首發(fā)抑郁癥患者CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性、炎癥因子和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)變化臨床意義

抑郁癥是一種常見的疾病，臨床調(diào)查顯示其發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)，嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量，早期診斷和治療抑郁癥尤為重要[1，2]。CYP2D6是被廣泛研究的一種具有多態(tài)性的藥物代謝酶，很多抗精神病藥物均為CYP2D6的作用底物。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，炎癥因子與抑郁癥發(fā)生、發(fā)展具有一定的相關(guān)性，抑郁癥患者炎癥通路被激活，如細(xì)胞因子、黏附分子和趨化因子等，可作為抑郁癥的生物標(biāo)志物，越來(lái)越受到研究者關(guān)注[3，4]。研究發(fā)現(xiàn)，大腦皮質(zhì)、海馬、下丘腦等均為調(diào)節(jié)情感的主要腦區(qū)，這些腦區(qū)會(huì)產(chǎn)生大量的5-羥色胺(5-HT)、P物質(zhì)(SP)和神經(jīng)肽Y(NPY)，與單胺類神經(jīng)遞質(zhì)相互作用，從而完成生物節(jié)律的調(diào)控，故而認(rèn)為5-HT、SP和NPY紊亂可能參與抑郁癥發(fā)病機(jī)制[5，6]。因此，本研究通過(guò)探討首發(fā)抑郁癥患者CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性、炎癥因子和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)變化，旨在為首發(fā)抑郁癥預(yù)防和治療提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 選擇瀘州市精神病醫(yī)院于2018年1月～2019年1月期間收治的首發(fā)抑郁癥患者97例作為研究對(duì)象，參照美國(guó)精神障礙診斷與統(tǒng)計(jì)手冊(cè)第5版(DSM-5)[7]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合抑郁癥診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均為首發(fā)；(2)漢密爾頓抑郁量表(HAMD)評(píng)分>18分；(3)臨床資料完整；(4)獲得知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)雙相情感障礙抑郁發(fā)作者或繼發(fā)性抑郁障礙者；(2)合并心肺、肝腎功能嚴(yán)重異常者；(3)妊娠或哺乳期婦女。納入的97例患者中，男39例，女58例；年齡23～59歲，平均年齡(38.93±6.52)歲；身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)18～24 kg/m2，平均BMI(21.83±1.94)kg/m2；吸煙史31例。另選擇瀘州市精神病醫(yī)院于2018年1月～2019年1月期間健康體檢者78名作為對(duì)照組，男34名，女44名；年齡21～58歲，平均年齡(38.26±6.10)歲；BMI 18～23 kg/m2，平均BMI(21.34±1.78)kg/m2；吸煙史24例。兩組基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性檢測(cè) 受試者于入院2 h內(nèi)抽取外周靜脈血2 ml，以EDTA-K2抗凝，放置于-80 ℃下保存待測(cè)。采用人類基因組DNA提取試劑盒提取全血基因組DNA，放置于-80 ℃下保存待測(cè)。由生工生物工程(上海)股份有限公司合成引物，引物序列：上游引物：5’-CCA TTT GGT AGT GAG GCA GGT-3’，下游引物：5’-CAC CAT CCA TGT TTG CTT CTG GT-3’。采用RT-PCR檢測(cè)基因型，總反應(yīng)體積30 μl，其中包括DNA模板2 μl，上下游引物各0.5 μl，2 μl dNTP，3 μl 10×loading buffer，21.8 μl ddH20，0.2 μl taq酶。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，60.4 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s；30個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增550bp DNA目的片段。采用特異性限制性內(nèi)切酶Ncol按照說(shuō)明書反應(yīng)條件酶切：10.5 μlNco，10 μl DNA，2 μl 10×buffer tango，0.7 μl ddH2O，取酶切后產(chǎn)物6 μl，酶切凝血酶原基因rs1065852位點(diǎn)。于37 ℃條件下孵育3 h，終止反應(yīng)。置消化段于3%瓊脂糖凝膠電泳，采用EB染色后以DL2000 DNA片段長(zhǎng)度作為標(biāo)準(zhǔn)物，于紫外燈下對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。

