羊口瘡病毒安徽株023基因的原核表達(dá)與生物信息學(xué)分析

張高峰，楊侃侃，張 謙，王元紅，俞趙榮，張學(xué)琪，魯智敏，劉自敏，李永東，王 勇，*

(1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036； 2.寧波市疾病預(yù)防控制中心，浙江 寧波 315010)

羊口瘡(orf)是由羊口瘡病毒(orf virus，ORFV)引起的急性接觸性人獸共患傳染病，主要感染綿羊、山羊和駱駝等。屠夫、飼養(yǎng)員和獸醫(yī)等人群也有感染發(fā)病的報(bào)道[1-4]。該病臨床表現(xiàn)以口唇、舌、乳房等部位形成丘疹、膿皰以及厚痂為主要特征[5]。各個(gè)年齡階段的綿羊和山羊都可被感染，羔羊發(fā)病率較成年羊高。由于病變部位大多出現(xiàn)在口唇周圍，嚴(yán)重影響了羔羊的吸吮和采食[6]。該病最早于1920年首次在歐洲出現(xiàn)，目前世界上所有養(yǎng)羊的地區(qū)均有該病的發(fā)生，我國也不例外，因此對畜牧業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[7-8]。

ORFV屬于痘病毒科、副痘病毒屬的成員，為線性雙鏈DNA病毒，基因組大小約138 kb，G+C含量約64%，編碼132個(gè)基因。基因組的中央?yún)^(qū)域?yàn)楦叨缺Ｊ氐幕?，在病毒?fù)制時(shí)起重要作用，而末端區(qū)域的基因則在病毒毒力及致病機(jī)制中起關(guān)鍵作用[9-10]。目前為止，ORFV基因組大多數(shù)基因的功能還未研究，其中包括位于基因組保守區(qū)域的023基因，僅有研究人員預(yù)測該基因編碼的蛋白可能為囊膜蛋白[11]。本試驗(yàn)擬克隆表達(dá)ORFV安徽株023基因，表達(dá)023蛋白并制備鼠源多抗血清，并預(yù)測該蛋白的基本特性，以期為進(jìn)一步研究ORFV 023基因的生物學(xué)功能提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

ORFV AH-F10株[12]、pET-32a(+)菌種由本實(shí)驗(yàn)室保存。BALB/c小鼠購自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。pMDTM18-T載體購自TaKaRa公司。

1.2 主要試劑

病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒、瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒；SolutionⅠ；DH5α和Rosseta感受態(tài)細(xì)胞；2×LA rTaq酶、限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和EcoRⅠ；質(zhì)粒提取試劑盒；PBS緩沖液；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒；DAB試劑盒；ECL試劑盒；抗His標(biāo)簽的鼠源一抗、HRP標(biāo)簽的羊抗鼠IgG購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；弗氏佐劑購自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 引物設(shè)計(jì)與基因擴(kuò)增

按病毒基因組提取試劑盒說明書提取ORFV AH-F10株DNA。根據(jù)GenBank中發(fā)表的ORFV GO株基因序列，設(shè)計(jì)023基因特異性引物，上游引物：5′-CGGGATCCATGGTGGACAGCGGCACG-3′(下劃線處為BamHⅠ酶切位點(diǎn))；下游引物：5′-GGAATTCCTACAGCAGCACCACGTTCTC-3′(下劃線處為EcoRⅠ酶切位點(diǎn))。

PCR反應(yīng)體系(20 μL)：2×LArTaq10 μL、ddH2O 7 μL、DNA模板1 μL，上下游引物各1 μL。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，共30個(gè)循環(huán)；72 ℃再延伸10 min。PCR產(chǎn)物回收后克隆至pMDTM18-T載體，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，涂布至氨芐抗性的固體培養(yǎng)基，隔天挑取陽性克隆提取質(zhì)粒，命名為pMDTM18-T-023，送至上海邁浦生物科技有限公司測序。

