長鏈非編碼RNA Linc00152、H19、ROR在食管癌患者中的表達(dá)及臨床意義

楊 永

(鹽城市第二人民醫(yī)院，江蘇鹽城 224000)

食管癌是全球發(fā)病率較高且預(yù)后較差的腫瘤之一。我國是食管癌高發(fā)國家，部分地區(qū)的發(fā)病率高達(dá)29.81/10萬[1]。近年來隨著人們飲食習(xí)慣的改變，我國部分省市食管癌的發(fā)病率呈上升趨勢，對人類健康構(gòu)成了巨大的威脅[2]。盡管食管癌的診斷和治療已有較大進(jìn)展，但其預(yù)后仍不盡如人意，這很大程度上是由于缺少可靠易行的早期篩查手段[3]。近年研究發(fā)現(xiàn)，長鏈非編碼RNA(lncRNA)與食管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。lncRNA是一類長約200 nt的非編碼RNA，通過表觀遺傳調(diào)控參與各種生理病理過程，已被證實(shí)在胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌等消化系統(tǒng)腫瘤中具有較大診斷價(jià)值[5-7]。本研究通過比較食管癌患者與健康人群的血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平，旨在探究三者對食管癌的診斷價(jià)值，并分析三者與食管癌分化程度、TNM分期的相關(guān)性，以期為食管癌的臨床診療提供新思路。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年10月至2017年12月在本院確診為食管癌的患者185例作為病例組，包括男128例，女57例，平均年齡(54±4)歲；均為首次住院且經(jīng)內(nèi)鏡組織學(xué)檢查確診為食管癌；根據(jù)病理學(xué)資料判斷食管癌的分化程度，食管癌分期根據(jù)臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查及內(nèi)鏡下表現(xiàn)等劃分。其中上段食管癌35例，中段食管癌98例，下段食管癌52例；早期食管癌患者36例，中晚期患者149例；鱗癌163例，腺癌15例，腺鱗癌7例；高分化癌57例，中分化癌105例，低分化癌23例。對照組為同期在本院行健康體檢的健康人群200例，包括男142例，女58例，平均年齡(52±3)歲。由專業(yè)研究人員對受試者性別、年齡、吸煙史、飲酒史等基本信息進(jìn)行記錄。所有研究對象均排除其他系統(tǒng)惡性腫瘤、糖尿病、嚴(yán)重的心腦血管疾病及自身免疫性疾病。本研究的開展經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有納入對象均簽署項(xiàng)目知情同意書。

1.2方法 受試者在入院當(dāng)天由專業(yè)醫(yī)護(hù)人員使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝采血管抽取靜脈血10 mL，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)法檢測血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR及內(nèi)參基因GAPDH表達(dá)水平。引物序列如下：Linc00152上游引物5′-AGT GTG TCA TAG AGC TTC CTG TTT CAT CTC CCA GT-3′，下游引物5′-TGG AAC CAG GCC CCA GGG AAT CTT TCA GCT GCA TT-3′；H19上游引物5′-TAC AAC CAC TGC ACT ACC TG-3′，下游引物5′-TGG AAT GCT TGA AGG CTG CT-3′； ROR上游引物5′-CGA ACG AGA GGA CCG AAG-3′，下游引物5′-GCC AAG TTC TAG ATA AGC-3′；GAPDH上游引物5′-GGG AGC CAA AAG GGT CAT-3′，下游引物5′-GAG TCC TTC CAC GAT ACC AA-3′；采用2-ΔΔCt法計(jì)算lncRNA Linc00152、H19、ROR的相對表達(dá)量，ΔCt值=樣本Ct值-GAPDH Ct值。

2 結(jié) 果

2.1兩組基本資料及血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平比較 兩組在性別組成、年齡、吸煙史、飲酒史等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 與對照組比較，病例組血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組基本資料及血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平比較

2.2血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平與食管癌患者臨床特征的關(guān)系 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平與食管癌患者的年齡、性別、吸煙史、飲酒史、腫瘤部位等因素均無顯著相關(guān)性(P>0.05)，而與食管癌的分期、分化程度及組織學(xué)類型顯著相關(guān)(P<0.05)。血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR表達(dá)水平在中晚期食管癌、食管腺鱗癌與低分化食管癌患者中的升高最為顯著。見表2。

