養(yǎng)殖業(yè)中喹噁啉類抗生素殘留檢測研究進展

宋麗廷 張 娜 喬俊杰 許傳兵

（濰坊工商職業(yè)學(xué)院 濰坊市經(jīng)濟學(xué)校 山東 諸城 262200）

喹噁啉類抗生素，是一類具有喹噁啉-1， 4-二氧化物結(jié)構(gòu)的化學(xué)合成類的抗菌促生長劑[1，2]。具有相同的母核結(jié)構(gòu)，該類的抗生素種類繁多，主要有乙酰甲喹(Mequindox， MEQ)、喹烯酮(Quinocetone， QCT)、卡巴氧(Carbadox，CBDX)、喹乙醇(Olaquindox)和喹賽多(Cyadox)等。它們都具有廣譜抗菌、抗球蟲、促進動物生長和提高飼料效率的作用，能夠抑制細菌DNA的合成，且價格便宜，進而為生產(chǎn)養(yǎng)殖而被廣泛的添加到飼料中。但是，由于有些不法分子違規(guī)對其進行使用，超劑量將這些抗生素類非法的添加到飼料中，甚至將其當(dāng)作營養(yǎng)添加劑來長期使用，從而導(dǎo)致一系列的嚴重后果，如細菌耐藥性及動物源性食品中的殘留等。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類抗生素存在著明顯的安全性問題[3]。如乙酰甲喹的毒性較大，容易引起中毒，并有研究證明其毒性與代謝密切相關(guān)；喹烯酮同樣有遺傳毒性和細胞毒性；卡巴氧有致癌致畸和致突變作用[4]；喹乙醇及其殘留能產(chǎn)生遺傳毒性和光敏毒性、染色體畸變和腎上腺皮質(zhì)損害等[5]。

1 藥理作用

喹噁啉類抗生素，主要包括乙酰甲喹、喹烯酮、卡巴氧、喹乙醇和喹賽多等幾種類型。喹賽多的毒性相對較小，不作研究。

1.1 乙酰甲喹的藥理作用 乙酰甲喹屬于低毒、高效而又廣譜的抗菌類。對密螺旋體及多種細菌具有較強的抑制作用[3，6]，對革蘭氏陰性菌作用強于革蘭氏陽性菌，對豬痢疾密螺旋體的作用尤為突出且復(fù)發(fā)率低。對用于治療豬和仔豬痢疾、犢牛腹瀉和禽霍亂等疾病有很好的療效。通過抑制菌體的脫氧核糖核酸(DNA)的合成來抑制有害菌體是乙酰甲喹主要作用方式。

1.2 喹烯酮的藥理作用 喹烯酮對痢疾桿菌大腸桿菌、鼠傷寒和金黃色葡萄球菌等均有顯著的抑制作用，且抗菌、促生長。喹烯酮抑菌作用是通過抑制細菌DNA的合成來實現(xiàn)的，對消化道內(nèi)細菌的抑制，可以減少病原微生物的生長繁殖，從而保護腸壁和腸道內(nèi)的有益菌群不受寄生蟲或微生物的侵害，提高各種養(yǎng)分的吸收和消化，以此防止疾病發(fā)生進而可以加快動物的生長[7]。

1.3 卡巴氧和喹乙醇的藥理作用 卡巴氧和喹乙醇曾經(jīng)作為動物的專用藥，具有提高飼料轉(zhuǎn)化率、促進蛋白質(zhì)同化，進而増加畜禽瘦肉率和促進其生長的優(yōu)點，廣泛的用于羊、牛、豬和雞等，能夠抗菌治病、促進生長及疾病防治[8]。

2 毒理作用

由于喹噁啉藥物的違規(guī)以及超劑量長久使用，引發(fā)了一系列的問題，如食品中的殘留和細菌耐藥性等。已有研究發(fā)現(xiàn)，喹噁啉類部分藥物在動物體內(nèi)代謝后能夠產(chǎn)生毒性較大的代謝物，會對組織造成一定的毒性損害，進而會引起致癌、致畸、致突變的風(fēng)險[6，9]。

2.1 乙酰甲喹的毒理作用 乙酰甲喹在臨床應(yīng)用廣泛，肌注或內(nèi)服均容易進行吸收，但大劑量或長期使用容易引發(fā)中毒[10，11]。同時因養(yǎng)殖戶對此缺乏準(zhǔn)確的了解，以及多種含有乙酰甲喹的獸藥制劑混合使用而導(dǎo)致此藥的過量使用等原因，導(dǎo)致中毒事件時有發(fā)生，家禽乙酰甲喹中毒癥狀與新城疫相似，在診斷時易發(fā)生誤診。其中毒的引發(fā)主要是因為各種原因?qū)е碌倪^量使用[12]。

2.2 喹烯酮的毒理作用 喹烯酮具有一定的遺傳毒性和細胞毒性，甚至具有致癌、致畸、致突變作用[13，14]。王玉春[15]等和Wang[16]等均對喹烯酮進行了一般毒性研究，二者的急性毒性試驗結(jié)果相似，王玉春等人的喹烯酮亞急性毒性試驗顯示喹烯酮對Wistar大鼠及昆明鼠無明顯的亞急性毒性，但Wang等人的結(jié)果顯示所有劑量組均出現(xiàn)堿性氨基轉(zhuǎn)移酶水平下降，1800mg/kg劑量組的小鼠呈現(xiàn)明顯的體重下降，肝臟、腎臟質(zhì)量增加?？赡苁怯捎诙邅喖毙远拘栽囼炈O(shè)劑量組不同導(dǎo)致的結(jié)果不同。

