血漿MMP-9、HBP及IL-27聯(lián)合檢測在膿毒癥早期診斷中的應(yīng)用價值

黎彧利，王伊林，姚 欣△

(1.重慶巴南區(qū)人民醫(yī)院檢驗科，重慶 401320；2.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗科，廣東廣州 510260)

雖然目前對膿毒癥的發(fā)病機(jī)制及治療方法進(jìn)行了較深入研究及探索，但其仍是急診或重癥監(jiān)護(hù)病房患者的主要死亡原因之一[1-2]。據(jù)調(diào)查，至今全球每年患膿毒癥患者達(dá)2 000千萬～3 000千萬，死亡率高達(dá)25%。已有研究發(fā)現(xiàn)，早期診斷膿毒癥不僅可降低患者的醫(yī)療成本，而且對改善預(yù)后起著至關(guān)重要的作用[3]。

基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)底物為彈性蛋白、粘連蛋白等物質(zhì)，由中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)所有的成分[4]。黃增相等[5]研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者血漿中MMP-9水平明顯升高，且經(jīng)治療好轉(zhuǎn)后，血漿中MMP-9水平隨之降低，說明血漿MMP-9與膿毒癥的發(fā)展關(guān)系密切。肝素結(jié)合蛋白(HBP)由中性粒細(xì)胞分泌，國內(nèi)學(xué)者通過對多種膿毒癥感染相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)HBP在診斷膿毒癥的靈敏度和特異度均高于降鈣素原(PCT)及超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)[6]。李凡旺等[7]證實，白細(xì)胞介素27(IL-27)可作為區(qū)分膿毒癥與非細(xì)菌性全身炎癥反應(yīng)綜合征的血漿標(biāo)記物，并且對革蘭陰性菌(G-菌)的診斷價值更高。本研究通過檢測不同程度膿毒癥患者血漿中MMP-9、HBP及IL-27的表達(dá)水平，探討三者聯(lián)合檢驗對膿毒癥早期診斷的臨床價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年2月至2017年10月重慶巴南區(qū)人民醫(yī)院收治的膿毒癥患者55例，年齡(39.64±8.77)歲，其中男32例，女23例。按病情程度分為膿毒癥組(24例)，年齡(38.24±7.93)歲，男14例，女10例；嚴(yán)重膿毒癥組(17例)，年齡(39.84±9.61)歲，其中男10例，女7例；膿毒性休克組(14例)，年齡(40.28±10.21)歲，男8例，女6例。另選取局部感染非膿毒癥患者21例為對照組，年齡(39.57±7.62)歲，男13例，女8例。各組年齡、性別等一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡18～80歲；(2)符合2012年《嚴(yán)重膿毒癥與膿毒性休克國際治療指南》臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)患者[8]；(3)簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡<18歲或>80歲；(2)淋巴、血液系統(tǒng)疾病患者；(3)嚴(yán)重冠心病、糖尿病患者；免疫系統(tǒng)疾病患者；(4)各類腫瘤疾病患者；(5)精神障礙疾病患者；(6)產(chǎn)婦或孕婦。膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)發(fā)熱>38.3 ℃，心率>90 次/分，呼吸增快30次/分，明顯水腫持續(xù)24 h，高血糖癥而無糖尿病史；(2)白細(xì)胞增多或白細(xì)胞正常但不成熟細(xì)胞>10%，血漿C反應(yīng)蛋白>正常值2個標(biāo)準(zhǔn)差，PCT>正常值2個標(biāo)準(zhǔn)差，有明確感染病史，但未合并其他臟器衰竭。嚴(yán)重膿毒癥診斷標(biāo)準(zhǔn)：(1)膿毒癥所致低血壓；(2)乳酸水平超過實驗室檢測正常水平上限；(3)給予足夠體液復(fù)蘇，尿量仍<0.5 mL/(kg·h)；(4)非肺炎所致的急性肺損傷且氧合指數(shù)<250 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)；(5)肺炎所致急性肺損傷且氧合指數(shù)<200 mm Hg；(6)血肌酐水平>176.8 μmol/L(2.0 mg/dL)；(7)膽紅素>34.2 μmol/L(2.0 mg/dL)；(8)血小板計數(shù)<100×109/L；(9)凝血障礙(國際標(biāo)準(zhǔn)化比值>1.5)。膿毒癥休克診斷標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)膿毒癥所致低血壓，經(jīng)治療后仍無法逆轉(zhuǎn)。本研究通過重慶巴南區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會審議。

1.2病史采集 記錄入組患者的一般資料，詢問病史，記錄患者入院時血漿MMP-9、HBP、IL-27、hs-CRP、PCT、外周血白細(xì)胞計數(shù)等，由2位主治醫(yī)師評價入組患者急性生理學(xué)與慢性健康狀況評分系統(tǒng)Ⅱ(APACHE-Ⅱ)評分。

1.3外周血漿MMP-9、HBP、IL-27水平檢測 所有入組患者入院后立即抽取靜脈血5 mL，置于抗凝管中，以3 000 r/min，低溫離心10 min分離血漿，取上清液，凍存于-80 ℃冰箱。血清PCT、hs-CRP采用北京松上A750生化分析儀進(jìn)行檢測；血漿MMP-9、HBP、IL-27檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測，試劑盒購自南京建成生物科技有限公司(批號分別為140103.96t、140122.96t、140325.96t)。