1.2.2 炎癥因子檢測(cè) 包括白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，受試者均于入院24 h內(nèi)采集外周靜脈血3 ml，分離血漿，離心半徑10 cm，離心10 min，于-20 ℃下保存待測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定IL-1β、IL-6和TNF-α含量。

1.2.3 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)檢測(cè) 取上述血漿標(biāo)本，采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定5-HT、SP和NPY含量。

1.2.4 觀察指標(biāo) (1)觀察兩組HAMD評(píng)分變化，以評(píng)分<8分為正常，以評(píng)分≥8分且≤20分可能有抑郁癥，以評(píng)分>20分且≤35分為肯定有抑郁癥，以評(píng)分>35分為嚴(yán)重抑郁癥；(2)觀察兩組CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性等位基因分布頻率與基因型頻率；(3)觀察兩組血漿炎癥因子變化；(4)觀察兩組單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平變化。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組HAMD評(píng)分比較 抑郁癥組HAMD評(píng)分[(23.98±4.35)分]高于對(duì)照組HAMD評(píng)分[(5.48±1.53)分](t=35.805，P<0.05)。

2.2 兩組CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性基因型頻率與等位基因分布頻率比較 抑郁癥組TT基因型頻率高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組間等位基因C、T頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性基因型 頻率與等位基因分布頻率比較[n(%)]

2.3 兩組血漿炎癥因子變化比較 抑郁癥組血漿IL-1β、IL-6、TNF-α和SP水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，5-HT和NPY水平均低于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組血漿炎癥因子、單胺類神經(jīng)遞質(zhì) 水平變化比較

3 討論

抑郁癥由于具有高發(fā)病率、高致殘率和高致死率越來(lái)越引起社會(huì)的廣泛重視，給家庭和社會(huì)造成沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[8，9]。雖然近年來(lái)對(duì)抑郁癥研究取得進(jìn)展，但其具體病理生理機(jī)制和確切發(fā)病原因尚未完全闡明。CYP酶活性的人群特征呈遺傳多態(tài)性，并且編碼基因突變導(dǎo)致酶代謝相應(yīng)底物的速率或能力增強(qiáng)或減弱，從而影響抗抑郁藥的血藥濃度，進(jìn)一步影響療效。CYP2D6是具有多態(tài)性的一種藥物代謝酶，如文拉法辛、帕羅西汀等抗精神病藥物均為CYP2D6基因的作用底物[10]。CYP2D6酶活性存在明顯個(gè)體差異，且存在多位點(diǎn)基因型。目前，臨床上尚無(wú)有關(guān)CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性與抑郁癥的相關(guān)性研究[11]。本文通過(guò)初步研究發(fā)現(xiàn)，抑郁癥組TT基因型頻率高于對(duì)照組，兩組間等位基因C、T頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，認(rèn)為rs1065852位點(diǎn)T基因可能是抑郁癥易感基因。

