動(dòng)物源性食品中阿托品殘留檢測(cè)研究進(jìn)展

王梓樂(lè)，張艷芳，鄭丕苗，任禎慧，江海洋

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100193）

阿托品（atropine）是一種主要從茄科植物（顛茄、曼陀羅或莨菪）中提取的有毒生物堿，因具有解除平滑肌痙攣、改善微循環(huán)、抑制腺體分泌、加快心搏、升高眼壓、興奮呼吸中樞等功效，在人醫(yī)及獸醫(yī)臨床上作為抗膽堿藥物使用[1]。數(shù)年來(lái)，科研工作者對(duì)于阿托品的研究大多停留在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域[2-3]，關(guān)于其超過(guò)治療劑量使用的危害及非法使用的監(jiān)測(cè)則鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，我國(guó)目前暫未制定阿托品在動(dòng)物源性食品中相關(guān)殘留限量，歐盟也僅僅對(duì)嬰幼兒食品中阿托品殘留設(shè)有1 ng/g 的最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。然而大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，過(guò)量使用阿托品會(huì)引發(fā)人體出現(xiàn)視力模糊、瞳孔擴(kuò)張、口干、皮膚紅腫、嘔吐、心動(dòng)過(guò)速等癥狀甚至導(dǎo)致人體死亡[4]。近年來(lái)，少數(shù)不法分子為謀求經(jīng)濟(jì)利益，在動(dòng)物屠宰前向動(dòng)物大量注射阿托品，利用其抑制腺體分泌的作用特點(diǎn)在短時(shí)間內(nèi)引起動(dòng)物口渴自主大量飲水，最終達(dá)到增加動(dòng)物體重的目的[5]。然而阿托品具有較大的殘留毒性，超量注射直接導(dǎo)致阿托品在動(dòng)物可食組織中大量殘留，若消費(fèi)者食用含過(guò)量阿托品殘留的動(dòng)物源性食品，將對(duì)消費(fèi)者的身體健康與生命安全造成威脅[6-8]。因此，規(guī)范阿托品使用及建立健全相關(guān)殘留檢測(cè)的監(jiān)察機(jī)制對(duì)保障人體健康具有重要意義，同時(shí)建立動(dòng)物源性食品中阿托品殘留相關(guān)檢測(cè)方法也十分必要。本文綜述了目前常見(jiàn)動(dòng)物源食品中殘留檢測(cè)方法，以期為阿托品的合理使用與殘留監(jiān)測(cè)提供文獻(xiàn)參考。

1 阿托品檢測(cè)方法

目前常用于動(dòng)物源性食品中阿托品殘留檢測(cè)的方法主要包括分光光度法、高效液相色譜法（HPLC）和儀器聯(lián)用法。

1.1 分光光度法

分光光度法是一種通過(guò)測(cè)定待測(cè)樣品在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該樣品進(jìn)行定性和定量分析的方法，具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)。朱福卓等[9]利用分光光度法對(duì)牛肉中阿托品殘留量進(jìn)行了測(cè)定，將待測(cè)牛肉樣品切為細(xì)條，采用pH4 的80%乙醇溶液作為反應(yīng)液，于50℃進(jìn)行攪拌24 h 后過(guò)濾蒸干備用，添加梯度濃度的硫酸阿托品溶液各10 mL，于冰浴中沿管壁加入硫氫化鉻銨進(jìn)行沉淀，沉淀物經(jīng)洗滌后丙酮復(fù)溶，加入比色皿，置于721 分光光度計(jì)525 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，其回歸方程為y=0.000 3+0.020 05x，相關(guān)系數(shù)γ=0.999 8。該方法測(cè)得牛肉樣本中阿托品的殘留量為0.32 mg/g。分光光度法不受儀器與設(shè)備等條件的限制，檢測(cè)便捷快速，適用于基層阿托品殘留檢測(cè)。

1.2 高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法以液體作為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將待測(cè)樣品中多種成分于色譜柱內(nèi)進(jìn)行分離后進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。利用該方法對(duì)動(dòng)物源性食品中阿托品殘留進(jìn)行檢測(cè)具有高準(zhǔn)確度與靈敏度的優(yōu)勢(shì)。李長(zhǎng)纓等[10]以羊肉作為檢測(cè)樣本，采用超聲波提取工藝以高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)肉制品中硫酸阿托品含量的檢測(cè)。該方法選取C18作為色譜柱，以甲醇與0.1%、pH5.8 的三乙胺水溶液（35:65，V/V）作為方法的流動(dòng)相，于206 nm 的檢測(cè)波長(zhǎng)下進(jìn)行樣品的檢測(cè)。同時(shí)根據(jù)不同的硫酸阿托品標(biāo)準(zhǔn)品濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，在硫酸阿托品0.002～0.02 mg/mL 的范圍內(nèi)，其回歸方程為y=17 680x-4.362 5。得出該方法的檢測(cè)限為2 mg/kg。

