產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥表型研究

徐淼，郭文臣，李世榮

濰坊市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 濰坊 261041

抗生素藥物在臨床治療中發(fā)揮著較為重要的作用。隨著抗生素藥物的廣泛使用，細(xì)菌的耐藥性開(kāi)始成為患者治療效果的主要影響因素。以產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌為例，金屬β-酰胺酶為產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的代表元素，次活性部位以金屬離子為主，是借助金屬離子發(fā)揮催化活性的酶類物質(zhì)。此種物質(zhì)的活性并不能為青霉素類藥物、頭孢菌素類藥物及碳青霉烯類藥物所控制。既有研究結(jié)果表明，此種物質(zhì)的耐藥基因多集中于細(xì)菌染色體、質(zhì)粒及轉(zhuǎn)座子等區(qū)域，耐藥基因的存在方式以基因盒的形式為主。整合子在同種細(xì)菌及不同種細(xì)菌中的基因水平轉(zhuǎn)移，會(huì)讓此類細(xì)菌的耐藥基因呈現(xiàn)出快速傳播的特點(diǎn)。

1 產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥基因傳播與多重耐藥性分析

1.1 產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥基因的傳播 根據(jù)既有研究結(jié)果，腸桿菌科細(xì)菌所具有的獲得性耐藥基因多位于其他耐藥基因決定簇中的整合子[1]。在與其他耐藥基因中的移動(dòng)基因元件相結(jié)合的情況下，產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥性可以借助質(zhì)粒及轉(zhuǎn)座子，在同種細(xì)菌及不同細(xì)菌之間完成基因水平轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)化方式、轉(zhuǎn)導(dǎo)方式與接合方式也可以被看作是產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥表型船舶方式。在耐藥基因在菌株間傳播的情況下，轉(zhuǎn)座接合方式在致病菌流行過(guò)程中發(fā)揮著較為重要的作用。通過(guò)對(duì)質(zhì)粒內(nèi)的基因組進(jìn)行分析，在存在于不同質(zhì)粒中的插入序列存在一定差異的情況下，插入序列的差異性也會(huì)讓耐藥基因的傳播效率有所提升。在細(xì)菌耐藥性研究方面，研究者多認(rèn)為產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥基因的傳播過(guò)程已經(jīng)在一定程度上突破了普通細(xì)菌之間的局限性，與之相關(guān)的傳播機(jī)制的研究，在疾病治療及疫情控制等方面均發(fā)揮著較為重要的作用[2]。為控制耐藥基因的水平傳播，相關(guān)人員需要讀細(xì)菌的播撒路徑進(jìn)行控制。如在產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科患者進(jìn)入重癥監(jiān)護(hù)病房以后，相關(guān)人員需要通過(guò)合理使用抗生素類藥物的方式清除細(xì)菌，避免耐藥菌與耐藥基因的傳播，相關(guān)人員也需要對(duì)手部衛(wèi)生及環(huán)境衛(wèi)生進(jìn)行關(guān)注，并要及時(shí)對(duì)污染物品進(jìn)行消毒處理。規(guī)范化的管理措施與無(wú)菌操作理念的有效落實(shí)，也可以避免交叉感染的出現(xiàn)。

1.2 產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的多重耐藥性分析 在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，多重耐藥性主要指的是細(xì)菌對(duì)3種及3種以上的藥物的耐藥性。通過(guò)對(duì)此類細(xì)菌的耐藥基因傳播路徑進(jìn)行分析，與細(xì)菌耐藥基因傳播路徑有關(guān)的可移動(dòng)介導(dǎo)元件中包含有耐非β-內(nèi)酰胺類抗生素的相關(guān)基因，如磺胺類基因及喹諾酮類基因是可移動(dòng)介導(dǎo)元件中較為常見(jiàn)的基因。這一研究結(jié)果表明產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的多重耐藥性是多因素的綜合作用下的產(chǎn)物，耐藥基因短時(shí)期內(nèi)的大規(guī)模傳播，會(huì)給抗生素藥物的臨床應(yīng)用及衛(wèi)生防疫工作帶來(lái)一定的挑戰(zhàn)。除基因因素以外，外膜蛋白缺失、藥物作用靶位變化及青霉素結(jié)合蛋白變化等因素的出現(xiàn)，也會(huì)在改變細(xì)菌與抗生素之間的親和力及提升主動(dòng)外排系統(tǒng)的活躍性的基礎(chǔ)上，誘發(fā)多重耐藥性的出現(xiàn)。

