X連鎖核糖體S6激酶4在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制▲

(廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科，南寧市 530021，電子郵箱：2448468746@qq.com)

X連鎖核糖體蛋白S6激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4，RSK4)最早是在復(fù)雜X連鎖智力低下患者中發(fā)現(xiàn)的一種缺失基因[1]，但是現(xiàn)有的研究卻表明其在正常人全身各組織器官的細(xì)胞中均有表達(dá)，并參與多種細(xì)胞的功能調(diào)節(jié)和生理病理過程[2]。近年來，不斷有學(xué)者發(fā)現(xiàn)RSK4參與了腫瘤的發(fā)生，其在結(jié)直腸癌[3]、胰腺癌[4]、子宮內(nèi)膜癌[5]、卵巢癌[6]和乳腺癌[7]中的表達(dá)均下調(diào)。本研究就RSK4在乳腺癌發(fā)生中的作用及其可能機(jī)制進(jìn)行初步的探討。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 納入2016年1月至2016年8月我科收治的8例乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：首次診斷為乳腺癌的女性患者，未在外院做過乳房活組織病理檢查及任何相關(guān)治療，此次入院首選乳腺癌手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：有乳腺癌家族史者，術(shù)前接受放化療及其他相關(guān)抗癌治療者。收集8例患者的乳腺手術(shù)切除標(biāo)本，包括乳腺癌組織及距離癌組織陰性切緣5 cm以上的正常腺體組織。術(shù)中取材后立即放入液氮中，置于-80℃冰箱中凍存。所有手術(shù)標(biāo)本術(shù)后均由我院病理科醫(yī)師確診為乳腺癌，并按照美國腫瘤聯(lián)合會制定的第8版癌癥分期系統(tǒng)進(jìn)行乳腺癌臨床病理原發(fā)腫瘤-區(qū)域淋巴結(jié)-遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(tumor-node-metastasis，TNM)分期和組織病理學(xué)分級[8]。8例患者的相關(guān)臨床資料見表1。

表1 8名乳腺癌患者的臨床資料

1.2 細(xì)胞株、實(shí)驗(yàn)動物及慢病毒 (1)無特定病原體級BALB/c雌性裸鼠12只(購自北京斯萊克實(shí)驗(yàn)室動物有限公司)，5～6周齡，重量17～21 g，于無病原體的高位高效的微?？諝膺^濾網(wǎng)箱中飼養(yǎng)，喂食含14%蛋白質(zhì)和3%脂肪的高壓滅菌飲食。(2)非惡性乳腺細(xì)胞株MCF-10A以及乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、T47D、ZR-75-1、MDA-MB-436、SK-BR-3和MDA-MB-231均由廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心提供。(3)pLVEF-1a/GFP-Puro慢病毒載體系統(tǒng)購自上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司，過表達(dá)RSK4基因的慢病毒過表達(dá)載體(pLVEF-1a/GFP-Puro-RSK4)的包裝及構(gòu)建均由上海吉凱基因化學(xué)技術(shù)有限公司完成。

1.3 主要試劑與儀器 一抗：RSK4(1 ∶250)購自美國Abcam公司(批號：ab76117)，抗蛋白激酶B(protein kinase B，AKT；1 ∶1 800)、抗磷酸化的蛋白激酶B(phospho-protein kinase B，p-AKT；1 ∶200)、抗細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK；1 ∶1 000)、抗磷酸化的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(phospho-extracellular regulated protein kinases，p-ERK，1 ∶1 000)、E-鈣黏蛋白(1 ∶1 000)和波形蛋白(1 ∶500)均購自美國Cell Signaling Technology公司(批號：cst4051、cst9272、cst9101、cst9102、cst9961、cst3932)，p- AKT對應(yīng)的二抗為羊抗鼠(1 ∶1 000)，RSK4、AKT、ERK、p- ERK、E- 鈣黏蛋白和波形蛋白對應(yīng)的二抗為羊抗兔(1 ∶1 000)，均購自美國Cell Signaling Technology公司(批號：cst14709、cst14708)。Trizol試劑盒(美國Thermo Fisher Scientific公司，批號：15596026)，RNeasy Mini試劑盒(美國Qiagen公司，批號：74904)，SYBR Green Supermix試劑(公司：Bio-Rad公司；批號：4106212)，cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(日本Takara Bio公司，批號：6210A)，Takara套件(日本Takara Bio公司，批號：RR390A)，聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜(美國Millipore Corp公司，批號：T11784)，Image-Quant軟件5.2版(美國Molecular Dynamics公司)，ABI PRISM 7900HT序列檢測系統(tǒng)(美國Applied Biosystems Life公司)，Qubit平臺(美國Invitrogen公司)。配制裂解緩沖液：140 mmol/L氯化鈉、10 mmol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽(trishydroxymethylaminomethane hydrochloride，Tris-Hcl)、1%聚乙醇辛基苯基醚、1 mmol/L乙二胺四乙酸和蛋白酶抑制劑混合)；配制Tris鹽酸吐溫緩沖液：50 mmol/L Tris-Hcl+150 mmol/L氯化鈉+1%吐溫20)。

