ApoE基因敲除小鼠器官內(nèi)特洛細(xì)胞的分布

許 瑩，田 虎，于 劍，程佳林，趙玉成

1山東大學(xué)附屬山東省千佛山醫(yī)院普外科，濟(jì)南 250014 2泰山醫(yī)學(xué)院研究生學(xué)院，山東泰安 271000

特洛細(xì)胞第1次被發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行命名是由Popescu在科研過(guò)程中無(wú)意發(fā)現(xiàn)的區(qū)別于普通間質(zhì)細(xì)胞、卻又來(lái)源于間葉組織的細(xì)胞時(shí)完成的，距今已有30余年[1]。在這30年里，國(guó)內(nèi)外大量科研團(tuán)隊(duì)從特洛細(xì)胞存在的可能性、檢測(cè)細(xì)胞可能表達(dá)的生物免疫標(biāo)志物、3D透視電鏡下的形態(tài)以及可能與其周?chē)?xì)胞存在的相關(guān)聯(lián)系等方面進(jìn)行了深入的研究，研究顯示特洛細(xì)胞廣泛存在于生物體的各個(gè)組織中，如存在于人體的心臟[2]、腎臟[3]、皮膚[4]、子宮等系統(tǒng)[5]，肺臟[6]、大腸[7]、肝臟[8]等幾乎所有的空腔臟器和實(shí)質(zhì)臟器中，而且還存在于除人類(lèi)以外的哺乳動(dòng)物體內(nèi)[9-18]。在某些疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中也同樣伴隨著特洛細(xì)胞的改變，如目前已明確的在心肌梗死心肌組織中，特洛細(xì)胞作為一種具有類(lèi)似于纖維細(xì)胞功能的間質(zhì)細(xì)胞在心肌梗死帶邊緣形成三維立體框架結(jié)構(gòu)為新生心肌細(xì)胞提供構(gòu)建的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)[19]。ApoE基因敲除小鼠作為經(jīng)典的用于動(dòng)脈血管粥樣硬化研究的動(dòng)物模型已成熟地被應(yīng)用于血脂異常等疾病的研究過(guò)程中[20]，此種小鼠在繁育的過(guò)程中被人為地敲除了部分細(xì)胞核內(nèi)DNA基因，導(dǎo)致小鼠先天性缺乏ApoE基因，并在高脂飲食的情況下使動(dòng)脈血管壁更容易產(chǎn)生粥樣炎癥性斑塊，較正常小鼠在同等高脂飲食條件下形成動(dòng)脈粥樣硬化的時(shí)間明顯縮短，因此成為臨床研究動(dòng)脈粥樣硬化疾病的經(jīng)典動(dòng)物模型，而且也是在全世界范圍內(nèi)得到公認(rèn)的動(dòng)物模型。特洛細(xì)胞作為近年熱門(mén)的研究方向，雖然已經(jīng)在正常小鼠體內(nèi)的多器官中明確證實(shí)存在特洛細(xì)胞，而且可能參與了部分疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，但在ApoE-/-小鼠形成動(dòng)脈粥樣硬化的過(guò)程中是否參與疾病發(fā)生發(fā)展的過(guò)程，依然缺乏基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的根據(jù)。本研究作為課題組研究的首批實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)特洛細(xì)胞在ApoE-/-小鼠心臟、肝臟及腎臟3大主要器官中的形態(tài)學(xué)差異進(jìn)行系統(tǒng)的研究總結(jié)，為接下來(lái)的課題研究提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。

材料和方法

獲取動(dòng)物標(biāo)本選取由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供的ApoE基因敲除小鼠10只(No. 11400700287821)，雄性，無(wú)特定病原體級(jí)別，體重62 g，高脂飲食2周。小鼠飼養(yǎng)于山東省千佛山醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，室溫22 ℃，相對(duì)濕度55%，鼠籠大小為80 cm×50 cm×45 cm(可保證小鼠活動(dòng)自由，飲食飲水自由)。應(yīng)用10%水合氯醛注射液對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔內(nèi)灌注麻醉，根據(jù)0.04 ml/g水合氯醛為單位劑量計(jì)算小鼠麻醉藥物使用總量。麻醉成功后將小鼠放置于解剖臺(tái)上，固定四肢，常規(guī)消毒鋪巾，先取腹部正中切口快速切取腎臟組織、肝臟組織，然后打開(kāi)胸腔取心臟組織，將以上組織放入室溫下含有4%多聚甲醛的標(biāo)本固定液中，固定標(biāo)本24 h。隨后將組織用石蠟包埋，切片，備行免疫組織化學(xué)。上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已通過(guò)山東省千佛山醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心倫理委員會(huì)的備案及同意(倫理號(hào)為：倫審字S0090號(hào))。

