海濱木槿莖的化學(xué)成分

姜 杉， 宋正達(dá)， 李丕睿， 黃佳楠， 廖盼華， 馮 煦， 陳 雨

〔江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所(南京中山植物園) 江蘇省植物資源研究與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室江蘇省農(nóng)業(yè)種質(zhì)資源保護(hù)與利用平臺(tái)， 江蘇 南京 210014〕

海濱木槿(HibiscushamaboSieb. et Zucc.)隸屬于錦葵科(Malvaceae)木槿屬(HibiscusLinn.)，為落葉灌木或小喬木[1]，呈野生狀態(tài)分布在浙江舟山和寧波等地沿海一帶的海塘中。海濱木槿是一種極耐干旱瘠薄、極耐鹽堿、耐海潮間歇性淹沒(méi)和海浪濺潑且抗風(fēng)性很強(qiáng)的木本花卉，常作為海岸基干林帶建設(shè)和鹽堿地綠化造林的主要樹(shù)種[2]。 研究結(jié)果表明：多數(shù)木槿屬植物對(duì)治療跌打損傷、陰囊濕疹、皮膚癬、痢疾腹瀉、痔瘡出血、心臟和神經(jīng)系統(tǒng)疾病及各類炎癥有良效[3]。 作者所在項(xiàng)目組發(fā)現(xiàn)，海濱木槿莖粗提物可抑制HL-60 細(xì)胞增殖，具有一定的抗腫瘤活性(另文發(fā)表)。 為進(jìn)一步明確海濱木槿莖中的抗腫瘤成分，作者對(duì)海濱木槿莖乙醇提取物的石油醚萃取部分進(jìn)行了分離和結(jié)構(gòu)鑒定，以期為海濱木槿的深入開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

于2009 年8 月在浙江省海寧縣青珠農(nóng)場(chǎng)采集海濱木槿的鮮莖，經(jīng)江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所袁昌齊研究員鑒定，憑證標(biāo)本保存在江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所標(biāo)本館(NAS)。

主要儀器：Bruker AV 300/500 核磁共振光譜儀(瑞士Bruker 公司)；Agilent 1260 UPLC-6530-Q-TOF-MS 液質(zhì)聯(lián)用儀(配有電噴霧離子源和MassHunter 5.0 工作站，美國(guó)Agilent公司)；中壓液相色譜儀(瑞士Büchi 公司)；C18色譜柱(460mm×26 mm，20 μm，美國(guó)Aglea 公司)；LC-20AR 制備高效液相色譜儀(日本Shimadzu 公司)；Agilent 1100 高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent 公司)；柱色譜硅膠和薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠分廠)；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠(美國(guó)GE 公司)；十八烷基鍵合硅膠(日本YMC 公司)。

主要試劑：齊墩果酸對(duì)照品(南京春秋生物工程有限公司，批號(hào)QDGS20151210，純度在98%以上)；β-谷甾醇對(duì)照品(實(shí)驗(yàn)室自制，純度在98%以上)；β-胡蘿卜苷對(duì)照品(實(shí)驗(yàn)室自制，純度在98%以上)；分析純級(jí)甲醇(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；色譜純級(jí)甲醇(美國(guó)Tedia 公司)；蒸餾水(屈臣氏集團(tuán)有限公司)。

1.2 方法

稱取海濱木槿鮮莖76 kg，粉碎，在江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所中試工廠中按照固液比(m/V)1 ∶10 的比例加入體積分?jǐn)?shù)95%乙醇進(jìn)行回流提取，共提取3 次，每次提取時(shí)間均為2 h，合并提取液，減壓濃縮后得到浸膏，即海濱木槿乙醇提取物。

先向上述浸膏中加入適量的蒸餾水進(jìn)行混懸，再依次加入等體積的石油醚和乙酸乙酯進(jìn)行萃取，分別萃取3 次，且分別合并石油醚和乙酸乙酯萃取液；減壓濃縮后稱量，石油醚萃取部分為105 g，乙酸乙酯萃取部分為154 g，水溶性部分為500 g。 對(duì)石油醚萃取部分進(jìn)行硅膠柱層析，洗脫液為石油醚-丙酮混合液，體積比(V∶V)分別為1 ∶0、4 ∶1和2 ∶1，根據(jù)薄層色譜分析結(jié)果合并組分相似的洗脫液，得到Fr.A、Fr.B 和Fr.C 共3 個(gè)洗脫部分；綜合運(yùn)用硅膠柱層析、凝膠柱層析、重結(jié)晶和制備液相色譜方法，從Fr.A 洗脫部分中分離得到化合物1(200 mg)，從Fr.B 洗脫部分中分離得到化合物2(20 mg)、化合物3(24 mg)和化合物4(32 mg)，從Fr.C 洗脫部分中分離得到化合物5(50 mg)、化合物6(280 mg)、化合物7(2.7 g)和化合物8(23 mg)。

