烏檀化學(xué)成分的研究

宋樂(lè)苓，郗 丹，吳桂瑩，劉擁軍，孫敬勇?

（1.濟(jì)南大學(xué)，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250200；2.山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所，國(guó)家衛(wèi)生部生物技術(shù)藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東省罕少見(jiàn)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250062；3.山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，山東 濟(jì)南 250100）

烏檀Nauclea officinalis（Pierre ex Pitard）Merr.et Chun 屬于茜草科烏檀屬，主要分布于廣西、廣東、海南以及中國(guó)南部的其他省份，作為一種常見(jiàn)的民間用藥，常被用于治療感冒、發(fā)燒、咽喉腫痛、急性扁桃體炎、急性結(jié)膜炎、濕疹、皮疹、肺炎、腸炎、痢疾、膿瘍、泌尿系統(tǒng)感染等［1］，目前國(guó)內(nèi)已有“注射液”“浸膏片”2 種形式的制劑用于臨床治療急性扁桃腺炎、急性咽喉炎、急性結(jié)膜炎及上呼吸道感染等［2］，但到目前為止該植物的抗炎藥效物質(zhì)基礎(chǔ)并未完全明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，三萜類化合物具有很好的體外抗炎活性，為了更好地開(kāi)發(fā)利用烏檀植物資源，闡明其抗炎作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)對(duì)其二氯甲烷和乙酸乙酯部位中的三萜類化合物進(jìn)行研究，從中分離得到12 個(gè)化合物，其中化合物3～9 均為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Bruker Avance Ⅲ600 核磁共振儀、紫外透射反射分析儀（上海康華生化儀器有限公司）；WZZ-2S自動(dòng)旋光儀（上海儀電物理光學(xué)儀器有限公司）；Trap VL 型質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；GF254硅膠薄層板、柱層析硅膠（青島海洋化工廠）；ODS-AHG ODS（日本YMC 公司）；Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia 公司）。實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純。

烏檀枝葉于2016 年4 月采自海南瓊中縣黎母山膽木生態(tài)藥林，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院高德民副教授鑒定為烏檀Nauclea officinalis（Pierre ex Pitard）Merr.et Chun 的枝葉，標(biāo)本（201604003）存放于本實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

將干燥的植物粉末（10 kg）在室溫下用75%乙醇（80 L）提取3 次，除去溶劑后，將提取物（750 g）分散于水（3 000 mL）中，依次用二氯甲烷（2 000 mL）、乙酸乙酯（2 000 mL）、正丁醇（2 000 mL）萃取3 次，減壓干燥后，得到二氯甲烷部位（160.3 g）、乙酸乙酯部位（183.3 g）、正丁醇部位（30 g）的粗提物。二氯甲烷部位經(jīng)二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到8 個(gè)組分Fr.1-Fr.8。Fr.2部分經(jīng)過(guò)二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得化合物11（9 mg）、6（8 mg）；Fr.3 經(jīng)硅膠柱層析（二氯甲烷-甲醇梯度洗脫）、凝膠等得化合物4（9 mg）、5（8 mg）；Fr.6 部分經(jīng)硅膠柱層析得化合物9（10 mg）；對(duì)Fr.4 部分進(jìn)行熒光檢測(cè)有暗斑，并且有針狀結(jié)晶析出，經(jīng)凝膠及薄層制備得化合物1（7 mg）、2（6 mg）。乙酸乙酯部位經(jīng)過(guò)硅膠柱層析、ODS 甲醇-水梯度洗脫以及凝膠等得化合物7（9 mg）、8（9 mg）、10（20 mg），并經(jīng)薄層制備、凝膠得化合物3（8 mg），通過(guò)重結(jié)晶得化合物12（35 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淺棕色針狀結(jié)晶（乙醇），ESI-MSm／z：170.7 ［M-H］-，分 子 式 C7H6O5。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：6.93（2H，s，H-2，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：120.3（C-1），108.5（C-2），145.4（C-3），137.9（C-4），145.3（C-5），108.7（C-6），167.4（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［3］基本一致，故鑒定為沒(méi)食子酸。