免疫組織化學(xué)石蠟切片脫蠟至水：依次將切片(病理切片機(jī)出自上海徠卡儀器有限公司，RM2016)放入二甲苯和無(wú)水乙醇脫蠟并應(yīng)用蒸餾水水洗(脫水機(jī)出自武漢俊杰電子有限公司，JJ-12J)?？乖迯?fù)：組織切片置于檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液(pH6.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，自然冷卻后將玻片置于PBS(pH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次(渦旋混合器和掌上離心機(jī)出自谷歌生物公司，MX-FMX/D1008E)。血清封閉：在組化圈內(nèi)滴加3%牛血清白蛋白均勻覆蓋組織(組化筆出自Gene tech公司，GT1001)，室溫封閉30 min。加一抗：在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗(CD34，ABCAM公司，AB81289，稀釋比為1∶3000；CD117，Servicebio公司，GB11073，稀釋比為1∶500；PDGFR，Servicebio公司，GB11261，稀釋比為1∶200；CD28，ABCAM公司，AB203084，稀釋比為1∶200)，隨后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔二抗，Servicebio公司，G23303，稀釋比為1∶200)覆蓋組織，室溫孵育50 min。辣根過(guò)氧化氫酶顯色：在圈內(nèi)滴加新鮮配制的辣根過(guò)氧化氫酶顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽(yáng)性為棕黃色。復(fù)染細(xì)胞核：Harris蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。顯微鏡鏡檢(1～400倍任意放大掃描，顯微鏡出自CIC公司，XSP-C204)，并進(jìn)行圖像采集。免疫組織化學(xué)染色分析根據(jù)染色光密度對(duì)陽(yáng)性標(biāo)記分為3種等級(jí)，分別為弱(+)、中(++)、強(qiáng)(+++)，相對(duì)應(yīng)的顏色變化為淡黃色細(xì)顆粒、棕黃色顆粒、褐黃色粗顆粒。圖像選取過(guò)程中以盡可能選取強(qiáng)陽(yáng)性染色為原則。

結(jié) 果

心肌組織在ApoE-/-小鼠的心肌組織中，通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法可以清晰地看到特洛細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)：不規(guī)則的胞體和多條細(xì)長(zhǎng)的串珠樣、偽足樣結(jié)構(gòu)。特洛細(xì)胞存在于心肌細(xì)胞之間，根據(jù)不同的心肌細(xì)胞的走形表現(xiàn)出不同的形態(tài)，相鄰特洛細(xì)胞之間由細(xì)長(zhǎng)的Telopodes相聯(lián)系，形成類(lèi)似于網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的分布現(xiàn)象。選取CD34、CD117和CD28 3種免疫組織化學(xué)生物指標(biāo)對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行單標(biāo)染色后，結(jié)果顯示心肌組織內(nèi)特洛細(xì)胞表達(dá)CD34+、CD117+、CD28+(圖1～3)。

心臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

CD34-positive Telocytes in myocardium tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖1心肌組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD34+單染(×400)

Fig1Single immunohistochemical staining for CD34-positive Telocytes in myocardium tissue (×400)

心臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD117陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

CD117-positive Telocytes in myocardium tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖2心肌組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD117+單染(×400)

Fig2Single immunohistochemical staining for CD117-positive Telocytes in myocardium tissue (×400)

心臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD28陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

CD28-positive Telocytes in myocardium tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖3心肌組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD28+單染(×412)

Fig3Single immunohistochemical staining for CD28-positive Telocytes in myocardium tissue(×412)