2 結(jié) 果

2.1各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27、PCT及APACHE-Ⅱ評分 與對照組相比，膿毒癥組、嚴(yán)重膿毒癥組、膿毒性休克組患者血清MMP-9、HBP、IL-27、PCT水平及APACHE-Ⅱ評分均明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且病情程度越嚴(yán)重，上述指標(biāo)表達(dá)水平越高，見表1。

表1 入組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27、PCT及APACHE-Ⅱ評分比較±s)

2.2各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ評分的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，各組患者血漿中MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ呈正相關(guān)(P<0.05)，見表2。

表2 各組患者血漿MMP-9、HBP、IL-27與PCT、APACHE-Ⅱ評分相關(guān)性分析結(jié)果

2.3膿毒癥發(fā)生的危險因素分析 多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，PCT、hs-CRP、MMP-9、HBP及IL-27均為膿毒癥發(fā)生的危險因素(P<0.05)，見表3。

表3 多因素logistic回歸分析膿毒癥發(fā)生危險因素

表4 MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥診斷的ROC曲線分析

2.4MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥的診斷性能分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示，MMP-9、HBP、IL-27聯(lián)合檢測的曲線下面積(AUC)、靈敏度、特異度均優(yōu)于單一檢測MMP-9、HBP、IL-27，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖1、表4。

注：a為聯(lián)合檢測；b為MMP-9；c為HBP；d為IL-27

圖1 MMP-9、HBP及IL-27對膿毒癥診斷的ROC曲線

3 討 論

國外學(xué)者SINGER等[9]提出膿毒癥最新定義，即針對感染宿主反應(yīng)失調(diào)引起的致命性器官功能障礙。膿毒癥患者一旦引起多器官功能衰竭，其28 d病死率高達(dá)32%[10]。目前研究發(fā)現(xiàn)，膿毒癥早期即可出現(xiàn)血管內(nèi)皮炎性反應(yīng)，引起組織缺血、缺氧、乳酸中毒等不良反應(yīng)[11]。因此，檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性反應(yīng)早期釋放相關(guān)因子的表達(dá)，可能對膿毒癥進(jìn)行早期診斷，從而及時治療，節(jié)約醫(yī)療成本，抑制病情發(fā)展，降低病死率。本研究通過檢測MMP-9、HBP及IL-27在膿毒癥患者血清中的水平，并評估MMP-9、HBP、IL-27聯(lián)合檢測對膿毒癥早期診斷的應(yīng)用價值。

MMP-9在遺傳過程中高度保守，屬于鋅離子依賴型水解酶，在正常情況下，人體內(nèi)MMP-9表達(dá)相當(dāng)少，當(dāng)機(jī)體遭遇嚴(yán)重感染時，炎癥細(xì)胞大量的炎癥介質(zhì)，激活MMP-9的表達(dá)，并釋放入血[12]。楊曉軍等[13]通過對104例膿毒癥及全身炎癥反應(yīng)綜合征患者血清中MMP-9進(jìn)行檢測，證實早期MMP-9水平對膿毒癥的發(fā)生、識別、病情判斷具有一定參考價值。HBP是一種新型的感染相關(guān)標(biāo)記物，當(dāng)炎性反應(yīng)發(fā)生時，激活的中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，使HBP以旁分泌形式入血[14]。錢定良等[15]研究發(fā)現(xiàn)，HBP在膿毒癥的診斷中具有較高的臨床參考價值，其靈敏度甚至優(yōu)于PCT，但特異度較PCT略低。IL-27屬于IL-12家族，由p28和EBI3組成[16]，并且已經(jīng)證實與腸炎、鼻炎、肺結(jié)核等感染性疾病有關(guān)[17-19]。本研究結(jié)果顯示，與局部炎癥患者比較，不同感染程度的膿毒癥患者血漿中MMP-9、HBP及IL-27水平均升高，說明在膿毒癥未合并其他組織器官并發(fā)癥時，以上3種指標(biāo)即出現(xiàn)明顯變化。PCT是目前臨床診斷膿毒癥的重要參考指標(biāo)，APACHE-Ⅱ評分則是臨床評價膿毒癥患者病情嚴(yán)重程度的重要依據(jù)[20]。本研究通過Pearson相關(guān)性分析證實，血漿MMP-9、HBP及IL-27的表達(dá)與膿毒癥患者PCT表達(dá)、APACHE-Ⅱ評分均呈中度正相關(guān)，說明3種檢測指標(biāo)的表達(dá)與感染程度及臨床癥狀具有相關(guān)性。

由于膿毒癥的病因多樣而復(fù)雜，臨床上尚未發(fā)現(xiàn)一種理想的外周血指標(biāo)能夠完全準(zhǔn)確的診斷、評估膿毒癥的發(fā)生，但檢測多個指標(biāo)并通過統(tǒng)計學(xué)整合，可明顯提高其評估效應(yīng)。本研究采用多因素logistic回歸分析證實，MMP-9、HBP及IL-27均為膿毒癥發(fā)生的危險因素；ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，MMP-9、HBP、IL-27聯(lián)合檢測診斷膿毒癥的AUC、靈敏度、特異度均優(yōu)于MMP-9、HBP及IL-27單獨檢測。

4 結(jié) 論

MMP-9、HBP、IL-27三者聯(lián)合檢測優(yōu)于MMP-9、HBP及IL-27單獨檢測，在早期診斷膿毒癥方面具有較高的臨床參考價值，有可能成為早期診斷膿毒癥理想的外周血標(biāo)記物。本研究也存在一些不足，如樣本量較少，且并沒有對膿毒癥患者病因進(jìn)行分析，筆者將在下一步的研究中補(bǔ)充完善。