新疆南疆地區(qū)某規(guī)模奶牛場(chǎng)牛病毒性腹瀉抗原檢測(cè)

朱廣藝，王哲紅，趙玉賓，張迎春，宋健穎，胡建軍

（1. 塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾 843300；

2. 新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第一師畜牧獸醫(yī)工作站，新疆阿拉爾 843300）

牛病毒性腹瀉（bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的牛傳染性疾病，以發(fā)熱、消化道黏膜糜爛和潰瘍、腹瀉等特征為主，同時(shí)也存在免疫耐受與持續(xù)感染、免疫抑制，以及母牛配種延長(zhǎng)、不孕、流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎等，不同品種、性別、年齡的牛都對(duì)其易感，其中幼齡牛最易感[1]。病牛和帶毒牛是本病的主要傳染源。BVDV 還會(huì)與其他細(xì)菌或病毒一起對(duì)牛造成混合感染，嚴(yán)重危害養(yǎng)牛業(yè)[2]。

隨著新疆奶牛業(yè)的發(fā)展，新疆地區(qū)規(guī)模牛場(chǎng)目前也有該病的報(bào)道。多位學(xué)者在新疆不同地區(qū)檢測(cè)出不同程度的BVDV 抗原/抗體陽(yáng)性率，證實(shí)在新疆南北疆地區(qū)牛場(chǎng)存在BVDV 感染[3-8]。本研究結(jié)合王青青[9]對(duì)新疆南疆部分規(guī)模奶牛場(chǎng)BVDV 血清流行病學(xué)調(diào)查，對(duì)該地區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)牛場(chǎng)開(kāi)展了BVDV 血清學(xué)檢測(cè)，以期為新疆規(guī)模牛場(chǎng)的BVD 防控、凈化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)樣品 2018 年12 月至2019 年3 月，對(duì)新疆南疆地區(qū)某規(guī)?；膛?chǎng)，按照“全群普查”的抽樣策略，按欄圈進(jìn)行分批采樣，一次性采集欄圈內(nèi)所有奶牛血樣，共采集血清樣本2 358 份，其中成年牛2 228 份、犢牛130 份；對(duì)在BVDV 檢測(cè)期間當(dāng)日出生的犢牛采集耳組織樣品，共35 份；對(duì)第1 次BVDV 檢測(cè)為抗原陽(yáng)性的奶牛，間隔21 d后進(jìn)行第2 次采樣。所采樣本資料完善，免疫背景清楚，未免疫BVD 疫苗。

1.1.2 主要試劑 BVDV 抗原檢測(cè)試劑盒（敏感性、特異性均為99.9%）、BVDV抗原快速檢測(cè)卡（敏感性、特異性均為99.9%）：均購(gòu)自IDEXX 公司。

1.1.3 儀器設(shè)備 單道微量移液器：Finnpipette F3，Thermo 科技有限公司；多孔道微量移液器：Research plus，Eppendorf 科技有限公司；37 ℃培養(yǎng)箱：GSP-9080MBE，上海博訊有限公司；多功能全波長(zhǎng)96 孔酶標(biāo)儀：xMarkTM，美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 抗原ELISA 檢測(cè) 對(duì)牛血清樣品，參照BVDV 抗原檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行ELISA 檢測(cè)；對(duì)新生犢牛耳組織樣品，參照BVDV 抗原快速檢測(cè)卡說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 結(jié)果判定 BVDV 抗原ELISA 結(jié)果判定：被檢樣品OD 值-陰性對(duì)照OD 平均值≤0.300，判為抗原陰性；＞0.300，判為抗原陽(yáng)性。BVDV抗原快速檢測(cè)卡結(jié)果判定：被檢樣品檢測(cè)線的紅色強(qiáng)于背景，判為抗原陽(yáng)性；與背景相同或弱于背景，判為抗原陰性。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 對(duì)所有檢測(cè)數(shù)據(jù)，用 Excel 進(jìn)行匯總分析。

2 結(jié)果

2.1 血清樣品檢測(cè)

從該場(chǎng)2 358 份血清樣品中，檢測(cè)出BVDV抗原陽(yáng)性血清樣品9 份（成年牛7 份、犢牛2 份），抗原陽(yáng)性率為0.38%（9/2 358）。

2.2 耳組織樣品檢測(cè)

