PD98059抑制MAPK/ERK信號(hào)通路對(duì)胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響

劉夢(mèng)琪，張文文，陳曉偉，沈孝兵*

（東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院環(huán)境醫(yī)學(xué)工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 南京 210009）

胃癌是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，高發(fā)病率和高死亡率使人類的健康和生命受到了極大的威脅。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2015年全國(guó)新增胃癌病例大約67.9萬(wàn)例，新增死亡病例大約49.8萬(wàn)例[1]。轉(zhuǎn)移在胃癌患者進(jìn)展和預(yù)后的過(guò)程中起關(guān)鍵作用[2]，而目前胃癌的預(yù)后情況仍不樂(lè)觀[3]。研究表明胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與許多關(guān)鍵信號(hào)通路的激活有關(guān)。絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）是研究不同膜受體與細(xì)胞核之間聯(lián)系最重要的信號(hào)途徑，在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[4]。MAPK信號(hào)通路分為4類，包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular regulated protein kinases， ERK）、 P38、JNK和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5。ERK是MAPK家族中備受關(guān)注的中心成員，MAPK/ERK信號(hào)通路是細(xì)胞因子調(diào)控細(xì)胞途徑的重要通路[5]，其上游分子MEK可通過(guò)磷酸化Tyr和Th2兩個(gè)位點(diǎn)而激活ERK[6]。磷酸化后的ERK成為有活性的蛋白激酶，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種功能，包括細(xì)胞增殖、分化、凋亡和衰老，同時(shí)參與炎癥因子的產(chǎn)生和分泌[7-8]。研究報(bào)道，MAPK/ERK信號(hào)通路的激活出現(xiàn)在許多惡性腫瘤細(xì)胞中（包括肺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌等）[9]。本研究驗(yàn)證了MAPK/ERK信號(hào)通路在胃癌中的激活情況，并進(jìn)一步探討了PD98059對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，為通路抑制劑在臨床中的應(yīng)用積累更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

人低分化胃癌細(xì)胞株SGC-7901購(gòu)于南京凱基生物公司，正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1由本實(shí)驗(yàn)室傳代培養(yǎng)。抑制劑PD98059購(gòu)自Selleck公司，F(xiàn)ITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒及細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京凱基生物公司，引物由南京金斯瑞公司合成，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司，Western blot試劑盒購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司，抗體（一抗actin、ERK1/2、p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2和HRP標(biāo)記山羊抗兔二抗、HRP標(biāo)記山羊抗鼠二抗）購(gòu)自美國(guó)CST公司。

Quant-Studio 7實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）儀購(gòu)于美國(guó)ABI公司，SDS-PAGE電泳儀及濕轉(zhuǎn)儀購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司，流式細(xì)胞儀來(lái)自美國(guó)BD公司，Multiskan MK3型酶標(biāo)儀來(lái)自美國(guó)Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將人胃癌細(xì)胞SGC-7901和正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1分別置于含有10%胎牛血清、1×105U/L青霉素、100 mg/L鏈霉素的RPMI-1640和DMEM培養(yǎng)基中，置于CO2體積分?jǐn)?shù)為5%、37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至近融合狀態(tài)時(shí)，用含0.25%EDTA的胰蛋白酶消化傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 qPCR檢測(cè)胃癌細(xì)胞和正常胃黏膜細(xì)胞關(guān)鍵基因表達(dá) 當(dāng)SGC-7901和GES-1細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，Trizol法提取總RNA，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒配制溶液后放入PCR儀中反應(yīng)，反應(yīng)條件為37℃、15 min，85℃、5 s，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。登陸NCBI網(wǎng)站查找人類基因序列，登陸IDT引物設(shè)計(jì)網(wǎng)站設(shè)計(jì)引物。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為20μL，其中PrimeScript RT酶1 μL，RT Primer Mix 1 μL，5×PrimeScript緩沖液4μL，無(wú)RNA酶水4μL，去除基因組DNA反應(yīng)液10μL。MEK、ERK、β-actin基因引物序列見(jiàn)表1。用無(wú)RNA酶水將引物稀釋至10μmol/L，-20℃保存。采用Quant StudioTMReal-Time PCR進(jìn)行數(shù)據(jù)采集分析。qPCR擴(kuò)增條件為95℃、2 min預(yù)變性，40個(gè)循環(huán)擴(kuò)增（95℃、15 s，60℃、30 s），每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。采用2-ΔΔCT值（ΔCT=CT，目的基因-CT，actin；ΔΔCT=ΔCT，實(shí)驗(yàn)組-ΔCT，對(duì)照組）表示目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列

