乳腺浸潤性癌,另有1例因存在乳腺癌家族史進(jìn)行BRCA1/2基因突變檢測(cè)。9例乳腺浸潤性癌中同時(shí)攜帶有BRCA1和BRCA2基因突變患者7例,攜帶單一BRCA2突變患者2例,其中1例雙側(cè)乳腺浸潤癌,發(fā)現(xiàn)BRCA2意義不明點(diǎn)突變,另1例三陰乳腺癌,發(fā)現(xiàn)BRCA1致病移碼突變(表2)。
BRCA1和BRCA2作為腫瘤抑制蛋白,在細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)通路中發(fā)揮著重要作用。BRCA1/2功能的缺失,會(huì)影響正?;蚪M的穩(wěn)定性,進(jìn)而增加乳腺癌發(fā)生的概率[1]。目前,研究表明5%~10%的乳腺癌和15%~22%卵巢癌是由于BRCA1/2突變導(dǎo)致的[4]。BRCA1/2基因致病突變,使女性發(fā)生乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)提高5倍,發(fā)生卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)提高10~30倍[5]。本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè)16例BRCA1/2基因突變,研究胚系基因BRCA1和BRCA2突變位點(diǎn)及其相關(guān)臨床病理特征,為乳腺癌、卵巢癌等相關(guān)癌癥臨床診斷與治療提供一定的依據(jù)。
表2 16例胚系基因BRCA1/2突變攜帶者相關(guān)病理學(xué)特征
注:“”代表未分級(jí);“+”代表陽性;“-”代表陰性
BRCA1/2基因突變類型包括移碼突變、無義突變、錯(cuò)義突變、同義突變及剪切突變5種類型。其中移碼突變、無義突變和剪切突變3種類型,其共同特點(diǎn)為提前終止蛋白質(zhì)編碼合成[6]。針對(duì)BRCA1/2基因,一般情況下錯(cuò)義突變或者同義突變均不會(huì)影響RNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白功能。本研究發(fā)現(xiàn)16例BRCA1/2基因突變攜帶者中,突變類型主要以錯(cuò)義突變和點(diǎn)突變?yōu)橹?,為良性突變,僅發(fā)現(xiàn)1個(gè)明確致病移碼突變和1個(gè)意義不明點(diǎn)突變。本研究發(fā)現(xiàn)c.4837A>G、c.3548A>G、c.3113A>G、c.2612C>T 4個(gè)位點(diǎn)為BRCA1基因的常見突變位點(diǎn),而c.7397T>C位點(diǎn)為BRCA2基因的常見突變位點(diǎn)。
乳腺癌是我國女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,且具有年輕化趨勢(shì),中國乳腺癌患者平均發(fā)現(xiàn)年齡為48.7歲。早發(fā)性乳腺癌較普通乳腺癌具有更廣的胚系突變頻譜和更高的突變。胚系基因BRCA1/2突變與遺傳性乳腺癌密切相關(guān)[7]。但BRCA突變只能解釋20%~40%的家族性乳腺癌,而且在不同人種間存在差異。乳腺癌的危險(xiǎn)因素還包括月經(jīng)初潮早、初產(chǎn)年齡晚、未哺乳、停經(jīng)晚、未婚育、高脂飲食、飲酒、吸煙、長期激素替代治療、體重指數(shù)超標(biāo)、環(huán)境輻射、乳腺良性疾病史等。研究發(fā)現(xiàn),BRCA1、BRCA2胚系突變的攜帶者平均發(fā)病年齡比無BRCA突變攜帶者提前7年,且同時(shí)攜帶BRCA1和BRCA2突變的發(fā)病年齡較單一BRCA1或BRCA2突變的發(fā)病年齡提前[8, 9]。與年老乳腺癌相比,遺傳性乳腺癌發(fā)病年齡較早,受環(huán)境因素影響相對(duì)較小,遺傳因素起著更為重要的作用。本研究發(fā)現(xiàn),在9例乳腺浸潤性癌患者中,同時(shí)攜帶有BRCA1和BRCA2基因突變患者7例,攜帶單一BRCA2突變患者2例,因樣本量少,二者發(fā)病年齡并無明顯差異。本研究中的兩例BRCA基因非良性突變,1例BRCA2意義不明點(diǎn)突變?yōu)殡p側(cè)乳腺浸潤癌,另1例BRCA1致病移碼突變?yōu)槿幦橄侔茰y(cè)胚系基因BRCA1/2非良性突變,可能與乳腺癌惡性程度密切相關(guān)。
卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,早起卵巢癌多無明顯癥狀,一旦發(fā)現(xiàn)多為晚期,是婦科惡性腫瘤死亡的主要原因。BRCA基因突變?cè)诼殉舶┲械陌l(fā)生率為5.8%~24.8%,BRCA1和BRCA2基因突變攜帶者在70歲時(shí)卵巢癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)分別為18.0%~54.0%和2.4%~19.0%[10]。本研究中共發(fā)現(xiàn)3例攜帶BRCA1/2突變的卵巢腫瘤患者,在所有BRCA突變攜帶者中約占18%,其中BRCA2突變頻率為3次,BRCA1突變頻率僅1次。
目前,BRCA1和BRCA2胚系突變的乳腺癌患者對(duì)多聚核糖聚合酶抑制劑和鉑類為主的化療方案較敏感[11],可用于指導(dǎo)化療方案的制定和改善遺傳性乳腺癌的預(yù)后。2013年歐洲內(nèi)科腫瘤學(xué)會(huì)(the European Society for Medical Oncology,ESMO)指出,BRCA基因成為卵巢癌中新的研究熱點(diǎn)。而聚腺苷酸二磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制劑與BRCA基因有“合成致死性”效應(yīng)(即:當(dāng)兩個(gè)非致死基因突變單獨(dú)發(fā)生時(shí),細(xì)胞并不發(fā)生損傷或死亡;而兩個(gè)非致死基因突變同時(shí)發(fā)生時(shí),則可以引起細(xì)胞的死亡),也使得BRCA基因突變型卵巢癌有了新的治療方案,并已于2014年批準(zhǔn)上市。國外研究還發(fā)現(xiàn),BRCA基因突變型卵巢癌相對(duì)BRCA基因野生型卵巢癌,具有對(duì)鉑類藥物高敏感性以及無病間期、總生存時(shí)間和無瘤生存時(shí)間更長的特點(diǎn)[12]。
綜上所述,乳腺癌、卵巢癌的治療方式仍以手術(shù)為主,藥物治療為輔,但治療效果個(gè)體及地區(qū)差異較大,BRCA1和BRCA2基因的深入研究可以為我們更好地解釋生命現(xiàn)象,并有助于對(duì)腫瘤治療提出新的診斷思路及治療方案。隨著精準(zhǔn)醫(yī)療時(shí)代的到來,靶向治療為BRCA基因突變型患者帶來了新的治療手段,與藥物相匹配的伴隨診斷也為其個(gè)性化治療提供良好的指導(dǎo)作用。盡管BRCA基因突變型乳腺癌具體發(fā)病機(jī)制仍需進(jìn)一步研究,但隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步,其發(fā)病機(jī)制將得到更全面的研究和解釋,更多有效的靶向藥物將逐漸被開發(fā)和利用,從而為BRCA基因突變型患者提供更為有效的個(gè)體化治療。