1.3.2 重組質(zhì)粒pET-32a(+)-023構(gòu)建

將pMDTM18-T-023與pET-32a(+)空載體質(zhì)粒經(jīng)內(nèi)切酶BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切后電泳，產(chǎn)物回收后連接pET-32a(+)載體，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，涂布至氨芐抗性的固體培養(yǎng)基，隔天挑取陽性菌落提質(zhì)粒，命名為pET-32a(+)-023，雙酶切鑒定后送到上海邁浦生物科技有限公司測序。

1.3.3 重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)

將pET-32a(+)-023與pET-32a(+)空載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化Rosetta感受態(tài)細(xì)胞，接種至氨芐抗性的固體培養(yǎng)基，分別挑取單菌落至LB液體培養(yǎng)基。當(dāng)D600值在0.6～0.8時(shí)，加入1 mmoL·L-1的IPTG于37 ℃、180 r·min-1誘導(dǎo)表達(dá)，取5 h樣品SDS-PAGE電泳，考馬斯亮藍(lán)染色。對誘導(dǎo)成功的重組菌進(jìn)行大量誘導(dǎo)，4 ℃離心收集樣品于冰浴下超聲裂解，分別收集上清和沉淀分析重組蛋白的可溶性。

1.3.4 重組蛋白的純化

將收集的蛋白用PBS緩沖液重懸，隨后4 500 r·min-1離心10 min，收集沉淀并用Tris緩沖液洗滌，4 ℃ 8 000 r· min-1離心10 min，棄上清。沉淀依次用含2、4、5和6 mol·L-1尿素的Tris緩沖液吹打洗滌，4 ℃ 8 000 r·min-1離心10 min，收集沉淀用含8 mol·L-1尿素的Tris緩沖液重懸，4 ℃靜置過夜。12 000 r·min-1離心10 min收集上清至透析袋中，用含6、5、4、2和0 mol·L-1尿素的Tris緩沖液進(jìn)行復(fù)性。蛋白復(fù)性后用蔗糖濃縮。

1.3.5 Western-blot檢測

將純化后的蛋白SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維素膜上，5%脫脂奶粉4 ℃封閉過夜，TBST洗滌3次；加入1∶200稀釋的鼠源抗ORFV多抗血清作為一抗，37 ℃孵育1 h后TBST漂洗3次。再加入1∶1 000稀釋的HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG二抗，37 ℃孵育1 h后TBST漂洗3次。利用ECL發(fā)光試劑盒顯色。

1.3.6 鼠源多抗血清的制備

純化的蛋白50 μg·只-1免疫BALB/c雌性小鼠，過程如下：首次免疫時(shí)將蛋白與等體積完全佐劑混勻乳化后皮下注射；14 d后二免，二免時(shí)將蛋白與等體積不完全佐劑混勻乳化后皮下注射；二免后14 d和28 d進(jìn)行三免和四免，方法同第二次。四免7 d后眼眶采血分離血清。

1.3.7 ORFV 023蛋白的生物信息學(xué)分析

利用ProtparamSOPMA在線程序分析該毒株023蛋白的理化性質(zhì)；利用SOPMA在線程序分析該毒株023蛋白的二級結(jié)構(gòu)；利用SingalP4.1在線程序預(yù)測該蛋白的信號(hào)肽；利用TMHMM2.0 Server在線程序預(yù)測該蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域；利用NetPhos3.1 Server在線程序預(yù)測該蛋白的磷酸化位點(diǎn)；利用DNAStar的Protean程序預(yù)測023蛋白的B細(xì)胞表位；利用nHLAPred的ComPred在線服務(wù)器預(yù)測023蛋白的CTL表位；利用ProPred在線服務(wù)器預(yù)測023蛋白的Th表位。