1.2.3 Western blot檢測(cè)胃癌細(xì)胞SGC-7901和正常胃黏膜細(xì)胞GES-1關(guān)鍵蛋白的表達(dá) 當(dāng)胃癌細(xì)胞SGC-7901和GES-1細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，PBS收集細(xì)胞，離心后加入120μL裂解液，充分混勻后置于冰上裂解20 min。12 000 r/min離心10 min，取上清。BCA法測(cè)定蛋白濃度。加入緩沖液煮沸蛋白后-20℃保存。用10%SDS-PAGE凝膠電泳，電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5%脫脂牛奶在室溫封閉1 h，1∶1 000 稀 釋 的 一 抗 （β-actin、 ERK1/2、 p-ERK1/2、MEK1/2、p-MEK1/2）在4℃孵育過(guò)夜，次日1∶5 000稀釋的二抗（HRP標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗鼠）室溫孵育1 h，TBST洗滌5次，用顯色液曝光并觀察結(jié)果。

1.2.4 CCK-8檢測(cè)PD98059處理后的細(xì)胞活力 SGC-7901細(xì)胞長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，0.25%胰酶消化細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，配成每孔為5×104個(gè)細(xì)胞的懸液后，以每孔100 mL將細(xì)胞接種于96孔板，置于CO2體積分?jǐn)?shù)為5%、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后棄去原培養(yǎng)液，每孔加入100μL無(wú)血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)箱內(nèi)饑餓處理24 h。

饑餓處理結(jié)束后，設(shè)置空白組（只加培養(yǎng)基不加細(xì)胞），對(duì)照組（只加細(xì)胞和培養(yǎng)基，不加藥物）和實(shí)驗(yàn)組（分別加入濃度為25、50、100、200、300和400 mmol/L的抑制劑PD98059），每組6個(gè)復(fù)孔。恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h后，吸去培養(yǎng)基，每孔加入CCK-8溶液10 mL，繼續(xù)培養(yǎng)1～4 h。酶標(biāo)儀檢測(cè)吸光度D（450）值，按下式計(jì)算細(xì)胞增殖率。

1.2.5 qPCR檢測(cè)PD98059處理后的胃癌細(xì)胞關(guān)鍵 基因表達(dá) 于6孔板中接種1×105個(gè)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SGC-7901細(xì)胞。根據(jù)CCK-8結(jié)果篩選出PD98059的處理劑量，抑制劑配制終濃度為0、25、50和100 μmol/L。饑餓處理24 h后開(kāi)始加藥。藥物處理24 h后qPCR檢測(cè)MEK、ERK基因表達(dá)。

1.2.6 Western blot檢測(cè)PD98059處理后胃癌細(xì)胞關(guān)鍵蛋白的表達(dá) 設(shè)置3個(gè)不同濃度的實(shí)驗(yàn)組分別加入濃度為25、50和100μmol/L的PD98059，培養(yǎng)24 h后利用Western blot檢測(cè)細(xì)胞中MEK、ERK等關(guān)鍵蛋白表達(dá)。

1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期 設(shè)置對(duì)照組（不加抑制劑PD98059）和實(shí)驗(yàn)組（分別加入濃度為25、50、100μmol/L的抑制劑PD98059），收集各組加藥24 h后的SGC-7901細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細(xì)胞兩次（2 000 r/min離心5 min）并調(diào)整細(xì)胞濃度至1×106個(gè)/mL，離心棄上清，加入100μL RNase溶液吹打混勻，37℃水浴30 min，利用500μL碘化丙啶（PI）染液重懸細(xì)胞，4℃避光30 min，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，上機(jī)檢測(cè)。

