獸用抗病毒中藥復(fù)方制劑抗炎機理的研究

李淑煥 薄永恒 （山東農(nóng)業(yè)工程學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院 濟南 250100 ②山東省獸藥質(zhì)量檢驗所 山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風(fēng)險評估重點實驗室 濟南）

本著綠色環(huán)保需求，按照中藥嚴密組方原則和中獸醫(yī)理、法、方、藥中獨特的“異病同治”的治療原則，制備了一種中藥復(fù)方制劑。本制劑是由板藍根、大青葉等多味中藥組成，主要治療禽的傳染性支氣管炎。由于病毒病與炎癥的密切聯(lián)系，前期已對本中藥復(fù)方進行了靶動物臨床實驗以及實驗室抗炎藥理實驗，治療效果顯著，為探究其抗炎機理，本實驗以小白鼠跖腫脹炎癥模型為主，測定了相關(guān)炎癥因子水平。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品與試劑 中藥復(fù)方制劑(由板藍根、大青葉等多味中藥組成)由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所研制；三氯乙酸、1%角叉菜膠，正丁醇、硫代巴比妥酸、氫氧化鉀、甲醇，均為分析純。

1.1.2 試驗動物 18～22g健康昆明鼠，購于中牧集團動物房。

1.1.3 主要試驗儀器 AL204精密電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)、UV-120-02型紫外-可見分光光度計(日本島津儀器有限公司)、Cary Eclipse熒光分光光度計(美國瓦里安公司)、DNM-9602G型酶標(biāo)儀(北京普朗新技術(shù)有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠足跖腫脹炎癥模型制作[1]取健康昆明小鼠，隨機分為4組，每組10只，雌雄各半，分開飼養(yǎng)，分別為中藥復(fù)方制劑灌胃高劑量組(16g/kg)、中藥復(fù)方制劑灌胃低劑量組(8g/kg)、模型組。其中模型組每次注射與制劑等體積生理鹽水，連續(xù)4d。最后一次給藥0.5h后，每只小鼠右后足足壞皮下注射1%角叉菜膠0.03m1致炎，4h后拉頸處死小鼠，齊踝關(guān)節(jié)切下兩后足分別精確稱重。

1.2.2 小鼠炎性組織中中PGE2含量的測定[2]在上述角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹實驗中處死小鼠，齊踝關(guān)節(jié)切下炎足，剝皮后浸于裝有2.5ml生理鹽水的試管中，充分振蕩，2h后取出炎足，將浸泡液在離心機上3000rpm離心15min；取上清液0.5mI，加入到2m1 0.5mol/L KOH-甲醇溶液中，在50℃水浴中異構(gòu)化20min；水浴后加甲醇至5m1進行稀釋，在分光光度計278nm處測紫外吸收，以吸光度表示溶液中PGE2含量，OD278與質(zhì)量的換算公式如下：CPGE2(μg/g)=A×13.31×D×V/炎足重(V=PGE2溶液體積，D：稀釋倍數(shù))。

1.2.3 小鼠炎性組織中血清溶菌酶含量的測定在上述角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹實驗中處死小鼠前眼眶取血，離心，取血清，-20℃保存待測，測定方法按南京建成試劑公司血清溶菌酶檢測試劑盒測定方法測定。

1.2.4 小鼠炎性組織中丙二醛(MDA)[3]及血清中一氧化氮(NO)[4]含量的測定 在上述角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹實驗中處死小鼠前眼眶取血，離心，取血清，用Griess試劑法測血清中一氧化氮的含量；將上述角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹試驗中小鼠炎足剪碎放置于0.45ml20%的三氯醋酸(TCA)中浸泡，4h后棄炎足，加入0.1mo1/L鹽酸1ml，1%的硫代巴比妥酸(TBA)0.55ml，充分混勻，90～95℃水浴中保溫15min，然后加2ml生理鹽水稀釋，3000r/min離心5min，取上清液于532 nm處測吸光度值，計算MDA含量。

1.2.5 小鼠炎性組織中組胺(histamine)和5-色胺(5-TH)含量的測定[5]將上述角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹試驗中小鼠炎足劃破皮膚組織后浸泡于酸化正丁醇4.0ml中4h，超聲處理20min，按熒光分光光度法測組胺、5-色胺的含量。

2 結(jié)果

2.1 小鼠炎性組織中PGE2含量

結(jié)果(表1)表明，中藥復(fù)方制劑高劑量組與模型組相比較差異不顯著(P＞0.05)，中藥復(fù)方制劑低劑量組與模型組相比較差異不顯著(P＞0.05)，說明中藥復(fù)方制劑對炎足中的PGE2的釋放沒有顯著的影響。

表1 中藥復(fù)方制劑對角叉菜膠所致小鼠足跖腫脹炎性組織中PGE 含量

2.2 小鼠炎性組織中血清溶菌酶含量

結(jié)果(表2)表明，中藥復(fù)方制劑高劑量組與模型組組相比較差異顯著(P＞0.05)，中藥復(fù)方制劑低劑量與模型組組相比較差異不顯著(P＞0.05)，說明中藥復(fù)方制劑不能明顯抑制致炎后血清溶菌酶的釋放。

表2 中藥復(fù)方制劑對血清溶菌酶含量的影響

2.3 小鼠炎性組織中丙二醛(MDA)[3]及血清中一氧化氮(NO)[4]含量

結(jié)果(表3)表明，中藥復(fù)方制劑在8g/kg劑量下能顯著抑制炎性組織中MDA及血清NO的釋放，而高劑量對炎性組織中MDA及血清NO的釋放抑制不明顯。

表3 中藥復(fù)方制劑對炎性組織中MDA及血清NO含量的影響

2.4 對小鼠炎性組織中組胺(histamine)和5-色胺(5-TH)含量的測定[5]

結(jié)果(表4)表明，中藥復(fù)方制劑在高劑量(16g/kg)下能顯著抑制炎性組織中組胺的釋放，低劑量對炎性組織中組胺的釋放抑制不明顯；中藥復(fù)方制劑能顯著抑制炎性組織中5-色胺的釋放，且以高劑量為優(yōu)。

表4 中藥復(fù)方制劑對炎性組織中組胺和5羥色胺含量的影響

3 討論

（1）中藥復(fù)方制劑是一種抗病毒新獸藥，它在禽傳染性支氣管炎的預(yù)防與治療中有良好的效果。而炎性反應(yīng)是最基本的病理過程和機體對損傷性刺激最原始的保護性反應(yīng)，也是許多不同類型疾病的一個共同的病理基礎(chǔ)，包括生物性(感染、超敏反應(yīng)等)、化學(xué)性及物理性等病因性疾病[6]。（2）研究表明中藥復(fù)方制劑具有抗氧化能力，清除氧自由基，減少丙二醛的釋放，避免機體損傷；可以抑制細胞釋放的血管活性胺類炎性介質(zhì)—組胺、5-色胺的釋放，從而減少毛細血管通透性的增加；明顯抑制血清中一氧化氮的過量釋放，減少了它的細胞毒作用；而對溶菌酶的釋放以及腎上腺素E2的釋放無抑制作用。研究結(jié)果提示，中藥復(fù)方制劑抗炎機制與抑制炎性組織中丙二醛、組胺、5-色胺及血清中一氧化氮的釋放有關(guān)。