1.4 方法

1.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染：(1)用含10%胎牛血清、丙酮酸鈉和青霉素、鏈霉素的杜氏改良伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco′s modified Eagle medium，DMEM)在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MDA-MB-231、MDA-MB-436、MCF-7細(xì)胞，用含15%胎牛血清和1%青鏈霉素混合液的RPMI 1640培養(yǎng)基于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)MCF-10A、T47D、ZR-75-1、SK-BR-3細(xì)胞。待細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時，進(jìn)行細(xì)胞傳代。(2)挑選生長狀態(tài)良好的MDA-MB-231細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，以3×105個/孔的密度接種于6孔板中，分為3組，其中轉(zhuǎn)染過表達(dá)RSK4的慢病毒載體(pLVEF-1a/GFP-Puro-RSK4)的細(xì)胞(即過表達(dá)RSK4的MDA-MB-231細(xì)胞)作為實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染不含RSK4的慢病毒載體(pLVEF-1a/GFP-Puro)的細(xì)胞作為陰性對照組，未做處理的MDA-MB-231細(xì)胞為空白組，待細(xì)胞覆蓋率達(dá)60%時進(jìn)行轉(zhuǎn)染，棄上清培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染48 h后，檢測3組細(xì)胞的RSK4 mRNA和蛋白表達(dá)水平。

1.4.2 實(shí)時熒光定量PCR檢測：檢測8份乳腺癌組織及配對癌旁組織、7種細(xì)胞(MCF-10A、T47D、ZR-75-1、SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MCF-7)、3組MDA-MB-231細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組、陰性對照組、空白組)的RSK4 mRNA表達(dá)水平。采用Trizol法提取組織或細(xì)胞的總RNA，用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。在GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/)中查找基因的序列，設(shè)計相應(yīng)的引物，最終引物由Invitrogen公司合成。RSK4的上游引物為5′-TGAGTGGTGGAAACTGGGACAATA-3′，下游引物為5′-TGGCATGGACTGTGGTCATGAGTC-3′。以甘油醛三磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)作為內(nèi)參基因，GAPDH的上游引物為5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游引物為5′-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3′。按照上機(jī)說明書配置PCR反應(yīng)體系，擴(kuò)增條件：94℃ 2 min，1個循環(huán)；94℃ 30 s，55℃ 1 min和68℃ 2 min，30個循環(huán)；68℃ 5 min，延伸循環(huán)。PCR反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)擴(kuò)增曲線和溶解曲線，采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達(dá)量。

1.4.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測：檢測8份乳腺癌組織及配對癌旁組織、7種細(xì)胞(MCF-10A、T47D、ZR-75-1、SK-BR-3、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MCF-7)的RSK4蛋白表達(dá)水平，以及3組MDA-MB-231細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞、陰性對照組細(xì)胞及空白組細(xì)胞)的RSK4、AKT、ERK、p-AKT、p-ERK、E-鈣黏蛋白及波形蛋白的表達(dá)水平。將組織及細(xì)胞用配好的裂解緩沖液進(jìn)行裂解，通過二喹啉甲酸法測定蛋白質(zhì)濃度，加入蛋白上樣緩沖液后電泳分離并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，用含5%脫脂奶粉的TBST溶液封閉2 h后加入一抗，在室溫下孵育1 h，TBST洗滌3次，10 min/次，將膜與二抗在室溫下孵育1 h，再用TBST漂洗3次，10 min/次，進(jìn)行X線膠片曝光成像。用凝膠圖像分析系統(tǒng)對電泳條帶進(jìn)行密度掃描后，進(jìn)行灰度分析，以目的蛋白與 GAPDH蛋白條帶的灰度比值作為目的蛋白的相對表達(dá)量。