1.2.8 Annexin V/PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡 設(shè)置對(duì)照組（不加PD98059抑制劑）和實(shí)驗(yàn)組（分別加入濃度為25、50、100 μmol/L的PD98059）處理24 h后收集細(xì)胞，離心棄上清。按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，輕輕混勻后室溫避光放置10 min。1 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0和Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，不同劑量組間采用單因素方差分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 胃癌細(xì)胞SGC-7901和正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1中MEK和ERK mRNA的表達(dá)

利用qPCR技術(shù)測(cè)定MEK和ERK mRNA的表達(dá)，擴(kuò)增曲線較好，熔解曲線表明特異性良好。MEK和ERK mRNA在胃癌細(xì)胞SGC-7901中的表達(dá)顯著高于正常細(xì)胞GES-1，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。如圖1。

圖1 SGC-7901和GES-1細(xì)胞中MEK和ERK mRNA的表達(dá)

2.2 MEK和ERK及其磷酸化蛋白在胃癌細(xì)胞SGC-7901和GES-1細(xì)胞中的表達(dá)

Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示總MEK和ERK蛋白在胃癌細(xì)胞SGC-7901的表達(dá)與對(duì)照組GES-1細(xì)胞相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但SGC-7901細(xì)胞中的磷酸化蛋白p-MEK、p-ERK的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)圖2。

2.3 不同濃度PD98059對(duì)SGC-7901細(xì)胞增殖能力的影響

如圖3所示，CCK-8法測(cè)定結(jié)果得出，0～200 μmol/L PD98059處理SGC-7901細(xì)胞后，PD98059對(duì)細(xì)胞具有抑制作用，且抑制作用隨其濃度的增加而降低，呈現(xiàn)劑量依賴性。當(dāng)PD98059濃度處于200～400 μmol/L時(shí)抑制作用逐漸趨于平穩(wěn)，達(dá)到300μmol/L時(shí)進(jìn)入平臺(tái)期，300μmol/L與400μmol/L兩組間細(xì)胞增殖率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 PD98059作用后MEK和ERK mRNA水平的表達(dá)

與對(duì)照組相比，各劑量組MEK和ERK的mRNA表達(dá)量降低，差異均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。如圖所示隨著PD98059濃度的增加，ERK mRNA的表達(dá)量逐漸降低（F=27.657，P＜0.05）。而 MEK mRNA 在 25 和100μmol/L劑量組時(shí)的表達(dá)量低于50μmol/L劑量組，出現(xiàn)高濃度低抑制的現(xiàn)象。見(jiàn)圖4。

2.5 PD98059作用后胃癌細(xì)胞關(guān)鍵蛋白水平表達(dá)

如圖5，Western blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PD98059作用SGC-7901細(xì)胞24 h后，MEK1/2在50和100μmol/L劑量組蛋白表達(dá)高于對(duì)照組（P＜0.05）；而p-MEK1/2在50、100 μmol/L劑量組表達(dá)低于對(duì)照組（P＜0.05）。各劑量組總ERK1/2表達(dá)無(wú)顯著差異（P＞0.05），而隨著抑制劑PD98059濃度的增加，各劑量組磷酸化蛋白p-ERK1/2的蛋白表達(dá)量逐漸降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖2 MEK和ERK及其磷酸化蛋白的表達(dá)

圖3 PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的抑制作用

圖4 PD98059處理后胃癌SGC-7901細(xì)胞的mRNA表達(dá)

圖5 PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響

2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。PD98059作用于胃癌細(xì)胞株SGC-7901 24 h后，與對(duì)照組（0μmol/L）相比，G0/G1期細(xì)胞比例逐漸上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；S期細(xì)胞比例隨著PD98059濃度的增加逐漸降低（P＜0.01）；且G2/M期細(xì)胞比例逐漸下降，明顯低于對(duì)照組（P＜0.01）。結(jié)果提示在 PD98059 的作用下，胃癌細(xì)胞SGC-7901在G0/G1期發(fā)生阻滯。

表2 PD98059處理24 h后胃癌SGC-7901細(xì)胞的周期變化±s，%）

表2 PD98059處理24 h后胃癌SGC-7901細(xì)胞的周期變化±s，%）

分組對(duì)照組PD98059 25μmol/L 50μmol/L 100μmol/L F值P值G0/G1 72.56±1.27 85.75±1.47 90.42±1.51 92.7±2.14 91.45＜0.01 S 10.10±0.06 8.26±1.28 6.21±1.12 4.45±2.41 8.32＜0.01 G2/M 17.33±1.21 5.99±0.42 3.36±0.40 2.85±0.32 291.37＜0.01