2 結(jié)果和分析

化合物1：白色針晶(三氯甲烷)，易溶于三氯甲烷，微溶于丙酮和甲醇。 mp：261 ℃～263 ℃，波長(zhǎng)254 nm 下無(wú)熒光，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯暗紅色，ESI-MSm/z：427[M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量426。 結(jié)合1H-NMR 和13C-NMR，確定該化合物的分子式為C30H50O。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ：0.72(3H，H-24)，0.86(3H，H-25)，0.87(3H，H-23)，0.95(3H，H-30)，1.00(3H，H-29)，1.01(3H，H-26)，1.05(3H，H-27)，1.18(3H，H-28)。13C-NMR(75 MHz，CDCl3)δ：22.2(C-1，CH2)，41.5(C-2，CH2)，213.1(C-3，C)，58.2(C-4，CH)，42.1(C-5，C)，41.3(C-6，CH2)，18.2(C-7，CH2)，53.1(C-8，CH)，37.4(C-9，C)，59.4(C-10，CH)，35.6(C-11，CH2)，30.5(C-12，CH2)，39.7(C-13，C)，38.3(C-14，C)，32.4(C-15，CH2)，36.0(C-16，CH2)，29.9(C-17，C)，42.8(C-18，CH)，35.3(C-19，CH2)，28.1(C-20，C)，32.7(C-21，CH2)，39.3(C-22，CH2)，6.8(C-23，CH3)，14.6(C-24，CH3)，17.9(C-25，CH3)，20.2(C-26，CH3)，18.6(C-27，CH3)，32.0(C-28，CH3)，31.7(C-29，CH3)，35.0(C-30，CH3)。 根據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定該化合物為木栓酮(friedelin)?；衔?：白色粉末(三氯甲烷)，易溶于三氯甲烷，微溶于丙酮和甲醇。 波長(zhǎng)254 nm 下無(wú)熒光，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯暗紅色，ESI-MSm/z：429[M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量428。 結(jié)合1H-NMR 和13C-NMR，確定該化合物的分子式為C30H52O。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ：3.73(1H，t，J=2.4 Hz，H-3)，1.17(3H，s，H-28)，1.00(3H，s，H-27)，0.99(3H，s，H-26)，0.99(3H，s，H-29)，0.96(3H，s，H-30)，0.94(3H，brd，H-23)，0.92(3H，s，H-25)，0.86(3H，s，H-24)。13CNMR(75 MHz，CDCl3)δ：15.7(C-l)，36.0(C-2)，72.7(C-3)，49.1(C-4)，37.8(C-5)，41.7(C-6)，17.5(C-7)，53.1(C-8)，37.0(C-9)，61.3(C-10)，35.3(C-11)，30.6(C-12)，38.3(C-13)，39.6(C-14)，32.3(C-15)，35.5(C-16)，30.0(C-17)，42.8(C-18)，35.1(C-19)，28.1(C-20)，32.8(C-21)，39.2(C-22)，11.6(C-23)，16.3(C-24)，18.2(C-25)，20.1(C-26)，18.6(C-27)，32.0(C-28)，35.0(C-29)，31.7(C-30)。 根據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定該化合物為3β-木栓醇(3β-friedelinol)。

化合物3：白色粉末(三氯甲烷)，易溶于三氯甲烷，微溶于丙酮和甲醇。 波長(zhǎng)254 nm 下無(wú)熒光，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯黃色，ESI-MSm/z：443[M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量442。結(jié)合1H-NMR 和13C-NMR，確定該化合物的分子式為

C30H50O2。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ：0.89(3H，s，H-25)，0.94(3H，s，H-30)，0.98(3H，s，H-27)，0.99(3H，s，H-29)，1.01(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-24)，1.06(3H，s，H-23)，1.17(3H，s，H-28)。13C-NMR(75 MHz，CDCl3)δ：36.1(C-1)，211.9(C-2)，76.5(C-3)，54.5(C-4)，38.1(C-5)，40.6(C-6)，17.6(C-7)，53.1(C-8)，37.6(C-9)，60.4(C-10)，35.0(C-11)，30.3(C-12)，39.6(C-13)，38.3(C-14)，32.3(C-15)，35.9(C-16)，30.0(C-17)，42.7(C-18)，35.3(C-19)，28.1(C-20)，32.7(C-21)，39.2(C-22)，10.8(C-23，CH3)，14.1(C-24，CH3)，17.4(C-25，CH3)，20.1(C-26，CH3)，18.5(C-27，CH3)，32.0(C-28，CH3)，31.7(C-29，CH3)，35.0(C-30，CH3)。 根據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定該化合物為3α-羥基-木栓烷-2-酮(3α-hydroxy friedel-2-one)。