1.4.4 細(xì)胞遷移和侵襲能力的檢測：取3組MDA-MB-231細(xì)胞，用無血清的高糖DMED制備細(xì)胞懸液，各組取100 μl細(xì)胞懸液(約含4×104個細(xì)胞)分別加入Transwell上室中，用含15%小牛血清的DMEM完全培養(yǎng)液使Transwell下室充滿。于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中放置24 h，多聚甲醛固定，0.1%結(jié)晶紫染色20 min，磷酸緩沖鹽溶液洗滌3次，10 min/次，后置于顯微鏡下觀察并計數(shù)遷移到Transwell下室的細(xì)胞總數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)前先將60 μl配好的基質(zhì)膠(基質(zhì)膠∶DMEM=1∶6)鋪至Transwell上室，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中放置1 h，其余步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，最后計數(shù)侵襲到Transwell下室的細(xì)胞總數(shù)。

1.4.5 甲基化測序：采用Trizol法從MDA-MB-231細(xì)胞提取總DNA，并使用Qubit平臺對DNA進(jìn)行質(zhì)量分析，用硫酸氫銨處理DNA樣本后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系共20 μl：SYBR-Green Supermix 10 μl，無酶水8 μl，正向和反向引物(濃度均為10 μmol/L)各0.5 μl，經(jīng)硫酸氫鹽修飾過的DNA 1 μl。PCR反應(yīng)條件：95℃ 5 min，1個循環(huán)；95℃ 1 min、60℃ 1 min、72℃ 1 min，50個循環(huán)；最后一個循環(huán)為72℃ 1 min，最后終止在4℃。將得到的PCR產(chǎn)物純化，取50 ng產(chǎn)物使用序列檢測系統(tǒng)進(jìn)行測序，通過測量鳥嘌呤(G)和腺嘌呤(A)的峰高度值之比來評估DNA擴(kuò)增內(nèi)每個胞嘧啶-磷酸-鳥苷位點(diǎn)的甲基化水平。用去甲基化試劑5-Aza-2′-脫氧胞苷(美國Sigma公司，批號：2353-33-5)處理MDA-MB-231細(xì)胞后再次采用上述方法進(jìn)行甲基化測序。使用實(shí)時熒光定量PCR法檢測MDA-MB-231細(xì)胞及去甲基化的MDA-MB-231細(xì)胞RSK4 mRNA表達(dá)水平，方法同1.4.2。

1.4.6 構(gòu)建裸鼠移植瘤模型：采用抽簽法將12只裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組6只。在實(shí)驗(yàn)組裸鼠的乳房脂肪墊中注射過表達(dá)RSK4的MDA-MB-231細(xì)胞混懸液(細(xì)胞計數(shù)為5×106個)，在對照組裸鼠的乳房脂肪墊中注射對應(yīng)數(shù)量的陰性對照組MDA-MB-231細(xì)胞，觀察裸鼠成瘤情況。接種后的裸鼠在無特定病原體級動物房中飼養(yǎng)，每隔7 d對裸鼠進(jìn)行稱重1次并觀察瘤體大小，用游標(biāo)卡尺分別測量裸鼠瘤體短軸及長軸，瘤體體積(mm3)=1/2[長軸(mm)×短軸2(m2)]，以時間為橫坐標(biāo)，以裸鼠體重及瘤體體積為縱坐標(biāo)建立生長曲線。6周后，頸脫位處死所有小鼠，完整解剖腫瘤組織，稱瘤體重量。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩之間的比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 RSK4 mRNA及蛋白在乳腺癌組織及乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況 乳腺癌組織中RSK4 mRNA的相對表達(dá)量為(0.131±0.111)，低于癌旁正常組織的(1.000±0.000)(t=22.106，P<0.001)。乳腺癌組織中RSK4蛋白的相對表達(dá)量為(0.506±0.298)，低于癌旁正常組織的(1.034±0.069)(t=4.839，P=0.002)。