2.3 卡巴氧和喹乙醇的毒理作用 （1）卡巴氧和喹乙醇已通過毒理學(xué)研究表明，具有致癌、致畸等毒性作用[17]。目前，由于使用尚不規(guī)范且價格便宜，在實際生產(chǎn)中常有大劑量、長時間用藥的情況出現(xiàn)，由此，在動物的體內(nèi)造成蓄積殘留，進而嚴重危害人類健康。其本身不穩(wěn)定，故在動物體內(nèi)代謝快速，代謝產(chǎn)物分別為喹噁啉-2-羧酸(QCA)及3-甲基喹噁啉-2-羧酸(MQCA)。雖然說聯(lián)合國把喹乙醇的代謝產(chǎn)物暫定為MQCA，但是，實驗證明，MQCA也是喹烯酮和乙酰甲喹的代謝產(chǎn)物[18，19]，是以不能僅僅靠MQCA的結(jié)果就此判定為是喹乙醇的使用。（2）在動物體內(nèi)，喹噁啉類抗生素經(jīng)脫單氧和脫雙氧之后主要生成物為QCA和MQCA，故此兩種喹噁啉類抗生素成為組織機構(gòu)確定的監(jiān)控對象和獸藥殘留標(biāo)示物。喹噁啉類抗生素可以在生物體內(nèi)被轉(zhuǎn)化，通過脫氧形成多種代謝產(chǎn)物，而代謝物在動物組織體內(nèi)的殘留問題不容忽視[20，21]。

3 檢測方法研究

3.1 乙酰甲喹的檢測方法研究 （1）已有報道[22-24]中，用于乙酰甲喹檢測的方法主要有紫外分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。（2）袁群英[22]用紫外分光光度法測定乙酰甲喹的含量，檢測波長為328nm。楊成對[23]等采用的是氣相色譜-質(zhì)譜法來對乙酰甲喹樣品中的共存物進行定量和定性分析研究的。在紫外檢測波長為372nm時，測得飼料樣品中乙酰甲喹的定量限為10.0μg/kg。劉發(fā)全[24]等人用磷酸緩沖液(pH值3.0)-乙腈-甲醇(55：25：20)作為提取液，對飼料中的乙酰甲喹、喹烯酮和喹乙醇進行超聲提取，用高效液相色譜儀進行檢測，在260nm紫外檢測波長下，方法的檢出限為2mg/kg。

3.2 喹烯酮的檢測方法研究 （1）目前報道的用于檢測喹烯酮的方法主要是有高效液相色譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[25，26]，此外還有分子印跡聚合物和納米金探針等新技術(shù)的應(yīng)用。（2）金錄勝[25]采用反相液相色譜法對喹烯酮及其制劑的含量進行測定，在0.05～0.25mg/ml的濃度范圍內(nèi)，喹烯酮的濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系(R=0.9993)，平均回收率為99.89%，變異系數(shù)為1.13。吳仕輝[26]等人采用高效液相色譜法對魚蝦中喹烯酮殘留量的檢測方法進行了建立，代表材料為凡納濱對蝦和羅非魚的肌肉樣品，經(jīng)過乙酸乙酯提取和正己烷脫脂等一系列的前處理后，用高效液相色譜-紫外檢測法進行分析與檢測。結(jié)果表明，在0.02～1.0μg/ml的系列濃度范圍之內(nèi)，喹烯酮標(biāo)準(zhǔn)品是呈良好線性關(guān)系的，且R2=0.9998；其檢出限為20μg/kg，加標(biāo)回收率為81.2%～107.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%～7.7%。

3.3 QCA和MQCA的檢測方法研究 （1）Hutchinson[27]等建立了同時檢測豬肝中QCA和MQCA的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法。樣品經(jīng)酶解后，進行液液萃取，萃取液經(jīng)SPE固相萃取小柱凈化，洗脫液再次液液萃取，經(jīng)過樣品的濃縮和富集后，檢測。該方法中，QCA和MQCA的檢測限分別為0.4μg/kg和0.7μg/kg，定量限分別為1.2μg/kg和3.6μg/kg。Wu[28]等使用乙腈-水(60：40)作為提取液對豬飼料中的卡巴氧、喹烯酮和喹乙醇進行超聲提取，提取液經(jīng)HLB固相小柱凈化，用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜儀進行檢測，定量限低于20μg/kg。Merou[29]等建立了同時檢測卡巴氧、QCA、MQCA在肌肉中的含量的LC-APCI-MS/MS方法，樣品經(jīng)酶解、提取后經(jīng)固相萃取凈化，經(jīng)過凈化的提取物使用反相液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法進行檢測，其藥物的檢測限和定量限分別為0.09～0.24μg/kg和0.12～0.41μg/kg。（2）Zhang[30]等以氘標(biāo)記的QCA為內(nèi)標(biāo)，建立了魚肉中MQCA的超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測法，魚肉樣品水解后經(jīng)MAX固相萃取小柱凈化，2%的甲酸-乙酸乙酯洗脫，洗脫液于40℃下氮吹至干，1ml流動相復(fù)溶后進儀器檢測；檢測限和定量限分別是0.1ng/g和0.25ng/g，在添加濃度0.25～50.0ng/g范圍內(nèi)，MQCA的回收率為92.7%～104.3%。（3）Wu[31]等研究了同時檢測動物組織中QCA和MQCA的高效液相色譜法，樣品經(jīng)偏磷酸酸解后，甲醇提取，乙酸乙酯液液萃取，再使用MAX固相萃取小柱凈化，該方法在2～100mg/kg濃度添加范圍內(nèi)，QCA和MQCA的紫外吸收峰面積與添加濃度呈線性相關(guān)，檢測限為0.7～2.6mg/kg，定量限1.3～5.6mg/kg。