表2 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平與食管癌患者臨床特征的關(guān)系

2.3ROC曲線分析 ROC曲線分析顯示，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR在區(qū)分食管癌與對照組的AUC分別為：0.892(95%CI：0.767～0.931，P<0.001)、0.943(95%CI：0.870～0.982，P<0.001)、0.911(95%CI：0.899～0.955，P<0.001)，靈敏度/特異度分別為76.2%/98.9%、85.2%/93.4%、79.1%/87.4%,見圖1A。當(dāng)血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR聯(lián)合檢測時(shí)，區(qū)分食管癌與對照組的AUC為0.977(95%CI：0.902～0.998，P<0.001)，靈敏度為90.6%，特異度為83.3%，見圖1B。

2.4風(fēng)險(xiǎn)評估 多元logistic回歸分析結(jié)果中，單因素分析顯示，血漿高lncRNA H19、ROR水平是食管癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素(P<0.05)；多因素分析顯示，在校正年齡、性別、腫瘤部位、吸煙史、飲酒史等因素影響后，血漿高lncRNA H19、ROR水平仍是食管癌發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表3 血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的預(yù)測價(jià)值

注：A為lncRNA Linc00152、H19、ROR單項(xiàng)診斷食管癌的ROC曲線；B為lncRNA Linc00152、H19、ROR聯(lián)合檢測診斷食管癌ROC曲線

圖1 ROC曲線分析

3 討 論

食管癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，對人類健康構(gòu)成了巨大的威脅[8]。雖然近年來食管癌的治療技術(shù)有所提高，但其5年生存率仍維持在較低水平[9]。早期食管癌癥狀不典型甚至無癥狀，患者不易察覺，當(dāng)出現(xiàn)進(jìn)行性吞咽困難等典型癥狀時(shí)，病情多已進(jìn)展到中晚期[10-11]。目前，食管癌的主要篩查手段是食管脫落細(xì)胞學(xué)檢查(食管拉網(wǎng))，但由于其技術(shù)含量相對較高，且靈敏度和特異度均較低，無法在人群中推廣使用[12]。因而，篩選出更多可靠的生物學(xué)標(biāo)志物已成為當(dāng)下食管癌的研究熱點(diǎn)，對食管癌的早期干預(yù)具有重要意義。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，多種lncRNA在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演著重要角色，且在腫瘤發(fā)生早期其表達(dá)量即發(fā)生改變，這些lncRNA包括Linc00152、H19、ROR、XLOC005009、MEG3、HOTAIR等。周建平[13]的研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA Linc00152可能通過表皮生長因子受體依耐性信號通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長以及侵襲-轉(zhuǎn)移級聯(lián)反應(yīng)，且在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常組織。譚德立[14]的研究表明，lncRNA H19可通過介導(dǎo)上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，從而促進(jìn)食管癌侵襲和轉(zhuǎn)移，提示lncRNA H19的高表達(dá)與腫瘤的不良預(yù)后相關(guān)。EADES等[15]的研究結(jié)果顯示，lncRNA ROR在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著升高，且可通過抑制ADP核糖基化因子6促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。以上研究結(jié)果表明，lncRNA可通過多種途徑參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，具有成為早期腫瘤診斷標(biāo)志物的潛力。

關(guān)于lncRNA與食管癌的關(guān)系國內(nèi)外已有多項(xiàng)研究報(bào)道。CHEN等[16]發(fā)現(xiàn)，lncRNA SBF2-AS1在食管鱗狀癌細(xì)胞中的表達(dá)顯著上調(diào)，且在SBF2-AS1被沉默抑制后食管鱗狀癌細(xì)胞的增殖和侵襲能力明顯降低，而SBF2-AS1因此被認(rèn)為是一種新的食管鱗狀癌生物標(biāo)志物，有望成為食管鱗癌的潛在治療靶點(diǎn)。HUANG等[17]通過對28例食管鱗狀癌患者癌和癌旁組織中l(wèi)ncRNA MEG3表達(dá)水平的檢測發(fā)現(xiàn)，MEG3基因的表達(dá)在癌組織中顯著降低，進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)MEG3能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。上述研究提示，lncRNA的差異表達(dá)參與了食管癌的發(fā)生發(fā)展過程。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的診斷具有重要價(jià)值，且血漿高lncRNA H19、lncRNA ROR水平是食管癌發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，該部分結(jié)果與前期研究基本相符[13-15]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR水平在中晚期食管癌、食管腺鱗癌與低分化食管癌患者中的升高較為顯著，提示三者與食管癌的不良預(yù)后密切相關(guān)。

4 結(jié) 論

本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血漿lncRNA Linc00152、H19、ROR對食管癌的潛在診斷價(jià)值，并證實(shí)血漿lncRNA H19、ROR對食管癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的評估具有重要意義，這些發(fā)現(xiàn)有望為食管癌的早期診斷提供新的途徑。