對(duì)35 份新生犢牛耳組織樣品，經(jīng)BVDV 抗原快速檢測(cè)卡檢測(cè)均為陰性。

2.3 持續(xù)感染牛鑒定

對(duì)9 份BVDV 抗原陽(yáng)性血清樣品對(duì)應(yīng)的牛實(shí)施隔離，間隔21 d 后，第2 次采血進(jìn)行BVDV抗原ELISA 檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1 份犢牛血清為BVDV 抗原陽(yáng)性。

2.4 陽(yáng)性犢牛追溯檢測(cè)

對(duì)2頭BVDV抗原檢測(cè)陽(yáng)性犢牛的母牛采血，進(jìn)行BVDV 抗原檢測(cè)，結(jié)果均為陰性。

3 討論

BVDV 呈世界性分布，尤其在養(yǎng)牛業(yè)發(fā)達(dá)的地區(qū)，流行情況更加嚴(yán)重，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)健康發(fā)展。流行病學(xué)調(diào)查表明，國(guó)內(nèi)大多數(shù)省份牛群中普遍存在BVDV 感染[10]。

BVDV 感染存在暫時(shí)性感染和持續(xù)性感染兩種形式。暫時(shí)性感染，是指健康牛被BVDV 感染后，短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)腹瀉等臨床癥狀，但隨著B(niǎo)VDV 的去除，這些癥狀或體征會(huì)很快隨之消失。暫時(shí)性感染牛比較常見(jiàn)，發(fā)病率高，致死率低，大多數(shù)4 歲齡以下牛的血清中都含有BVDV 抗體。持續(xù)性感染（permanent infection，PI），即在懷孕40～120 d 內(nèi)，BVDV 穿透透明帶，通過(guò)胎盤(pán)感染胎兒，存活的胎兒出生后，便成為持續(xù)性感染牛。PI 牛生長(zhǎng)緩慢，多有先天缺陷，終生散發(fā)大量病毒，并產(chǎn)生繁殖障礙，難以受孕或發(fā)生習(xí)慣性流產(chǎn)，最終死亡。

BVDV 可在母牛子宮內(nèi)感染胎兒，導(dǎo)致胎兒免疫耐受，出生后成為PI 牛。PI 牛一生中會(huì)散播大量的BVDV 顆粒，是易感動(dòng)物感染病毒的主要來(lái)源。歐洲一些國(guó)家或地區(qū)通過(guò)淘汰PI 牛后進(jìn)行全群免疫，有效控制了BVD[11-12]。因此，識(shí)別和消除PI 牛及實(shí)施生物安全措施對(duì)于控制和預(yù)防BVD 至關(guān)重要[13]。

采用血清流行病學(xué)調(diào)查方法，可以大范圍、快速地進(jìn)行規(guī)模奶牛場(chǎng)BVDV 檢測(cè)。本研究發(fā)現(xiàn)，該場(chǎng)BVDV 血清抗原陽(yáng)性率為0.38%，且證實(shí)1 頭犢牛為PI 牛，說(shuō)明該場(chǎng)存在一定的和長(zhǎng)時(shí)期的BVDV 流行，需要加強(qiáng)防控，建議采取以下措施：

（1）定期對(duì)全場(chǎng)奶牛進(jìn)行BVDV 抗原ELISA檢測(cè)，對(duì)陽(yáng)性牛及時(shí)隔離，間隔21 d 后進(jìn)行第2次采血復(fù)檢，如果仍為陽(yáng)性，則將其淘汰，同時(shí)跟蹤檢測(cè)其母代牛；（2）對(duì)當(dāng)日新生犢牛，采集耳組織，應(yīng)用BVDV 抗原快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)，如為陽(yáng)性，則隔離、淘汰；（3）對(duì)BVDV 抗原陰性牛群及時(shí)進(jìn)行疫苗免疫接種。

4 結(jié)論

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該規(guī)?；?chǎng)的BVDV 流行率雖然不高，僅為0.38%，但存在PI 牛，表明該場(chǎng)存在一定程度和較長(zhǎng)時(shí)期的BVDV 流行，建議通過(guò)“檢測(cè)+淘汰+免疫”的綜合防控措施，開(kāi)展牛場(chǎng)的BVDV 凈化工作，逐步根除BVDV。