1.3 儀器聯(lián)用法

目前用于動(dòng)物源食品中阿托品殘留檢測(cè)的儀器聯(lián)用法包括超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）、高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LCMS）和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）。

1.3.1 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）胡興娟等[11]成功建立的豬肉和豬肝中阿托品殘留檢測(cè)UPLC-MS/MS，采用乙腈-0.1%甲酸水（V/V，90:10）對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行提取，并經(jīng)過(guò)固相萃取柱凈化后外標(biāo)法定量。該方法表明阿托品含量在0.2～10.0 ng/mL 的范圍內(nèi)時(shí)線性關(guān)系良好，在0.5～2.5 ng/g 的添加濃度范圍內(nèi)批間平均回收率為78.3%～98.2%，該方法的檢測(cè)限為0.2 ng/g，定量限為0.5 ng/g。段科等[12]則選取豬肉、雞肉、牛肉等作為檢測(cè)樣本實(shí)現(xiàn)了生肉中阿托品的殘留檢測(cè)，該方法中生肉樣本經(jīng)乙腈超聲提取之后采用正己烷除油，色譜柱選用C18柱，以0.1%甲酸水溶液-甲醇作為流動(dòng)相對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。試驗(yàn)結(jié)果表明，阿托品在0.5～20.0 ng/mL 的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其方法檢出限為0.056 μg/kg，定量限為0.072 μg/kg。

1.3.2 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）李志剛等[13]建立的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法，為鮮肉中阿托品等違禁注水藥物的同時(shí)檢測(cè)提供了可能。該方法中鮮肉樣本經(jīng)過(guò)磷酸鹽緩沖液，HLB 固相萃取柱凈化后，以甲酸-水（1:99，V/V）及乙腈作為流動(dòng)相。結(jié)果表明，該方法在0.25～50.00 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率在78.07%～96.76%之間，檢測(cè)限與定量限分別為0.5 μg/kg 和2.0 μg/kg，能夠滿足實(shí)際檢測(cè)分析的需要。

1.3.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）Zheng 等[14]以一種優(yōu)化后的QuEChERS（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe）方法結(jié)合LC-MS，實(shí)現(xiàn)了豬肉、雞蛋、牛奶等動(dòng)物源性食品中阿托品殘留檢測(cè)。該方法以乙二胺四乙酸二鈉緩沖液和0.5%三氟乙酸酸化的乙腈的組合作為提取溶液，QuEChERS 試劑盒與吸附劑用于樣本的凈化，以蒸餾水與含有10 mmol/L 甲酸銨的0.1%甲酸的流動(dòng)相實(shí)現(xiàn)了最佳分離。豬肉、牛奶樣本基質(zhì)中的阿托品加標(biāo)濃度為1～10 mg/kg 時(shí)，回收率為60%～120%。該方法的檢測(cè)限為0.4 mg/kg，定量限為2 mg/kg。

1.3.4 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS）董仕林等[15]建立的GC-MS 為羊肉中阿托品的檢測(cè)提供了新的途徑。該方法采用酸性水對(duì)羊肉瘦肉樣本進(jìn)行萃取，經(jīng)過(guò)濾處理、甲醇溶解之后以氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。該方法在標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)樣20 ng時(shí)能夠清晰分辨阿托品出峰，在0～100 ng 的檢測(cè)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，在0.5 mg 的添加水平時(shí)回收率為84%，方法檢測(cè)限為20 ng。

2 討論

目前有關(guān)動(dòng)物源性食品中阿托品殘留檢測(cè)方法的文獻(xiàn)報(bào)道較少。在已建立的分光光度法、高效液相色譜法與儀器聯(lián)用方法中，后兩種方法的檢測(cè)需要使用多種儀器，而且儀器價(jià)格昂貴，對(duì)試驗(yàn)操作人員的專業(yè)要求較高，其中高效液相色譜的方法對(duì)樣品純度或含量的要求高，檢測(cè)限高，難以滿足痕量檢測(cè)的要求，因此這兩種方法在基層檢測(cè)中具有很大的限制。與此同時(shí)，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展，人民生活水平明顯提高，人民對(duì)動(dòng)物源性食品的需求量急速增加。在此背景之下，建立更加快速、操作簡(jiǎn)單、低成本的免疫學(xué)方法具有十分重要的意義?；诳乖贵w特異性結(jié)合的免疫學(xué)方法，其核心試劑為抗阿托品特異性抗體，然而目前國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)抗阿托品特異性抗體的文獻(xiàn)報(bào)道，且其同類化合物東莨菪堿抗體對(duì)其交叉反應(yīng)弱，因此制備抗阿托品特異性抗體，建立相關(guān)免疫學(xué)方法，是檢測(cè)阿托品在動(dòng)物源性食品中殘留的重要跨越，也是科研工作者可以進(jìn)行延伸探究的方面。