化合物2：淺棕色針狀結(jié)晶（乙醇），ESI-MSm／z：153.2 ［M-H］-，分 子 式 C7H6O4。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz ）δ：10.19（1H，brs，-COOH），7.31（1H，d，J=7.8 Hz，H-2），7.36（1H，brs，H-6），6.80（1H，d，J=8.4 Hz，H-5）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：167.8（-COOH），122.1（C-1），117.0（C-2），145.3（C-3），150.4（C-4），115.6（C-5），122.4（C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸。

化合物3：黃色針狀結(jié)晶（乙醇），ESI-MSm／z：285.0［M-H］-，分子式C15H10O6。1H-NMR（DMSOd6，600 MHz）δ：12.49（1H，s，-OH），8.06（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），6.44（1H，brs，H-8），6.17（1H，d，J=1.2 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：147.2（C-2），136.1（C-3），176.3（C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.6（C-7），94.0（C-8），156.7（C-9），103.4（C-10），122.1（C-1′），129.9（C-2′），115.9（C-3′），159.7（C-4′），115.9（C-5′），129.9（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物4：白色粉末（乙酸乙酯），［α］20℃D=39.2（c=0.18，CH3OH），ESI-MSm／z：495.2［M+Na］+，分子式C30H48O4。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.47（1H，s，H-12），4.11（1H，m，H-2），3.41（1H，d，J=9.0 Hz，H-3），2.64（1H，d，J=11.4 Hz，H-18），1.29（3H，s，H-23），1.22（3H，s，H-24），1.09（3H，s，H-26），1.05（3H，s，H-27），1.00（3H，d，J=6.0 Hz，H-29），0.99（3H，s，H-25），0.96（3H，d，J=6.6 Hz，H-30）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：47.8（C-1），68.4（C-2），83.6（C-3），39.6（C-4），55.7（C-5），18.6（C-6），33.3（C-7），39.8（C-8），47.9（C-9），38.2（C-10），23.5（C-11），125.2（C-12），139.1（C-13），42.3（C-14），28.4（C-15），24.7（C-16），47.8（C-17），53.3（C-18），39.3（C-19），39.2（C-20），30.9（C-21），37.3（C-22），29.8（C-23），16.8（C-24），17.3（C-25），17.5（C-26），23.6（C-27），180.0（C-28），17.3（C-29），21.2（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定為2α，3β-二羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物5：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=-18.8（c=0.17，CH3OH），ESI-MSm／z：511.1［M+Na］+，分子式C30H48O5。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.59（1H，s，H-12），4.12（1H，m，H-2），3.40（1H，d，J=9.6 Hz，H-3），1.72（3H，s，-CH3），1.45（3H，s，-CH3），1.26（3H，s，-CH3），1.12（3H，d，J=6.0 Hz，-CH3），1.11（3H，s，-CH3），1.09（3H，s，-CH3），1.02（3H，s，-CH3）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：47.9（C-1），68.6（C-2），83.9（C-3），39.9（C-4），56.0（C-5），19.0（C-6），33.5（C-7），40.4（C-8），47.8（C-9），38.5（C-10），24.1（C-11），127.9（C-12），140.4（C-13），42.4（C-14），29.4（C-15），26.4（C-16），48.3（C-17），54.6（C-18），72.7（C-19），42.4（C-20），27.0（C-21），38.7（C-22），29.3（C-23），16.8（C-24），17.3（C-25），17.7（C-26），24.7（C-27），180.8（C-28），27.1（C-29），16.9（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7-8］基本一致，故鑒定為2α，3β，19α-三羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物6：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=40.3（c=0.18，CH3OH），ESI-MSm／z：495.1 ［M +Na］+，分 子 式C30H48O4。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.50（1H，s，H-12），4.23（1H，m，H-3），4.20（1H，d，J=10.2 Hz，H-23），3.74（1H，d，J=10.2 Hz，H-23），1.19（3H，s，H-27），1.07（3H，s，H-24），1.07（3H，s，H-26），1.00（3H，d，J=7.2 Hz，H-29），0.98（3H，s，H-25），0.95（3H，d，J=6.6 Hz，H-30）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：38.9（C-1），27.7（C-2），73.4（C-3），42.9（C-4），48.5（C-5），18.6（C-6），33.3（C-7），40.0（C-8），48.1（C-9），37.1（C-10），23.7（C-11），125.6（C-12），139.3（C-13），42.6（C-14），28.7（C-15），26.2（C-16），48.2（C-17），53.6（C-18），39.4（C-19），39.8（C-20），31.0（C-21），37.3（C-22），67.7（C-23），13.2（C-24），16.0（C-25），16.1（C-26），23.9（C-27），180.0（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為23-羥基-烏蘇酸。