2.7 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡率

見(jiàn)圖6，25、50和100μmol/L PD9805925作用于實(shí)驗(yàn)組后，凋亡率分別為（11.27±0.47）%、（32.70±1.80）%、（32.87±6.54）%，當(dāng)抑制劑濃度由25 μmol/L增至50μmol/L時(shí)，實(shí)驗(yàn)組凋亡率也隨著濃度的增加而增加，呈現(xiàn)劑量依賴性（P＜0.05），但50和100μmol/L濃度組間凋亡率無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

圖6 PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響

3 討論

國(guó)內(nèi)外研究已證實(shí)MAPK/ERK信號(hào)通路的過(guò)度激活與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[10]。MAPK/ERK信號(hào)途徑又稱為Ras-Raf-MEK-ERK通路，可被炎癥因子和細(xì)菌復(fù)合物等激活（活化后呈磷酸化形式），影響細(xì)胞的增殖、分化、凋亡等多種生物學(xué)過(guò)程[11-12]。ERK是MAPK家族中一條經(jīng)典的信號(hào)途徑，分為5個(gè)亞家族：ERK1～5。ERK1和ERK2是兩種異構(gòu)體，ERK1/2轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是當(dāng)前研究最為詳細(xì)最為透徹的MAPK途徑。ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑主要由以下3種蛋白激酶組成即Raf、MEK、ERK。當(dāng)胞外刺激轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞內(nèi)或核內(nèi)后，導(dǎo)致不同細(xì)胞因子的激活，小分子鳥(niǎo)苷酸SOS與蛋白R(shí)as結(jié)合使其上的GDP解離從而結(jié)合GTP導(dǎo)致Ras激活，活化的Ras與Raf的N端結(jié)構(gòu)域結(jié)合，將Raf轉(zhuǎn)移到胞膜，在胞膜上Raf被激活，活化的Raf與MEK結(jié)合后使MEK激活，活化的MEK可使絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸發(fā)生磷酸化，最終激活ERK實(shí)現(xiàn)信號(hào)的傳導(dǎo)[13]?；罨蟮腅RK進(jìn)入核內(nèi)可使相應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子磷酸化，影響細(xì)胞周期進(jìn)展，調(diào)控相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)，從而介導(dǎo)細(xì)胞增殖和凋亡過(guò)程[14-15]。

MEK位于MAPK/ERK通路中的關(guān)鍵位置，因此有效的MEK抑制劑可能在癌癥的治療中非常有用。MEK抑制劑是最早開(kāi)發(fā)的一些小分子細(xì)胞膜可滲透抑制劑，已被確定具有高度的抑制性，可用于各種類型的癌癥以及其他疾病的臨床研究[16]。MEK抑制劑PD98059是非底物依賴性競(jìng)爭(zhēng)的蛋白激酶抑制物，對(duì)ATP無(wú)影響，具有抗腫瘤作用[17]。研究表明，在乳腺癌[18]、肝癌[19]細(xì)胞中PD98059濃度越高，對(duì)細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng)。除此之外PD98059在宮頸癌和大腸癌等方面的報(bào)道也很多。

Fujimori等[20]發(fā)現(xiàn)61%的胃癌病人中存在ERK高表達(dá)。本研究通過(guò)體外培養(yǎng)胃癌細(xì)胞SGC-7901和正常胃黏膜上皮細(xì)胞GES-1，對(duì)比兩者M(jìn)EK和ERK mRNA和蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示胃癌細(xì)胞SGC-7901中MEK和ERK mRNA表達(dá)顯著升高（P＜0.01）；MEK1/2和ERK1/2總蛋白的表達(dá)無(wú)顯著差異，但胃癌細(xì)胞SGC-7901中的p-MEK1/2和p-ERK1/2的表達(dá)顯著高于對(duì)照組GES-1細(xì)胞（P＜0.05）。表明了MAPK/ERK信號(hào)通路在胃癌中的激活狀態(tài)。Liang等[21]在胃癌組織中發(fā)現(xiàn)MAPK信號(hào)通路的激活。本研究結(jié)果與以上研究結(jié)果一致，說(shuō)明了MAPK/ERK信號(hào)通路在胃癌中呈現(xiàn)激活狀態(tài)。