MCF-10A細(xì)胞的RSK4 mRNA及RSK4蛋白表達(dá)均高于6種乳腺癌細(xì)胞(均P<0.05)；MCF-7細(xì)胞的RSK4 mRNA及RSK4蛋白表達(dá)均高于其余5種細(xì)胞(均P<0.05)；MDA-MB-231細(xì)胞的RSK4 mRNA及RSK4蛋白表達(dá)均低于T47D、ZR-75-1、MDA-MB-436、SK-BR-3細(xì)胞(均P<0.05)。見表2。

表2 7種乳腺癌細(xì)胞RSK4 mRNA和蛋白的相對表達(dá)水平(x±s)

注：與MCF-10A細(xì)胞比較，*P<0.05；與MCF-7細(xì)胞比較，#P<0.05；與MDA-MB-231細(xì)胞比較，@P<0.05。

2.2 3組MDA-MB-231細(xì)胞RSK4表達(dá)情況、細(xì)胞遷移及侵襲能力比較 實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞RSK4 mRNA及RSK4蛋白的表達(dá)水平均高于陰性對照組和空白組(均P<0.05)，陰性對照組和空白組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均低于陰性對照組和空白組(均P<0.05)，陰性對照組和空白組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 3組MDA-MB-23細(xì)胞RSK4 mRNA和蛋白質(zhì)的相對表達(dá)水平、細(xì)胞遷移和侵襲能力比較(x±s)

注：與實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞比較，*P<0.05。

2.3 3組MDA-MB-23細(xì)胞AKT、ERK、p-AKT、p-AKT、E-鈣黏蛋白和波形蛋白表達(dá)水平比較 3組細(xì)胞AKT及ERK的表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的p-AKT、p-ERK、波形蛋白表達(dá)水平表達(dá)水平均低于其他兩組，而E-鈣黏蛋白高于其他兩組(均P<0.05)，陰性對照組和空白組細(xì)胞以上指標(biāo)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。見表4。

表4 3組MDA-MB-23細(xì)胞相關(guān)蛋白的相對表達(dá)水平(x±s)

注：與實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞比較，*P<0.05。

2.4 乳腺癌MDA-MB-23細(xì)胞中RSK4啟動子的甲基化 MDA-MB-231細(xì)胞的甲基化率為87.1%(296/340)，去甲基化后MDA-MB-231細(xì)胞的甲基化率為56.8%(193/340)。MDA-MB-231細(xì)胞RSK4 mRNA的相對表達(dá)量分別為(1.000±0.000)，低于去甲基化MDA-MB-231細(xì)胞的(5.433±0.330)(t=10.450，P=0.002)。

2.5 裸鼠體重變化及移植瘤的生長情況 兩組裸鼠的體重比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F組間=273.803，P組間<0.001)，其中在第3、4、5、6周，實(shí)驗(yàn)組的體重均高于對照組(均P<0.05)；兩組裸鼠的體重均有隨時間變化的趨勢(F時間=31 950.788，P時間<0.001)；分組與時間無交互效應(yīng)(F交互=85.875，P交互=0.106)。兩組裸鼠的瘤體體積比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F組間=4 987 320.551，P組間<0.001)，其中在第2、3、4、5、6周，實(shí)驗(yàn)組的瘤體體積均小于對照組(均P<0.05)；兩組裸鼠的瘤體體積均有隨時間變化的趨勢(F時間=8.174，P時間<0.001)；分組與時間有交互效應(yīng)(F交互=1.384，P交互<0.001)。

表5 兩組裸鼠體重比較(x±s，g)

表6 兩組裸鼠瘤體體積比較(x±s，mm3)