化合物7：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=30.42（c=0.16，CH3OH），ESI-MSm／z：27.8 ［M+Na］+，C30H48O6。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.59（1H，s，H-12），4.26（1H，m，H-2），4.21（1H，d，J=9.6 Hz，H-3），4.21（1H，d，J=9.6 Hz，H-23a），3.74（1H，d，J=10.2 Hz，H-23b），3.05（1H，s，H-18），1.66（3H，s，H-29），1.42（3H，s，H-27），1.14（3H，s，H-25），1.12（3H，d，J=6.6 Hz，H-30），1.10（3H，s，H-24），1.08（3H，s，H-26）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：47.9（C-1），68.9（C-2），78.1（C-3），43.7（C-4），48.0（C-5），18.7（C-6），33.2（C-7），40.5（C-8），47.8（C-9），38.4（C-10），24.2（C-11），128.0（C-12），140.0（C-13），42.4（C-14），29.3（C-15），26.9（C-16），48.3（C-17），54.6（C-18），72.7（C-19），42.2（C-20），26.4（C-21），38.4（C-22），66.4（C-23），14.4（C-24），17.3（C-25），17.4（C-26），24.7（C-27），180.7（C-28），27.1（C-29），16.8（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為2α，3β，19α，23-四羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物8：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=98.6（c=0.18，CH3OH），ESI-MSm／z：511.1 ［M +Na］+，C30H48O5。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.63（1H，s，H-12），4.41（1H，m，H-2），3.44（1H，d，J=3.6 Hz，H-3），3.08（1H，s，H-18），1.55（3H，s，H-29），1.77（3H，s，H-27），1.38（3H，s，H-25），1.47（3H，s，H-24），1.27（3H，s，H-23），1.18（3H，s，H-26），1.13（3H，d，J=7.8 Hz，H-30）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：45.0（C-1），71.5（C-2），78.5（C-3），38.5（C-4），56.0（C-5），18.8（C-6），33.7（C-7），38.8（C-8），48.3（C-9），42.2（C-10），24.8（C-11），128.2（C-12），139.9（C-13），40.5（C-14），29.3（C-15），26.5（C-16），48.2（C-17），54.7（C-18），72.7（C-19），42.4（C-20），27.1（C-21），37.3（C-22），30.0（C-23），17.3（C-24），16.8（C-25），18.2（C-26），24.2（C-27），180.7（C-28），27.0（C-29），16.7（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為2β，3β，19α-三羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物9：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=42.3（c=0.19，CH3OH），ESI-MSm／z：635.1 ［M +H］+分子式C36H58O5。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.37（1H，brs，H-12），4.32（1H，m，H-23），4.00（1H，m，H-23），3.96（1H，m，H-3），2.75（1H，d，J=12.6 Hz，H-18），1.00（3H，s，H-27），0.95（3H，s，H-26），0.91（3H，d，J=7.8 Hz，H-30），0.88（3H，s，H-25），0.87（3H，d，J=6.6 Hz，H-29），0.67（3H，s，H-24），5.07（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），4.43（1H，dd，J=5.1，10.8 Hz，H-2′），4.32（1H，m，H-3′），4.20（1H，dd，J=3.2，7.2 Hz，H-4′），4.01（1H，m，H-5′），4.58（1H，dd，J=2.4，10.8 Hz，H-6b′），4.08（1H，m，H-6a′）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：39.4（C-1），29.5（C-2），78.6（C-3），42.5（C-4），50.4（C-5），20.2（C-6），34.2（C-7），40.0（C-8），46.1（C-9），36.4（C-10），23.4（C-11），122.0（C-12），140.9（C-13），43.7（C-14），30.1（C-15），24.6（C-16），47.9（C-17），56.8（C-18），37.5（C-19），40.5（C-20），36.4（C-21），32.1（C-22），66.5（C-23），12.2（C-24），14.3（C-25），19.3（C-26），23.0（C-27），180.7（C-28），19.1（C-29），21.3（C-30），103.5（C-1′），75.9（C-2′），78.7（C-3′），71.8（C-4′），78.4（C-5′），62.9（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為3-O-β-Dglucopyranosyl-23-hydroxyursolic acid。

