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      腸道菌群變化與炎癥性腸病相關(guān)性研究

      2019-02-20 14:30:08陳楊芳鄒珂
      中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生 2019年34期
      關(guān)鍵詞:炎癥性腸病腸道菌群

      陳楊芳 鄒珂

      [摘要] 目的 探討炎癥性腸?。↖BD)患者的腸道菌群變化及腸道菌群與炎癥性腸病的相關(guān)性。 方法 選取2017年9月~2018年9月入院接受診療的120例成人炎癥性腸病活動(dòng)期患者作為本次研究對(duì)象,其中潰瘍性結(jié)腸炎(UC)患者75例,克羅恩?。–D)45例,另選擇50例健康查體者作為對(duì)照組。采集各組新鮮糞便,使用梯度稀釋法定量培養(yǎng)腸道菌群;采用全自動(dòng)血液分析儀檢驗(yàn)血液標(biāo)本的C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞計(jì)數(shù)。 結(jié)果 UC組和CD組糞便樣本中大腸桿菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量均高于對(duì)照組(P<0.05),UC組和CD組糞便樣本中雙歧桿菌、乳酸桿菌、柔嫩梭菌數(shù)量均低于對(duì)照組(P<0.05),UC組糞便樣本中的柔嫩梭菌數(shù)量高于CD組(P<0.05),UC組糞便樣本中的擬桿菌數(shù)量低于CD組(P<0.05);UC組和CD組C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于對(duì)照組(P<0.05),UC組和CD組各炎癥指標(biāo)相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);UC組腸道炎癥反應(yīng)的發(fā)生與大腸桿菌、腸球菌和雙歧桿菌存在相關(guān)性。結(jié)論 與健康人群相比,IBD活動(dòng)期患者的腸道菌群呈失衡狀態(tài),菌群的改變與炎癥性腸病存在一定程度的相關(guān)性,這為炎癥性腸病的臨床治療提供方向。

      [關(guān)鍵詞] 腸道微生態(tài);炎癥性腸病;腸道菌群;炎癥指標(biāo)

      [中圖分類號(hào)] R574? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701(2019)34-0128-04

      Correlation between intestinal flora changes and inflammatory bowel disease

      CHEN Yangfang1? ?ZOU Ke2

      1.Department of Clinical Laboratory, Wenzhou People's Hospital in Zhejiang Province, Wenzhou? ?325000, China; 2.Department of Gastroenterology, Wenzhou People's Hospital in Zhejiang Province, Wenzhou? ?325000, China

      [Abstract] Objective To investigate the changes of intestinal flora and the relationship between intestinal flora and inflammatory bowel disease in patients with inflammatory bowel disease (IBD). Methods A total of 120 adult patients with inflammatory bowel disease who were admitted to the hospital from September 2017 to September 2018 were enrolled in this study. Among them, there were 75 patients with ulcerative colitis (UC) and 45 cases with Crohn's disease (CD). 50 healthy subjects were selected as the control group. Fresh feces were collected from each group, and the intestinal flora was quantitatively cultured by gradient dilution method. C-reactive protein and white blood cell counts of blood samples were examined using a fully automated blood analyzer. Results The numbers of Escherichia coli, Enterococcus and Bacteroides in the stool samples of UC group and CD group were higher than those of the control group(P<0.05). The numbers of Bifidobacteria, Lactobacillus and Clostridium leptumin the stool samples of UC group and CD group were lower than those in the control group(P<0.05). Clostridium leptum in the stool samples of the UC group was higher than that of the CD group(P<0.05), and the number of the Bacteroidaceae in the stool samples of the UC group was lower than that of the CD group(P<0.05). The C-reactive protein and white blood cell counts in the UC group and CD group were higher than those in the control group(P<0.05). There was no significant difference in inflammatory indexes between the UC group and the CD group(P>0.05). The intestinal inflammation occurred in the UC group. There was a correlation between the occurrence of intestinal inflammation with Escherichia coli, Enterococcus and Bifidobacteria. Conclusion Compared with that of healthy people, the intestinal flora of patients with active IBD is unbalanced, and the change of flora has a certain degree of correlation with inflammatory bowel disease, which provides direction for the clinical treatment of inflammatory bowel disease.

      [Key words] Intestinal micro-ecology; Inflammatory bowel disease; Intestinal flora; Inflammatory index

      據(jù)研究顯示[1],人體胃腸道具有大量微生物,包括共生的腸道細(xì)菌、真菌、古細(xì)菌等,其在維持宿主的正常生理功能和免疫系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)中起重要作用。且有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease,IBD)患者的腸道菌群失調(diào)可能與許多胃腸疾病的發(fā)生有關(guān)[2]。IBD主要分為潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis,UC)和克羅恩?。–rohn's disease,CD)兩種,是一種病因不明的慢性復(fù)發(fā)性非特異性腸道炎性疾病,主要臨床癥狀為腹痛、腹瀉等。為了探析IBD患者的腸道菌群變化及IBD與炎癥性腸病的相關(guān)性,本次研究對(duì)120例成人炎癥性腸病活動(dòng)期患者的腸道菌群和炎性指標(biāo)進(jìn)行對(duì)比分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料