肝臟組織在ApoE-/-小鼠的肝臟組織中，同樣可以觀察到特洛細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu):不規(guī)則的胞體和數(shù)條Telope的串珠樣、偽足樣結(jié)構(gòu)。選取CD34、CD117和血小板衍生生長(zhǎng)因子受體-α(plateled-derived growth factor receptor-α，PDGFR-α)3種免疫組織化學(xué)生物指標(biāo)對(duì)肝臟組織進(jìn)行單標(biāo)染色，結(jié)果顯示肝臟組織內(nèi)特洛細(xì)胞表達(dá)CD34+、CD117+、PDGFR-α+。CD117陽(yáng)性表達(dá)和PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)的特洛細(xì)胞廣泛分布在肝組織內(nèi)，其中PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)的特洛細(xì)胞僅表達(dá)Telopode，而特洛細(xì)胞胞體未顯示陽(yáng)性染色；CD34陽(yáng)性表達(dá)的特洛細(xì)胞在肝臟組織內(nèi)的分布有所差異，圍繞在毛細(xì)肝管周?chē)奶芈寮?xì)胞明顯多于肝細(xì)胞之間的特洛細(xì)胞數(shù)量，且肝細(xì)胞之間的特洛細(xì)胞之間并未表現(xiàn)出明顯的三維網(wǎng)狀支架結(jié)構(gòu)(圖4～6)。

肝臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD117陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

CD117-positive Telocytes in hepatic tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖4肝組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD117+單染(×423)

Fig4Single immunohistochemical staining for CD117-positive Telocytes in hepatic tissue (×423)

肝臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

CD34-positive Telocytes in hepatic tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖5肝組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD34+單染(×400)

Fig5Single immunohistochemical staining for CD34-positive Telocytes in hepatic tissue (×400)

PDGFR-α：血小板衍生生長(zhǎng)因子受體-α

PDGFR-α：plateled-derived growth factor receptor-α

肝臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)為棕染；周?chē)?xì)胞通過(guò)蘇木素染色細(xì)胞核呈藍(lán)染

PDGFR-α-positive Telocytes in hepatic tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖6肝組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)PDGFR-α+單染(×400)

Fig6Single immunohistochemical staining for PDGFR-α-positive Telocytes in hepatic tissue (×400)

腎臟組織ApoE-/-小鼠腎臟組織分為3種結(jié)構(gòu)即腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)和腎集合系統(tǒng)，選取CD34、CD117和PDGFR-α 3種免疫組織化學(xué)指標(biāo)分別單染腎臟的以上3個(gè)結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)腎臟內(nèi)特洛細(xì)胞對(duì)CD117和PDGFR-α陰性表達(dá)，腎小管上皮細(xì)胞卻對(duì)以上兩種免疫標(biāo)記物出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)；在腎臟的3種不同結(jié)構(gòu)中的特洛細(xì)胞對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)，特洛細(xì)胞在腎髓質(zhì)內(nèi)存在最為密集廣泛，形成的細(xì)胞間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)最為明顯，其次是腎皮質(zhì)和腎集合系統(tǒng)，且特洛細(xì)胞形成的三維結(jié)構(gòu)皆圍繞腎小管分布，在腎小球周?chē)僖?jiàn)(圖7～11)。

腎臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)PDGFR-α陰性表達(dá)；藍(lán)色細(xì)胞核為經(jīng)蘇木素染色后表現(xiàn)

Telocytes in renal tissue are expressed PDGFR-α negative；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖7腎組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)PDGFR-α-單染(×132)

Fig7Single immunohistochemical staining for PDGFR-α-negative Telocytes in renal tissue (×132)

腎臟組織中的特洛細(xì)胞對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)呈棕色；周?chē)?xì)胞核經(jīng)蘇木素染色后呈藍(lán)色；在腎小管周?chē)?，特洛?xì)胞之間形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)

CD34-positive Telocytes in kidney tissue are stained brown；the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin；Telocytes form three-dimensional net structures around kidney tubules

圖8腎集合系統(tǒng)特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD24+單染(×400)

Fig8Single immunohistochemical staining for CD24-positive Telocytes in renal collecting system (×400)