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中的RSK4 mRNA及蛋白表達(dá)水平均低于癌旁正常組織(均P<0.05)，提示RSK4基因作為一種抑癌基因參與乳腺癌的發(fā)生。此外，在6種乳腺癌細(xì)胞中，生物學(xué)行為惡性度最高的MDA-MB-231細(xì)胞中RSK4 mRNA及RSK4蛋白質(zhì)表達(dá)水平最低，而生物學(xué)行為惡性度最低的MCF-7細(xì)胞中RSK4的mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平最高(P<0.05)，說明RSK4表達(dá)的降低很可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。MCF-7細(xì)胞是雌激素受體陽性的乳腺癌細(xì)胞，MDA-MB-231細(xì)胞是雌激素受體陰性的乳腺癌細(xì)胞，由此推測不同乳腺癌細(xì)胞間RSK4的表達(dá)差異有可能與雌激素受體狀態(tài)有關(guān)。乳腺癌組織或細(xì)胞中mRNA表達(dá)水平下調(diào)的原因可能有[7]：(1)基因突變或缺失等原因造成的基因結(jié)構(gòu)異常；(2)啟動子胞嘧啶-磷酸-鳥苷位點(diǎn)的異常甲基化等基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制異常導(dǎo)致的轉(zhuǎn)錄生成mRNA不足。而乳腺癌組織或細(xì)胞中RSK4蛋白表達(dá)水平下調(diào)很可能是由RSK4 mRNA下調(diào)導(dǎo)致的。此外，在本研究的裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)中，第3周至第6周時實(shí)驗(yàn)組裸鼠的體重均大于對照組，第2周至第6周時實(shí)驗(yàn)組裸鼠的瘤體體積均小于對照組(均P<0.05)，提示RSK4對乳腺癌腫瘤的生長起到抑制作用，體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)均表明RSK4的功能與乳腺癌及生物學(xué)行為密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)和侵襲細(xì)胞數(shù)均低于陰性對照組和空白組(均P<0.05)，提示過表達(dá)RSK4可顯著抑制乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的遷移和侵襲能力。

RSK4是X染色體連鎖基因，由于只有一個拷貝，該基因甲基化或突變就可直接導(dǎo)致其功能喪失，從而促使腫瘤發(fā)生[7]。為了驗(yàn)證RSK4啟動子異常甲基化可能是導(dǎo)致RSK4基因沉默的原因，本研究檢測了MDA-MB-231細(xì)胞及去甲基化的MDA-MB-231細(xì)胞RSK4 mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示去甲基化的MDA-MB-231細(xì)胞中RSK4 mRNA表達(dá)水平高于MDA-MB-231細(xì)胞(P<0.05)，表明甲基化可能是導(dǎo)致RSK4基因沉默的原因[9]。

當(dāng)上皮來源的癌細(xì)胞向臨近組織或者遠(yuǎn)處器官入侵時會伴隨有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化發(fā)生，而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化有助于腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移、異質(zhì)性和耐藥的產(chǎn)生[10]。乳腺上皮細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移潛能需要RSK的下游效應(yīng)器核因子κB來誘導(dǎo)[11]。最新研究表明，腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子4可能通過AKT途徑負(fù)性調(diào)節(jié)RSK4，然后參與核因子κB的激活途徑，最后導(dǎo)致腫瘤增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[12]。RSK4也是絲裂原活化蛋白激酶/ERK途徑的下游因子[13]，是抑制ERK運(yùn)輸?shù)闹匾[瘤抑制因子。而上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化也可以通過AKT/ERK信號傳導(dǎo)途徑發(fā)生[14]。本研究對過表達(dá)RSK4的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行了AKT、ERK信號傳導(dǎo)途徑關(guān)鍵蛋白及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的兩種主要標(biāo)志物(即E-鈣黏蛋白和波形蛋白)的檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的p-AKT、p-ERK、波形蛋白表達(dá)水平均低于陰性對照組和空白組，而E-鈣黏蛋白表達(dá)水平高于陰性對照組和空白組(均P<0.05)。因此，我們推測由于RSK4異常甲基化導(dǎo)致其功能失活，進(jìn)而影響上皮細(xì)胞AKT和ERK蛋白的正常磷酸化進(jìn)程，從而促進(jìn)了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生。這也部分解釋了為什么具有更加惡性表型的腫瘤細(xì)胞往往RSK4甲基化程度更高、RSK4的表達(dá)更低。而RSK4的異常甲基化究竟是通過何種作用機(jī)制，并如何能通過AKT和ERK信號通路途徑參與了乳腺癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程，目前還在進(jìn)一步研究中。

綜上所述，RSK4對乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到抑制作用，在乳腺癌中RSK4的低表達(dá)可能由其啟動子異常甲基化引起的。RSK4或通過AKT/ERK信號通路調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程。