      選擇2017年9月~2018年9月入院接受診療的120例成人炎癥性腸病活動(dòng)期患者作為本次研究對(duì)象,根據(jù)IBD種類分為UC組和CD組,UC組患者75例,男40例,女35例,年齡40~65歲,平均(54.62±10.96)歲;病程3~12年,平均(7.78±2.55)年;CD組患者45例,男25例,女20例,年齡43~64歲,平均(55.78±10.86)歲;病程3~11年,平均(7.28±1.96)年;50例健康查體者作為對(duì)照組,男30例,女20例,年齡39~63歲,平均(53.21±9.18)歲。各組之間年齡、性別等資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

      納入標(biāo)準(zhǔn):(1)UC組和CD組的研究對(duì)象均符合國(guó)內(nèi)現(xiàn)行炎癥性腸病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]:(2)所有患者及其家屬均對(duì)本研究知情并簽署知情同意書,且本研究已獲我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

      排除標(biāo)準(zhǔn):排除具有傳染病、消化道炎癥性疾病、自身免疫性疾病、寄生蟲感染等疾病者。

      1.2 方法

      對(duì)UC組、CD組和對(duì)照組的腸道菌群數(shù)量和炎性指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析。

      1.2.1 腸道菌群的檢測(cè)? 取所有研究對(duì)象自然排出的新鮮糞便約0.5 g,迅速置入?yún)捬豕迌?nèi),用稀釋液將其稀釋至10倍,取10 μL進(jìn)行預(yù)備接種。將腸球菌(Enterococcus,EC)、大腸桿菌(Escherichia coli,EMB)、雙歧桿菌(Bifidobacterium,BL)、乳桿菌(Lactobacillus,LC)、梭狀芽孢桿菌、擬桿菌(Bacteroides,BD)、柔嫩梭菌(Clostridium,CL)群列為腸道菌群代表并選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基。腸球菌、大腸桿菌用氧培養(yǎng)基培養(yǎng),雙歧桿菌和乳酸桿菌用厭氧培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。在日本光岡知足法的基礎(chǔ)上,利用細(xì)菌三級(jí)鑒定法將細(xì)菌鑒定到屬的水平,以標(biāo)準(zhǔn)滴管(47滴/mL)按由高到低的稀釋度滴種,滴管尖端離培養(yǎng)基表面5 cm,按不同菌種的正常值,每個(gè)平板分為3個(gè)稀釋度。37℃培養(yǎng)48 h 后,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。檢測(cè)下限是2×102 CUF/g濕便,且所有菌落結(jié)果數(shù)據(jù)需取其對(duì)數(shù)LgN(CFU/g)后再記錄。

      1.2.2 炎癥指標(biāo)檢驗(yàn)? 檢驗(yàn)前禁止飲食12 h,在第2日清晨抽取2 mL空腹靜脈血,采用全自動(dòng)血液分析儀檢驗(yàn)血液標(biāo)本的C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞計(jì)數(shù),做好相關(guān)數(shù)據(jù)記錄。

      1.3 觀察指標(biāo)

      (1)腸道菌群:觀察統(tǒng)計(jì)各組糞便樣本中腸球菌(EC)、大腸桿菌(EMB)、雙歧桿菌(BL)、乳桿菌(LC)、擬桿菌(BD)、柔嫩梭菌(CL)的數(shù)量。(2)對(duì)各組血常規(guī)檢查結(jié)果進(jìn)行對(duì)照分析。(3)菌群數(shù)目和炎癥指標(biāo)之間的相關(guān)系數(shù)>0.4時(shí),認(rèn)為存在關(guān)聯(lián)性[4]。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),正態(tài)分布計(jì)量資料以(x±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn);炎癥指標(biāo)和菌群數(shù)量間的相關(guān)性用雙變量相關(guān)分析法進(jìn)行處理,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 UC組、CD組、對(duì)照組腸道菌群數(shù)量的變化及比較

      UC組和CD組糞便樣本中大腸桿菌、腸球菌、擬桿菌數(shù)量均高于對(duì)照組(P<0.05),UC組和CD組糞便樣本中雙歧桿菌、乳酸桿菌、柔嫩梭菌數(shù)量均低于對(duì)照組(P<0.05),UC組糞便樣本中的柔嫩梭菌數(shù)量高于CD組(P<0.05),UC組糞便樣本中的擬桿菌數(shù)量低于CD組(P<0.05),UC組和CD組其余菌種間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

      2.2各組炎癥指標(biāo)的比較

      UC組和CD組C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞計(jì)數(shù)均高于對(duì)照組(P<0.05),UC組和CD組各炎性指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