化合物10：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=23.9（c=0.21，CH3OH），ESI-MSm／z：511.2 ［M +Na］+，分 子 式C30H48O5。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.63（1H，brs，H-12），4.27（1H，m，H-3），4.17（1H，d，J=10.8 Hz，H-23），3.73（1H，d，J=10.2 Hz，H-23），3.07（1H，s，H-18），1.71，1.63，1.46，1.38，1.20（each 3H，s，-CH3×5），1.13（3H，d，J=6.6 Hz，H-30）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：40.5（C-1），18.5（C-2），73.1（C-3），42.6（C-4），48.3（C-5），17.8（C-6），33.3（C-7），42.3（C-8），48.2（C-9），37.2（C-10），24.2（C-11），128.2（C-12），140.0（C-13），42.4（C-14），29.3（C-15），27.0（C-16），48.2（C-17），54.7（C-18），72.7（C-19），42.5（C-20），27.1（C-21），38.5（C-22），71.7（C-23），14.6（C-24），17.3（C-25），17.1（C-26），24.8（C-27），180.7（C-28），26.4（C-29），16.8（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13］基本一致，故鑒定為3β，19α，23-三羥基烏蘇-12-烯-28-酸。

化合物11：白色粉末（乙醇），［α］20℃D=74.8（c=0.23，CH3OH），ESI-MSm／z：455.7 ［MH］-，分 子 式C30H48O3。1H-NMR（C5d5N，600 MHz）δ：5.48（1H，s，H-12），3.44（1H，m，H-3），2.63（1H，d，J=11.4 Hz，H-18），1.24（3H，s，H-23），1.22（3H，s，H-27），1.05（3H，s，H-26），1.05（3H，d，J=6.0 Hz，H-30），1.02（3H，s，H-25），0.99（3H，d，J=6.0 Hz，H-29），0.88（3H，s，H-24）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：39.1（C-1），28.2（C-2），78.1（C-3），39.8（C-4），55.8（C-5），18.8（C-6），33.3（C-7），39.8（C-8），48.1（C-9），37.3（C-10），23.7（C-11），125.7（C-12），139.3（C-13），42.5（C-14），28.7（C-15），24.9（C-16），48.1（C-17），53.6（C-18），39.5（C-19），39.4（C-20），31.1（C-21），37.4（C-22），28.8（C-23），15.7（C-24），16.6（C-25），17.6（C-26），23.9（C-27），179.9（C-28），17.5（C-29），21.4（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為烏蘇酸。

化合物12：白色粉末（甲醇），分子式C35H60O6。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ：5.36（1H，brs，H-6），5.07（1H，d，J=8.8 Hz，H-1），4.41（1H，m，H-3），1.00（3H，d，J=6.6 Hz，H-21），0.95（3H，s，H-19），0.91（3H，d，J=6.6 Hz，H-27），0.89（3H，m，H-29），0.87（3H，d，J=6.6 Hz，H-26），0.67（3H，s，H-18）；13C-NMR（C5d5N，150 MHz）δ：38.4（C-1），29.5（C-2），79.6（C-3），40.3（C-4），141.8（C-5），122.9（C-6），33.1（C-7），33.0（C-8），51.3（C-9），37.9（C-10），22.2（C-11），40.9（C-12），43.4（C-13），57.2（C-14），25.5（C-15），30.4（C-16），57.2（C-17），13.1（C-18），20.9（C-19），37.3（C-20），20.0（C-21），35.1（C-22），27.4（C-23），47.0（C-24），31.2（C-25），20.2（C-26），20.4（C-27），24.3（C-28），12.9（C-29），103.5（C-23），76.3（C-1′），79.4（C-2′），72.6（C-3′），79.0（C-4′），63.8（C-5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為胡蘿卜苷。

4 討論

烏檀屬的特征性化學(xué)成分為生物堿，是其主要的抗炎活性物質(zhì)，但關(guān)于烏檀中萜類及其抗炎活性的研究很少。本實(shí)驗(yàn)從烏檀75%乙醇提取物中分離得到12 個(gè)化合物，其中有8 個(gè)三萜類化合物，可見(jiàn)萜類也是其重要成分，并且可能是其抗炎活性物質(zhì)的重要組成及其他生物活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。