討 論

特洛細(xì)胞是一種具有極長(zhǎng)極薄端足的新型間質(zhì)來(lái)源的細(xì)胞。自從Popescu 和Faussone-Pellegrini[1]率先將這種特殊的間質(zhì)細(xì)胞用希臘文字命名為“Telcell”，為了更多的掌握此細(xì)胞的存在方式、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能，國(guó)內(nèi)外許多科研團(tuán)隊(duì)越來(lái)越多地開(kāi)始關(guān)注特洛細(xì)胞。目前已證實(shí)特洛細(xì)胞分別存在于人和實(shí)驗(yàn)哺乳動(dòng)物的各種空腔臟器性和非空腔臟器中。雖然近年來(lái)流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)被引入到特洛細(xì)胞的研究中，但迄今為止，透視電鏡仍然是鑒別不同組織和器官中特洛細(xì)胞的“金標(biāo)準(zhǔn)”[1-2]。特洛細(xì)胞參與細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或免疫調(diào)節(jié)，但更多未知的功能還需要探索。在2010至2018年，總共有332篇關(guān)于“特洛細(xì)胞”的科研報(bào)道，其中有2829條被引用在“科學(xué)網(wǎng)”上，關(guān)于特洛細(xì)胞的出版物和引文呈逐年上升的趨勢(shì)。1889年，西班牙神經(jīng)解剖學(xué)家圣地亞哥-拉莫和卡賈爾首次描述了一個(gè)紡錘形或三角形細(xì)胞，該細(xì)胞在腸道肌層和漿膜層中呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。這些特殊細(xì)胞存在于神經(jīng)末梢和平滑肌細(xì)胞之間的間質(zhì)中，將兩者細(xì)胞聯(lián)系在一起。在隨后的70～80年里，特洛細(xì)胞的存在、性質(zhì)和功能在不同的科學(xué)家群體中引起了很大的爭(zhēng)議。到20世紀(jì)60年代，Taxi和 Eugène[25]首先描述Cajal間質(zhì)細(xì)胞是一種新的細(xì)胞類(lèi)型，它不同于神經(jīng)元、Schwann 細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、纖維細(xì)胞和具有超微結(jié)構(gòu)的巨噬細(xì)胞。此后不久，Thuneberg[22]、Faussone Pellegrini等[23]分別證明了此間質(zhì)細(xì)胞不是神經(jīng)元，而是胃腸運(yùn)動(dòng)和神經(jīng)傳導(dǎo)的起搏器。

存在于腎皮質(zhì)和腎小管周?chē)奶芈寮?xì)胞從形態(tài)和數(shù)量上皆區(qū)別于其他部位的特洛細(xì)胞，周?chē)?xì)胞核經(jīng)蘇木素染色后呈藍(lán)色

The morphologies and amount of Telocytes differ between cortex renis and kidney tubules;the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖9腎皮質(zhì)區(qū)特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD24+單染(×400)

Fig9Single immunohistochemical staining for CD24-positive Telocytes in renal cortical section (×400)

特洛細(xì)胞聚集在腎髓質(zhì)中，通過(guò)對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)，表現(xiàn)出不同形態(tài)的胞體，同時(shí)telopodes對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá);周?chē)?xì)胞核經(jīng)過(guò)蘇木素染色后呈藍(lán)色

Telocytes are accumulated in medulla renis area,the CD34-positive Telocytes are manifested by different shapes,the telopodes are also positive for CD34;the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖10腎髓質(zhì)區(qū)特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD24+單染(×400)

Fig10Single immunohistochemical staining for CD34-positive Telocytes in renal medulla renis area (×400)

腎臟內(nèi)的特洛細(xì)胞對(duì)CD117陰性表達(dá)，周?chē)?xì)胞核經(jīng)蘇木素染色后呈藍(lán)色

CD117-negative Telocyes in renal tissue;the surrounding cells are counter-stained blue by hematoxylin

圖11腎組織特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)CD117-單染(×400)

Fig11Single immunohistochemical staining for CD117-negative Telocytes in renal tissue(×400)

