正交法優(yōu)選酒炙小茴香最佳炮制工藝

平莉莉，張朔生，李 坤

（1.山西中醫(yī)藥大學，山西晉中 030619； 2.中國人民解放軍第302醫(yī)院，北京 100039）

小茴香為傘形科植物茴香（Foeniculum vulgate Mill.）的干燥成熟果實［1］，性溫，味辛，具有散寒止痛、理氣和胃的功能，常用于寒疝腹痛，睪丸偏墜，痛經(jīng)，少腹冷痛，脘腹脹痛，食少吐瀉等。酒炙是小茴香常用炮制方法之一［2］，但目前酒炙小茴香的炮制工藝研究鮮見報道，本實驗將以揮發(fā)油和反式茴香腦含量為指標，采用正交試驗設計進行酒炙小茴香炮制工藝的優(yōu)選。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

Optris紅外測溫儀（深圳市歐普士電子技術有限公司），Agilent 7890A氣相色譜儀（FID檢測器），HP-5毛細管色譜柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），SB25-12D型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司，頻率40 kHz，功率500 W），DV215CD型電子天平（奧豪斯國際貿(mào)易有限公司），RRHP-100型萬能高速粉碎機（歐凱萊芙實業(yè)公司）。

1.2 藥品與試劑

藥材：小茴香產(chǎn)自云南曲靖，由山西中醫(yī)藥大學張朔生教授鑒定為傘形科茴香屬植物茴香Foeniculum vulgare Mill.的干燥成熟果實。

試劑：精制黃酒（酒精度≥12%，山西省代縣代康實業(yè)有限公司），反式茴香腦對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號111835-201102，供含量測定用），乙酸乙酯（分析純，天津市光復科技發(fā)展有限公司，批號20141110）。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 揮發(fā)油含量測定 取粉碎的小茴香30.00 g，置燒瓶中，加水240 mL，按照2015版《中國藥典》［3］“揮發(fā)油測定法”測定。

2.1.2 反式茴香腦的含量測定

2.1.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取反式茴香腦對照品39.00 mg，加乙酸乙酯溶解并定容至10 mL，作為對照品儲備溶液（3.900 mg/mL）。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 小茴香樣品粉碎，過3號篩，取藥材粉末約1 g，精密稱定，精密加入乙酸乙酯25 ml，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min后放冷至室溫，用乙酸乙酯補足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.1.2.3 氣相色譜條件 色譜柱：石英毛細管柱HP-5（柱長 30 m，內(nèi)徑 0.32 mm，膜厚度 0.25 μm），F(xiàn)ID檢測器；柱溫：采用程序升溫，初始溫度設為100℃，以10℃/min的速度升至150℃；載氣為N2；分流比為50∶1；進樣口溫度250℃；檢測器溫度280℃；進樣量 1 μL。

2.2 單因素考察

對酒炙小茴香悶潤時間、炒制溫度、炒制時間和加酒量4個因素進行單因素考察。

2.2.1 悶潤時間考察 取30 g供試小茴香，加酒4.5 mL，悶潤，悶潤時間見表 1，在 110～120 ℃條件下，炒制20 min，得到不同悶潤時間酒炙小茴香，測定其反式茴香腦和揮發(fā)油含量。結果見表1。

表1 酒炙小茴香悶潤時間考察表

可見悶潤時間不同，反式茴香腦和揮發(fā)油含量變化明顯，悶潤時間是影響兩者含量變化的因素。

2.2.2 炒制時間考察 取30 g供試小茴香，加酒4.5 mL，悶潤 2 h，在 110～120 ℃條件下炒制，炒制時間見表2，得到不同炒制時間酒炙小茴香，測定其反式茴香腦和揮發(fā)油含量。結果見表2。

表2 酒炙小茴香炒制時間考察表

可見炒制時間不同，反式茴香腦和揮發(fā)油含量變化明顯，炒制時間是影響兩者含量變化的因素。

2.2.3 炒制溫度考察 取30 g供試小茴香，加酒4.5 mL，悶潤 2 h，在不同溫度條件下炒制 20 min，炒制溫度見表3，得到不同炒制溫度酒炙小茴香，測定其反式茴香腦和揮發(fā)油含量。結果見表3。

表3 酒炙小茴香炒制溫度考察表

可見炒制溫度不同，反式茴香腦和揮發(fā)油含量變化明顯，炒制溫度是影響兩者含量變化的因素。

2.2.4 加酒量考察 取30 g供試小茴香，加不同酒量進行悶潤，加酒量見表4，悶潤2 h，在110～120℃條件下炒制20 min，得到不同加酒量酒炙小茴香，測定其反式茴香腦和揮發(fā)油含量。結果見表4。

表4 酒炙小茴香加酒量考察表

可見加酒量不同，反式茴香腦和揮發(fā)油含量變化不明顯，加酒量不是影響兩者含量變化的重要因素。

通過單因素試驗考察，選取悶潤時間、炒制溫度、炒制時間為正交試驗的考察因素。

2.3 正交試驗設計

實驗選取悶潤時間（A），炒制溫度（B），炒制時間（D）為考察因素，以揮發(fā)油和反式茴香腦的含量為評價指標，分別設3個水平，取小茴香30 g，選用L9（33）正交試驗，試驗因素水平、正交試驗結果和方差分析分別見表5、表6和表7。

表5 正交試驗因素水平表

由表6及表7方差結果可得，酒炙小茴香的影響因素主次順序為：B（炒制溫度）＞A（悶潤時間）＞D（炒制時間）。實驗結果與統(tǒng)計分析結果一致，其最佳炮制工藝為A3B3D1，即悶潤3 h，在溫度為130～140℃下炒制 16 min。

表6 酒炙小茴香L9（34）正交試驗結果表

3 討論

《中國藥典》2015版對小茴香揮發(fā)油和反式茴香腦的含量均有要求，但酒炙小茴香與其他小茴香炮制方法相比，反式茴香腦含量增加明顯［4］，這可能是小茴香酒炙后較生品小茴香散寒止痛、活血通絡作用增強的物質(zhì)基礎。故本文對酒炙小茴香炮制效果進行評價時采用反式茴香腦和揮發(fā)油含量綜合評價法，將反式茴香腦含量的加權系數(shù)定為70%，揮發(fā)油含量的加權系數(shù)定為30%。

表7 方差分析表

與其他炮制因素相比，炮制溫度對酒炙小茴香揮發(fā)油含量和揮發(fā)油組分變化的影響最為顯著，炮制溫度與揮發(fā)油組分變化及其對小茴香藥理作用改變之間的關系有待進一步研究。