炎癥因子主要是由免疫細(xì)胞分泌的具有調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答生物活性的信號(hào)分子，在抑郁癥的病理生理中具有重要作用，越來(lái)越受到重視[12,13]。IL-1可啟動(dòng)多項(xiàng)反應(yīng)，如細(xì)胞因子的產(chǎn)生、T細(xì)胞和B細(xì)胞的活化、中性粒細(xì)胞聚集和活化及發(fā)熱等。IL-1包括IL-1α和IL-1β等11種因子，其中IL-1β主要集中表達(dá)于骨髓細(xì)胞上，需模式識(shí)別受體的激活，認(rèn)為其可能作為抑郁癥革新治療的生物靶點(diǎn)之一。研究報(bào)道表明，顳葉癲癇伴抑郁癥患者血漿中IL-1β含量較健康者和顳葉癲癇不伴抑郁癥患者高，且與HAMD得分呈正相關(guān)，由此可見高水平IL-1β可能與抑郁癥相關(guān)[14]。本研究表明，抑郁癥組血漿IL-1β水平高于對(duì)照組，說(shuō)明首發(fā)抑郁癥患者血漿IL-1β水平升高，可能是由于IL-1β通過(guò)激活海馬神經(jīng)干細(xì)胞上的IL-1受體I型，從而影響核因子κB信號(hào)通路，海馬細(xì)胞增殖減少，進(jìn)一步導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生。IL-6主要由輔助性T細(xì)胞2和單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有刺激肝細(xì)胞合成急性期蛋白的作用。研究報(bào)道顯示，抑郁癥患者血清水平高于健康人[15]。本研究表明，抑郁癥組血漿IL-6水平高于對(duì)照組，說(shuō)明首發(fā)抑郁癥患者血漿IL-6水平升高。IL-6是下丘腦-垂體-腎上腺軸的強(qiáng)烈刺激物，而下丘腦-垂體-腎上腺軸過(guò)度激活則會(huì)引起皮質(zhì)醇大量分泌，而其中皮質(zhì)醇的受體主要分布于前額葉、杏仁核及海馬等情緒認(rèn)知調(diào)節(jié)腦區(qū)和環(huán)路，并且長(zhǎng)期高濃度皮質(zhì)醇會(huì)對(duì)這些腦區(qū)產(chǎn)生神經(jīng)毒性作用，從而導(dǎo)致其功能和(或)結(jié)構(gòu)異常，使其情感調(diào)節(jié)功能紊亂，造成抑郁癥的發(fā)生。TNF-α是主要由多核巨細(xì)胞產(chǎn)生的一種分泌蛋白，可誘導(dǎo)干擾素、白介素等的生成和釋放，可引起炎癥的級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)。學(xué)者研究報(bào)道顯示，抑郁癥患者血清TNF-α含量明顯升高，認(rèn)為其可能參與抑郁癥的病理生理過(guò)程[16]。本研究表明，抑郁癥組血漿TNF-α水平高于對(duì)照組，說(shuō)明首發(fā)抑郁癥患者血漿TNF-α水平升高，可能是由于TNF-α通過(guò)胱天蛋白酶相關(guān)通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，可能對(duì)抑郁癥產(chǎn)生重要作用。

抑郁癥具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但大部分觀點(diǎn)認(rèn)為，抑郁癥發(fā)生不僅是心理反應(yīng)引起，同時(shí)與非多巴胺能神經(jīng)生化改變相關(guān)。有研究報(bào)道顯示，抑郁癥患者下丘腦處5-HT存在病理性改變，且多巴胺減少也會(huì)引起單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量下降，從而影響5-HT能神經(jīng)元及其通路，導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生，故而測(cè)定5-HT水平可了解抑郁癥發(fā)生[17]。近年來(lái)，研究認(rèn)為NYP可能是抑郁癥診斷和療效判斷的一項(xiàng)指標(biāo)。NYP主要在下丘腦參與晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)，及在邊緣系統(tǒng)參與情緒的整合，認(rèn)為可能影響與之共存的經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)如腎上腺素、5-HT，進(jìn)一步參與抑郁癥的發(fā)生[18]。SP廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，是神經(jīng)激肽中一種含量最豐富的腦腸肽，主要參與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)。中樞SP可能以調(diào)質(zhì)或遞質(zhì)的方式介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)和情緒，參與抑郁癥的發(fā)病過(guò)程[19]。本研究表明，抑郁癥組血漿5-HT和NPY水平低于對(duì)照組，而SP水平高于對(duì)照組，說(shuō)明抑郁癥患者存在明顯的5-HT、NPY和SP紊亂，從而影響中樞神經(jīng)功能。

綜上所述，CYP2D6基因位點(diǎn)rs1065852多態(tài)性、炎癥因子和單胺類神經(jīng)遞質(zhì)與抑郁癥密切相關(guān)，認(rèn)為rs1065852位點(diǎn)T基因可能是抑郁癥易感基因。