化合物4：白色粉末(三氯甲烷)，易溶于三氯甲烷，微溶于丙酮和甲醇。 波長(zhǎng)254 nm 下無(wú)熒光，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯紅色，ESI-MSm/z：441[M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量440。結(jié)合1H-NMR 和13C-NMR，確定該化合物的分子式為C30H48O2。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ：0.94(3H，s，H-25)，0.94(3H，s，H-30)，0.98(3H，s，H-27)，0.99(3H，s，H-29)，1.01(3H，s，H-26)，1.09(3H，s，H-24)，1.17(3H，s，H-28)，1.78(1H，d，J=4.3 Hz，6α-H)，1.81(3H，s，H-28)，1.92(1H，dd，m，6β-H)，2.42(1H，dd，J=17.7，13.4 Hz，1β-H)，2.53(1H，dd，J=17.7，4.3 Hz，1α-H)。13C-NMR(75 MHz，CDCl3)δ：32.2(C-1)，195.0(C-2)，142.6(C-3)，140.7(C-4)，39.7(C-5)，38.4(C-6)，17.9(C-7)，52.6(C-8)，36.7(C-9)，55.7(C-10)，34.7(C-11)，30.2(C-12)，39.5(C-13)，38.2(C-14)，32.3(C-15)，35.9(C-16)，30.0(C-17)，42.7(C-18)，35.3(C-19)，28.1(C-20)，32.7(C-21)，39.2(C-22)，10.3(C-23，CH3)，17.6(C-24，CH3)，18.5(C-25，CH3)，18.8(C-26，CH3)，20.0(C-27，CH3)，32.1(C-28，CH3)，31.7(C-29，CH3)，34.9(C-30，CH3)。 根據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定該化合物為3α-羥基-木栓烷-3-烯-2-酮(3α-hydroxy friedel-3-en-2-one)。

化合物5：白色針晶(甲醇)，易溶于三氯甲烷。 mp：308 ℃～315 ℃，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯紫紅色，使用3 種展開(kāi)劑的Rf值與對(duì)照品一致，混合熔點(diǎn)不下降，故確定該化合物為齊墩果酸(oleanic acid)。

化合物6：白色針晶(石油醚-乙酸乙酯)，易溶于三氯甲烷和乙酸乙酯。 mp：140 ℃～141 ℃，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯紫紅色，Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 試驗(yàn)呈陰性，使用3 種展開(kāi)劑的Rf值均與對(duì)照品一致，混合熔點(diǎn)不下降，故確定該化合物為β-谷甾醇(β-sitosterol)?；衔?：白色粉末(三氯甲烷-甲醇)，易溶于DMSO 和吡啶，難溶于三氯甲烷和甲醇。 mp：301 ℃～302 ℃，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯紫紅色，Liebermann-Burchard 反應(yīng)呈陽(yáng)性，Molish 試驗(yàn)呈陽(yáng)性，使用3 種展開(kāi)劑的Rf值均與對(duì)照品一致，混合熔點(diǎn)不下降，故確定該化合物為 β-胡蘿卜苷(β-daucosterol)?；衔?：白色針晶(石油醚-乙酸乙酯)，易溶于三氯甲烷。 mp：156 ℃～159 ℃，香草醛-濃硫酸顯色劑加熱顯紫紅色，Liebermann-Burchard 反應(yīng)陽(yáng)性，ESI-MSm/z：413[M+H]+，相對(duì)分子質(zhì)量412。 結(jié)合1H-NMR 和13C-NMR，確定該化合物的分子式為C29H48O。1H-NMR(300 MHz，CDCl3)δ：5.34(1H，d，J=5.1 Hz，H-6)，5.15(1H，dd，J=12.0，8.4 Hz，H-22)，5.15(1H，dd，J=12.0，8.4 Hz，H-23)，3.50(1H，m，3α-H)，1.55 和1.00(6H，s，2×CH3)是18 和19 位的角甲基，0.68、0.79 和1.02(9H，d，J=6.6，6.0，5.7 Hz，3×CH3)是21、25 和27 位甲基，0.85(3H，t，J=3.9，3.6 Hz，29-CH3)。13CNMR(75 MHz，CDCl3)δ：37.2(C-1)，31.6(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.7(C-5)，121.7(C-6)，33.9(C-7)，31.8(C-8)，51.2(C-9)，36.5(C-10)，21.0(C-11)，40.4(C-12)，42.2(C-13)，56.7(C-14)，23.8(C-15)，28.9(C-16)，55.9(C-17)，12.0(C-18)，21.0(C-19)，39.6(C-20)，19.3(C-21)，129.2(C-22)，138.2(C-23)，50.1(C-24)，24.3(C-25)，31.9(C-26)，18.9(C-27)，25.3(C-28)，12.2(C-29)。根據(jù)以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，鑒定該化合物為豆甾醇(stigmasterol)。

上述8 種化合物均首次從海濱木槿中分離獲得，并且，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[6，9-12]記載，木栓酮、3α-羥基-木栓烷-3-烯-2-酮、齊墩果酸、β-谷甾醇和豆甾醇5 個(gè)化合物均具有抗腫瘤和抗細(xì)胞增殖的作用。