2 結(jié)果與分析

2.1 023基因的擴(kuò)增

經(jīng)特異性引物擴(kuò)增的023基因長約819 bp(圖1)，與預(yù)期結(jié)果相符，測序分析表明并未發(fā)生堿基突變或缺失。

2.2 重組質(zhì)粒pET-32a(+)-023的雙酶切鑒定

將pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒經(jīng)內(nèi)切酶BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳，得到符合預(yù)期的條帶(圖2)，測序表明成功構(gòu)建重組質(zhì)粒，堿基并未發(fā)生突變或缺失。

2.3 重組蛋白的SDS-PAGE分析

將pET-32a(+)-023質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Rosetta細(xì)胞內(nèi)，成功表達(dá)約為42 ku的蛋白，與預(yù)期相符，SDS-PAGE結(jié)果顯示蛋白主要以包涵體存在于沉淀中(圖3)。

2.3 Western-blot鑒定

利用Western-blot對蛋白進(jìn)行進(jìn)一步分析，結(jié)果顯示在硝酸纖維素膜上約42 ku處有一明顯條帶(圖4)，表明重組蛋白能成功被抗His標(biāo)簽的一抗識(shí)別，具有良好的反應(yīng)原性。

M，DNA marker；1，陰性對照；2，023基因PCR產(chǎn)物。M， DNA marker; 1， Negative control; 2， 023 gene PCR product.圖1 023基因擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.1 PCR product of 023 gene

M，DNA marker；1，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒雙酶切產(chǎn)物；2，pET-32a(+)空載體陰性對照。M， DNA marker; 1， pET-32a(+)-023 recombinant plasmid double digested product; 2， pET-32a(+)empty vector negative control.圖2 重組質(zhì)粒pET-32a(+)-023雙酶切鑒定Fig.2 Identification of recombinant plasmid pET-32a(+)-023 by double enzyme digested

M，蛋白Marker；1，pET-32a(+)空載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)；2，pET-32a(+)空載體未經(jīng)IPTG誘導(dǎo)；3，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒未經(jīng)IPTG誘導(dǎo)；4，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒經(jīng)IPTG誘導(dǎo)；5，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)上清；6，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒誘導(dǎo)表達(dá)沉淀。M， Protein marker; 1， pET-32a(+)empty vector was induced by IPTG; 2， pET-32a(+) empty vector was not induced by IPTG; 3， pET-32a(+)-023 recombinant plasmid was not induced by IPTG; 4， pET-32a(+)-023 recombinant plasmid was induced by IPTG; 5， pET-32a(+)-023 induced expression supernatant; 6， pET-32a(+)-023 induced expression precipitate.圖3 pET-32a(+)-023蛋白產(chǎn)物SDS-PAGE電泳Fig.3 SDS-PAGE electrophoresis of the protein product of pET-32a(+)-023

2.4 鼠源多抗Western-blot鑒定

純化蛋白以鼠源抗ORFV陽性血清為一抗，HRP標(biāo)簽的羊抗鼠IgG為二抗進(jìn)行Western-blot鑒定，結(jié)果顯示重組蛋白能夠被抗ORFV陽性血清特異性識(shí)別(圖5)。

2.5 理化性質(zhì)分析

利用Protparam在線程序分析該毒株023蛋白的理化性質(zhì)，結(jié)果顯示，該蛋白由272個(gè)氨基酸組成，分子式為C1437H2157N357O399S7，相對分子質(zhì)量為31 042.51 ku，理論pI(等電點(diǎn))值為6.97，不穩(wěn)定系數(shù)為37.08，平均親水值(GRAVY)為-0.132，為親水性穩(wěn)定蛋白，帶負(fù)電荷的氨基酸(Asp+Glu)和帶正電荷的氨基酸(Arg+Lys)各26個(gè)，脂肪族系數(shù)為81.40。

M，蛋白marker；1，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；2，pET-32a(+)空載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。M， Protein marker; 1， pET-32a(+)-023 recombinant vector induced by IPTG; 2， pET-32a(+)empty vector induced by IPTG.圖5 多克隆抗體的鑒定Fig.5 Identification of polyclonal antibody