      2.3 UC組和CD組炎癥指標(biāo)和菌群數(shù)目間的相關(guān)性

      UC組白細(xì)胞數(shù)目與腸球菌(r=-0.751)呈負(fù)相關(guān),C反應(yīng)蛋白與腸球菌(r=-0.587)、大腸桿菌(r=-0.742)、雙歧桿菌(r=-0.801)呈負(fù)相關(guān),見表3;CD組與本次檢測(cè)的菌群均無相關(guān)性,見表4。

      3 討論

      IBD是一類病變部位連續(xù)性分布于結(jié)腸黏膜和黏膜下層,不易治愈的腸道慢性非特異性炎性疾病,包括UC和CD。據(jù)流行病調(diào)查顯示,目前我國(guó)炎癥性腸病的發(fā)病率逐年上升[5]。但I(xiàn)BD的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,有研究認(rèn)為IBD是一種由變異或致病性腸道菌群在基因易感人群中引起的炎性疾病[6-7],是遺傳、微生態(tài)環(huán)境及黏膜的免疫應(yīng)答共同作用的結(jié)果,但尚未發(fā)現(xiàn)特定的病原體[8]。因此,明確IBD的發(fā)病機(jī)制,準(zhǔn)確判斷疾病分型,從而制定相應(yīng)的治療策略是目前臨床相關(guān)研究應(yīng)側(cè)重的方向。

      從菌群數(shù)量可見,大腸桿菌、腸球菌、擬桿菌此類有害菌在IBD患者腸道類的數(shù)量均高于健康人群,腸道有益菌如乳酸桿菌、雙歧桿菌和柔嫩梭菌的數(shù)量均低于健康人群[9],其中CD組的擬桿菌數(shù)量大于UC 組,CD組的柔嫩梭菌數(shù)量小于UC 組。IBD患者腸道菌群結(jié)構(gòu)相比健康人群發(fā)生較大變化,腸道有害菌群增加、有益菌群相對(duì)減少、菌群的生物多樣性減少,導(dǎo)致腸道菌群失調(diào),這可能與炎癥性腸病的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[10-11]。除了與健康人群的腸道菌群分布有差異外,不同IBD患者之間也存在差異[12]。在本次研究中,CD組的擬桿菌數(shù)量大于UC組,而柔嫩梭菌的數(shù)量則小于UC組。在臨床疾病診斷和疾病分型上,可以考慮利用菌群所表現(xiàn)出的不同失衡特點(diǎn)來輔助診斷疾病[13],緩解IBD患者因腸道鏡檢帶來的痛苦。根據(jù)本次研究結(jié)果可以做出設(shè)想:柔嫩梭菌可考慮作為診斷疾病分型的參考依據(jù)之一,柔嫩梭菌作為人體腸道中最常見的細(xì)菌,是腸道共生細(xì)菌的主要成員,其可為腸道提供能量并起到抗炎作用,是最重要的丁酸鹽生產(chǎn)細(xì)菌之一[14]。柔嫩梭菌的減少表明其在UC與CD發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮不同作用。UC組糞便樣本中的柔嫩梭菌數(shù)量高于CD組,擬桿菌數(shù)量低于CD組,此菌群的變化可有助于UC的分型。有學(xué)者指出,在傳統(tǒng)培養(yǎng)方法及FISH技術(shù)下,在CD患者的糞便和結(jié)腸組織樣本中均可檢測(cè)到腸桿菌,而UC患者僅在糞便樣本中檢測(cè)到腸桿菌[15],因此腸桿菌陽(yáng)性率也可考慮作為IBD分型的依據(jù)之一。此外,有研究也提出腸道菌群組成比例的改變可作為評(píng)估患者易感性、疾病活動(dòng)性、嚴(yán)重程度和對(duì)治療有效性等的生物指標(biāo)[16]。

      本研究中采用白細(xì)胞計(jì)數(shù)和C反應(yīng)蛋白2項(xiàng)炎癥指標(biāo)反映腸道菌群與IBD之間的相關(guān)性。通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),UC組腸道炎癥反應(yīng)的發(fā)生與大腸桿菌、腸球菌和雙歧桿菌存在相關(guān)性,可能由于腸道菌群的微生態(tài)平衡被打破,腸功能紊亂,接收菌群信號(hào)能力削弱,引起免疫應(yīng)答功能的失調(diào)并使腸黏膜受到損害,導(dǎo)致腸道炎癥反應(yīng)[17-18]。有研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)腸道內(nèi)有柔嫩梭菌存在時(shí),白細(xì)胞會(huì)減少[19-20],這也與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

      綜上所述,IBD與腸道菌群的變化存在密切關(guān)系,且菌群的失衡與炎癥反應(yīng)之間存在明顯相關(guān)性。但有關(guān)IBD的作用機(jī)制尚未完全明確,有待進(jìn)一步研究。有學(xué)者依據(jù)動(dòng)物研究提出“無菌無炎癥”的觀點(diǎn),這同時(shí)也從側(cè)面佐證了菌群失衡可以引起IBD的發(fā)生,這將為炎癥性腸病的臨床治療提供新的思路和方向。

      [參考文獻(xiàn)]

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      (收稿日期:2019-09-30)

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