利用不同濃度PD98059處理胃癌細(xì)胞SGC-7901 24 h后。CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示，當(dāng)PD98059濃度在0～200μmol/L時(shí)，與對(duì)照組相比，PD98059抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的作用隨其濃度的升高而呈下降趨勢(shì)，當(dāng)PD98059濃度到達(dá)200～400μmol/L時(shí)，抑制作用趨于平穩(wěn)。這與Corona等[22]在結(jié)直腸癌中應(yīng)用MEK抑制劑PD98059，抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖結(jié)果類似。我們進(jìn)一步采用流式細(xì)胞儀測(cè)定得出PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞具有促凋亡作用，與相關(guān)報(bào)道一致[23]。但在濃度為50～100μmol/L時(shí)，凋亡率間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），趨于平穩(wěn)。增殖結(jié)果與凋亡結(jié)果一致，先抑制后趨于平穩(wěn)，說(shuō)明抑制劑作用有上限。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)PD98059可以使細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[24]。本次細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)PD98059處理后的SGC-7901細(xì)胞在DNA合成期及合成后期細(xì)胞數(shù)減少，且產(chǎn)生G0/G1期阻滯。表明PD98059通過(guò)抑制MAPK/ERK信號(hào)通路的活化并將細(xì)胞阻滯在G0/G1期來(lái)抑制胃癌細(xì)胞的增殖。

PD98059能夠通過(guò)結(jié)合MEK1上的位點(diǎn)抑制其激活與磷酸化從而抑制ERK1/2的磷酸化[25]。qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，PD98059可降低MEK和ERK mRNA的表達(dá)水平，但在MEK mRNA表達(dá)結(jié)果中，卻出現(xiàn)高濃度低抑制現(xiàn)象，這可能與信號(hào)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制有所關(guān)聯(lián)。李楠等[26]研究發(fā)現(xiàn)MAPK/ERK信號(hào)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用可降低結(jié)直腸癌細(xì)胞對(duì)奧沙利鉑的敏感性同時(shí)可激活Bcl-2等的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖和侵襲。而當(dāng)PD98059濃度為50μmol/L時(shí)，信號(hào)通路再次激活，MEK mRNA轉(zhuǎn)錄水平升高。Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，PD98059抑制劑作用于胃癌細(xì)胞SGC-7901后，MEK1/2和p-MEK1/2在25μmol/L時(shí)蛋白表達(dá)未發(fā)生變化，說(shuō)明較低濃度PD98059未對(duì)MEK蛋白的表達(dá)起到調(diào)控作用。而50和100μmol/L時(shí)MEK1/2蛋白表達(dá)隨著PD98059濃度的增加逐漸升高，p-MEK1/2蛋白的表達(dá)逐漸降低。各劑量組總ERK1/2表達(dá)無(wú)顯著差異，而隨著PD98059濃度的增加，p-ERK1/2的蛋白表達(dá)量逐漸降低。本研究結(jié)果顯示PD98059通過(guò)下調(diào)p-MEK1/2、p-ERK1/2的表達(dá)，即抑制MEK1/2和ERK1/2的磷酸化，從而抑制MAPK/ERK信號(hào)通路的活化。

綜上所述，PD98059通過(guò)阻斷MEK和ERK基因的表達(dá)抑制了胃癌細(xì)胞SGC-7901的生長(zhǎng)和增殖。因此PD98059通過(guò)抑制MAPK/ERK信號(hào)通路活化從而發(fā)揮了有效的抗癌作用。目前通過(guò)抑制或阻斷癌癥相關(guān)信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)異常表達(dá)已經(jīng)成為臨床中癌癥治療的策略之一。研究結(jié)果有利于進(jìn)一步探討胃癌的相關(guān)發(fā)病機(jī)制，并為抑制劑PD98059作為抗癌藥物優(yōu)化治療提供了新的依據(jù)。但目前尚有一些相關(guān)的分子生物學(xué)機(jī)制有待進(jìn)一步探索與研究。