1，pET-32a(+)空載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；2，pET-32a(+)-023重組質(zhì)粒經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。
1， pET-32a(+)empty vector induced by IPTG; 2， The recombinant plasmid pET-32a(+)-023 induced by IPTG.
圖4 Western-blot鑒定023蛋白的體外表達(dá)
Fig.4 Western-blot identification of 023 proteininvitro

2.6 二級結(jié)構(gòu)分析

利用SOPMA在線程序預(yù)測023蛋白的二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示，該蛋白二級結(jié)構(gòu)包括α-螺旋(h，27.57%)，延伸鏈(e，17.28%)，β-轉(zhuǎn)角(t，12.13%)，無規(guī)則卷曲(c，43.01%)4種類型(圖6)。

2.7 信號(hào)肽、跨膜結(jié)構(gòu)域及磷酸化位點(diǎn)的預(yù)測分析

分別利用SingalP4.1和TMHMM2.0 Server在線程序預(yù)測該蛋白的信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域，結(jié)果顯示，023蛋白無信號(hào)肽區(qū)域和跨膜結(jié)構(gòu)域(圖7、圖8)；利用NetPhos3.1 Server在線程序預(yù)測023蛋白的磷酸化位點(diǎn)，結(jié)果顯示，該蛋白共有30個(gè)磷酸化位點(diǎn)，其中絲氨酸位點(diǎn)13個(gè)，蘇氨酸位點(diǎn)11個(gè)，酪氨酸位點(diǎn)6個(gè)(圖9)。

2.8 B細(xì)胞抗原表位的預(yù)測分析

利用DNAStar的Protean程序預(yù)測023蛋白的B細(xì)胞抗原表位，結(jié)果顯示，該蛋白親水性位點(diǎn)主要位于第1～2、26～28、47～50、65～71、73～87、115～118、126～144、152～160、218～226、233～251、253～256、258～262、265～273處，含有柔韌性的區(qū)域主要位于第5～29、47～49、53～58、84～87、93～99、102～110、121～124、144～152、161～165、174～182、185～217、230～233、246～254、266～26處，抗原性和表面可及性程度較高。結(jié)合該蛋白的二級結(jié)構(gòu)、親水性、柔韌性、抗原性和表面可及性進(jìn)行綜合分析，該蛋白第26～28、84～87、144～146、246～254等處可能存在優(yōu)勢抗原表位(圖10、表1)。

圖6 羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的二級結(jié)構(gòu)Fig.6 Secondary structure of ORFV AH-F10 strain 023 protein

圖7 羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的信號(hào)肽預(yù)測Fig.7 Signal peptide prediction of ORFV AH-F10 strain 023 protein

圖8 羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測Fig.8 Transmembrane domain prediction of ORFV AH-F10 strain 023 protein

2.9 T細(xì)胞表位的預(yù)測分析

圖9 羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的磷酸化位點(diǎn)預(yù)測Fig.9 Phosphorylation site prediction of ORFV AH-F10 strain 023 protein

圖10 羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的B細(xì)胞表位預(yù)測Fig.10 Prediction of B cell epitopes of ORFV AH-F10 strain 023 protein

表1綜合分析ORFV 023蛋白B細(xì)胞抗原表位的位置

Table1Analysis of the location of the ORFV 023 protein B cell epitopes in combination with different data

方法Method位置Position二級結(jié)構(gòu)Secondary structure 7～8、15～20、26～30、40～44、83～87、102～110、132～133、142～146、175～178、187～190、195～196、202～207、212～214、230～231、243～246、253親水性Hydrophilicity1～2、26～28、47～50、65～71、73～87、115～118、126～144、152～160、218～226、233～251、253～256、258～262、265～273柔韌性Flexibility5～29、47～49、53～58、84～87、93～99、102～110、121～124、144～152、161～165、174～182、185～217、230～233、246～254、266～26抗原性Antigenicity1～23、26～31、40～44、51～61、73～76、83～97、100～110、119～125、144～152、161～168、171～197、202～232、246～247、250～253表面可及性Surface probability1～272綜合分析Parameter analysis26～28、84～87、144～146、246～254