2 產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥表型檢測(cè)方法

現(xiàn)階段應(yīng)用于產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌耐藥表型檢測(cè)的表型檢測(cè)方法可分為以下內(nèi)容：一是，基于2-巰基乙醇的協(xié)同試驗(yàn)方式；二是，基于EDTA雙紙片技術(shù)的協(xié)同試驗(yàn)方式；三是基于吡啶二羧酸的復(fù)合紙片技術(shù)；四是，基于EDTA的復(fù)合紙片技術(shù)。根據(jù)表型檢測(cè)的實(shí)施效果，EDTA雙紙片協(xié)同試驗(yàn)可表現(xiàn)出靈敏度高與特異度高的優(yōu)勢(shì)。在反應(yīng)底物選擇過(guò)程中，研究者多認(rèn)為亞胺培南為更理想的反應(yīng)底物?，F(xiàn)階段表型檢測(cè)技術(shù)可以表現(xiàn)出簡(jiǎn)單實(shí)用的優(yōu)勢(shì)，上述檢測(cè)方式可在多種不同實(shí)驗(yàn)室中得到應(yīng)用，但僅限表型的篩查與確認(rèn)。

改良碳青霉烯滅活實(shí)驗(yàn)也是適用于產(chǎn)金數(shù)米誒的腸桿菌科細(xì)菌耐藥表型檢測(cè)的表型檢測(cè)方式。在此種技術(shù)應(yīng)用以后，研究者利用1 μL接種環(huán)，將待測(cè)菌株置入2 mL肉湯之中，在震蕩混勻15 s以后，將MEM紙片放入含有待測(cè)菌株的肉湯，后在25oC分溫水中放置4 h。此種實(shí)驗(yàn)方式的產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的陽(yáng)性率可以達(dá)到98.1%[3]。實(shí)驗(yàn)方式也可以發(fā)揮出成本低與操作簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì)。

基因檢測(cè)技術(shù)葉也在表型檢測(cè)分析過(guò)程中發(fā)揮著較為重要的作用。以實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)為例，在病原體分離的初始階段，此種技術(shù)可以以快速合成的基因?yàn)殛?yáng)性對(duì)照物，開(kāi)展致病基因檢測(cè)，此種檢測(cè)方式可以讓基因的檢測(cè)效率得到一定程度負(fù)擔(dān)提升，也可以二位稀缺樣品的病原監(jiān)測(cè)提供一定的支持。環(huán)節(jié)到恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)可以在恒溫環(huán)境下進(jìn)行，在試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程中，反應(yīng)引物可以在無(wú)需溫度循環(huán)的情況下，識(shí)別目標(biāo)序列去種更多的把序列，可以讓基因檢測(cè)技術(shù)的靈敏度與特異度得到有效提升[4]。免疫層析技術(shù)也具有一定的實(shí)用性，此種群檢測(cè)技術(shù)也可以呈現(xiàn)出靈敏度高與特異度高的優(yōu)勢(shì)。

3 結(jié)語(yǔ)

腸桿菌科細(xì)菌是臨床治療中常見(jiàn)的細(xì)菌類型。產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥性是臨床研究領(lǐng)域所關(guān)注的內(nèi)容。受新型超級(jí)耐藥基因及青霉烯酶類抗生素的使用現(xiàn)狀的影響，產(chǎn)金屬酶的腸桿菌科細(xì)菌的耐藥情況已經(jīng)呈現(xiàn)出了嚴(yán)峻化的特點(diǎn)。在對(duì)與之相關(guān)的表征因素進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上，加強(qiáng)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)，是抗生素藥物治療方面不可忽視的內(nèi)容。