特洛細(xì)胞有一個(gè)很小的胞體，有幾個(gè)非常長(zhǎng)而薄的分支，電鏡下細(xì)胞體平均大小為(9.39±3.26)μm 。細(xì)胞胞體的形狀與端足的數(shù)目有關(guān)，如“梨型”細(xì)胞僅有1個(gè)端足，“紡錘體”型有2個(gè)端足，“三角形”有3個(gè)端足等[24]。其細(xì)胞內(nèi)有卵圓形核，沒(méi)有明顯的核仁，異染色質(zhì)團(tuán)附著在核包膜上，占胞體的25%。核周細(xì)胞質(zhì)含有多種線粒體、小高爾基體、少數(shù)粗糙光滑內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞骨架元素。線粒體豐富，占細(xì)胞總數(shù)的2%。小的高爾基體和光滑的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)小于細(xì)胞體積的1%～2%，主要見(jiàn)于細(xì)胞的擴(kuò)張。

本研究主要應(yīng)用免疫組織化學(xué)的生物學(xué)指標(biāo)對(duì)ApoE-/-小鼠心臟、肝臟和腎臟組織中的特洛細(xì)胞進(jìn)行定性定位研究，發(fā)現(xiàn)特洛細(xì)胞在不同組織中存在的形式不同，與相應(yīng)組織內(nèi)其他細(xì)胞的關(guān)系也不同，且同時(shí)表現(xiàn)出不同的免疫組織化學(xué)指標(biāo)。在心臟組織，特洛細(xì)胞對(duì)CD34、CD117和CD28皆為陽(yáng)性表達(dá)且普遍存在于整個(gè)心肌內(nèi)，表明心肌內(nèi)的特洛細(xì)胞即有肌纖維細(xì)胞特異性生物標(biāo)記物CD34的蛋白，推測(cè)特洛細(xì)胞在心肌內(nèi)可能參與血管和心肌細(xì)胞生理、病理學(xué)的變化過(guò)程；在肝臟內(nèi)，特洛細(xì)胞對(duì)CD34、CD117和PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)，但特洛細(xì)胞胞體對(duì)PDGFR-α陰性表達(dá)，僅Telopodes對(duì)PDGFR-α陽(yáng)性表達(dá)。特洛細(xì)胞存在于肝臟內(nèi)的分布密度不同，圍繞在毛細(xì)肝管上皮細(xì)胞周?chē)奶芈寮?xì)胞數(shù)量多，形成可見(jiàn)的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，在肝細(xì)胞、肝星形細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞周?chē)芈寮?xì)胞數(shù)量稀疏，細(xì)胞之間也不會(huì)出現(xiàn)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的形態(tài)改變；在腎臟中，特洛細(xì)胞免疫組織化學(xué)生物標(biāo)記特性較為單一，對(duì)CD34陽(yáng)性表達(dá)，但對(duì)CD117和PDGFR-α陰性表達(dá)，而且發(fā)現(xiàn)特洛細(xì)胞在不同腎臟結(jié)構(gòu)中分布也存在明顯差異，由于腎臟內(nèi)不同結(jié)構(gòu)具有相應(yīng)的不同的功能單位，對(duì)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境調(diào)節(jié)過(guò)程中起到的作用也不同，特洛細(xì)胞同時(shí)也因組織不同而表現(xiàn)差異，推測(cè)特洛細(xì)胞在調(diào)節(jié)不同功能細(xì)胞的過(guò)程中承擔(dān)不同的角色。

綜上，特洛細(xì)胞存在于ApoE-/-小鼠的心臟、肝臟和腎臟內(nèi)，在特定的區(qū)域內(nèi)形成明顯的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，且因不同的組織結(jié)構(gòu)表達(dá)不同的生物免疫學(xué)指標(biāo)。由于本研究重點(diǎn)在于應(yīng)用不同的免疫組織化學(xué)方法對(duì)特洛細(xì)胞進(jìn)行研究，因生物標(biāo)記物的不全面而難以全面地推測(cè)特洛細(xì)胞可能存在的功能，在接下來(lái)的研究中，需要增加免疫熒光、蛋白組學(xué)和光學(xué)透視電鏡，甚至基因測(cè)序等不同實(shí)驗(yàn)方法綜合性地對(duì)特洛細(xì)胞進(jìn)行研究，明確其在特殊實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)真正的調(diào)節(jié)功能。