2.9.1 CTL表位預(yù)測

利用nHLAPred的ComPred在線服務(wù)器，將閾值調(diào)節(jié)為0.5，分別預(yù)測HLA-A2、HLA-A*0201、HLA-A*0202、HLA-A*0203和HLA-A*0205五種不同分子的結(jié)合肽(表2)，結(jié)果顯示，第154～162位的SLLGAVYTT、230～234位的RYDPV和237～242位的FLVFYV可能存在023蛋白的CTL表位。

2.9.2 Th表位預(yù)測分析

利用ProPred在線服務(wù)器分別預(yù)測DRB1-0101、DRB1-0102、DRB1-0301的Th表位(表3)，結(jié)果顯示，第74～76位的FEF、128～135位的LLLSSVPI、237～244位的LVFYVPGI可能存在023蛋白的Th表位。

表2羊口瘡病毒AH-F10株023蛋白的CTL細(xì)胞表位預(yù)測

Table2Prediction of CTL cell epitopes of ORFV AH-F10 strain 023 protein

等位片段Allele順序Rank起始位置Start position序列SequenceHLA-A2127GLSPLMRHT273KKFEFMFSL3154SLLGAVYTT4226LYYTRYDPVHLA-A*0201134HTYIYNNYA248ETALWSSRL361VTDFYPISL4128FLLLSSVPIHLA-A*02021218TLANLSTIL2234VLCFLVFYV3237FLVFYVPGL4261KLSLAPENVHLA-A*0203148ETALWSSRL261VTDFYPISL3128FLLLSSVPI4231YDPVLCFLVHLA-A*02051178DYKPLFSRL2237FLVFYVPGL343YGWIPETAL4226LYYTRYDPV

3 討論

ORFV廣泛分布于全球養(yǎng)羊地區(qū)，且發(fā)生頻率在世界范圍內(nèi)逐年上升。近年來，在我國黑龍江、河南、福建等地均有ORFV引發(fā)疾病的報(bào)道[13-15]。ORFV基因組較大，大多數(shù)基因的功能還未闡明。Friebe等[11]預(yù)測了ORFV 023基因可能編碼囊膜蛋白，但未對該基因的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行更深一步的研究。鑒于此，為了探索023基因的結(jié)構(gòu)與功能，本試驗(yàn)首先通過原核表達(dá)獲取023蛋白，同時(shí)結(jié)合生物信息學(xué)方法分析該蛋白分子特性。研究中所采用的生物信息學(xué)方法參照了王光祥等[16]的研究，同時(shí)制備了ORFV 023蛋白和鼠源多克隆抗體等珍貴的生物材料，為下一步深入研究該蛋白的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。

本研究采用PCR技術(shù)克隆ORFV 023基因，在大腸埃希菌中誘導(dǎo)表達(dá)融合蛋白。分析該蛋白的理化性質(zhì)和疏水性發(fā)現(xiàn)該蛋白為親水穩(wěn)定蛋白，但SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn)融合蛋白既有少量存在于上清中，同時(shí)又主要以包涵體的形式存在于沉淀內(nèi)，包涵體的形成不僅與外界因素有關(guān)，同時(shí)與蛋白內(nèi)部是否存在信號(hào)肽等結(jié)構(gòu)也有較大關(guān)系，有文獻(xiàn)報(bào)道信號(hào)肽結(jié)構(gòu)有利于提高蛋白質(zhì)的可溶性[17]，無信號(hào)肽結(jié)構(gòu)的蛋白可能因可溶性較低而更易形成包涵體，生物信息學(xué)分析顯示ORFV 023蛋白無信號(hào)肽結(jié)構(gòu)，從側(cè)面證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)測結(jié)果相符。Western-blot結(jié)果顯示，該蛋白能與鼠源抗ORFV血清發(fā)生特異性免疫反應(yīng)，表明ORFV 023蛋白具有良好的特異性和抗原性。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，ORFV 023蛋白大小約42 ku，與SDS-PAGE結(jié)果相符，不存在跨膜結(jié)構(gòu)域，有30個(gè)磷酸化位點(diǎn)，二級結(jié)構(gòu)內(nèi)無規(guī)則卷曲及α-螺旋結(jié)構(gòu)較多，β-折疊較少。β-折疊和無規(guī)則卷曲區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)比較松散，穩(wěn)定性差，更易于盤旋和扭曲，容易與抗體分子結(jié)合，因此該區(qū)域可能存在優(yōu)勢抗原表位。結(jié)合二級結(jié)構(gòu)、親水性、柔韌性、抗原性、表面可及性等參數(shù)預(yù)測該蛋白B細(xì)胞抗原表位，有效避免了因參數(shù)過少而導(dǎo)致結(jié)果誤差較大，結(jié)果顯示在第26～28、84～87、144～146、246～254位可能存在優(yōu)勢抗原表位。CTL表位是能與MHC-Ⅰ類分子結(jié)合從而誘導(dǎo)相應(yīng)的CTL發(fā)生免疫應(yīng)答的一類由8～10個(gè)連續(xù)氨基酸構(gòu)成的短肽，其本質(zhì)是抗原呈遞細(xì)胞處理遞呈的一種蛋白，能夠活化并決定CTL的特異性殺傷能力[18]。利用nHLAPred的ComPred在線服務(wù)器預(yù)測CTL表位，結(jié)果顯示在第154～162、230～234、237～242位可能存在CTL優(yōu)勢表位。Th細(xì)胞表位是識(shí)別加工后的外源蛋白與MHC-Ⅱ類分子結(jié)合的一類抗原表位，能夠幫助激活Th細(xì)胞并刺激其釋放細(xì)胞因子參與細(xì)胞免疫，同時(shí)幫助B細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體[16]。利用ProPred在線服務(wù)器分別預(yù)測DRB1-0101、DRB1-0102、DRB1-0301三種不同的Th表位，結(jié)果顯示在第74～76、128～135、237～244位可能存在Th優(yōu)勢表位。

表3羊口瘡病毒AH-F 10株023蛋白的Th細(xì)胞表位預(yù)測

Table3Th cell epitope prediction of ORFV AH-F10 strain 023 protein

DRB1-0101順序Rank起始位置Start position序列SequenceDRB1-0102順序Rank起始位置Start position序列SequenceDRB1-0103順序Rank起始位置Start position序列Sequence144WIPETALWS136IYNNYAYGW140YAYGWIPET258YRVTDFYPI268LGMLKKFEF268LGMLKKFEF374FEFMFSLLA374FEFMFSLLA376FMFSLLADP4127FLLLSSVPI4127FLLLSSVPI480LLADPGGAC5136FNILFWFKG5136FNILFWFKG5127FLLLSSVPI6178YKPLFSRLG6207IGRLPPSDF6138ILFWFKGET7207IGRLPPSDF7233VLCFLVFYV7141WFKGETFDT8227YTRYDPVLC8236FLVFYVPGL8207IGRLPPSDF9236FLVFYVPGL9237LVFYVPGLS9218LANLSTILY10238VFYVPGLSA10238VFYVPGLSA10224ILYYTRYDP11240YVPGLSATT11233VLCFLVFYV12236FLVFYVPGL13237LVFYVPGLS14238VFYVPGLSA15240YVPGLSATT

本研究首次通過生物信息學(xué)方法對ORFV 023蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，初步預(yù)測023蛋白的結(jié)構(gòu)和功能、潛在的B細(xì)胞抗原表位，HLA抗原肽和MHC抗原肽，這為該蛋白的深入研究以及后期建立快速準(zhǔn)確的診斷方法奠定了理論基礎(chǔ)。