菜頭腎化學成分研究△

屈玲霞，王揚，劉永巧，李龍宇，鄒小華，胡曉焱，陸成豪，褚夏燕，徐暾海*，朱寅荻*

1.北京中醫(yī)藥大學 中藥學院，北京 100029；2.中醫(yī)養(yǎng)生學北京市重點實驗室，北京 100029；3.中醫(yī)養(yǎng)生學教育部重點實驗室，北京 100029；4.溫州醫(yī)科大學 藥學院，浙江 溫州 325035

菜頭腎ChampionellasarcorrhizaC.Ling為爵床科黃猄草屬多年生草本植物，別名土太子參、肉根馬藍。味甘，微苦，性涼，歸肝經，塊狀肉質根養(yǎng)陰補腎，可以治療腎虛腰痛等證；莖、葉清熱解毒，用于治療疔瘡癤腫、肌腱扭傷等證，為浙江特有種植物，是溫州民間的草藥[1-2]。菜頭腎常用作補腎方劑七腎湯的君藥，由于其治療效果較好，在溫州當?shù)貜V為流傳。自然因素和人為因素導致野生菜頭腎資源遭到了破壞，為了保護野生菜頭腎資源和供應市場需求，目前菜頭腎已經實現(xiàn)了人工種植[3-4]。初步研究表明，菜頭腎中含有酚類、生物堿、還原糖、三萜、甾醇等類成分[5]。目前對于菜頭腎化學成分方面的文獻報道較少，謝自新等[6]對菜頭腎石油醚提取物的化學成分進行了研究，從中分離鑒定了63個脂溶性成分；董建勇等[7]對菜頭腎石油醚和乙醇提取物的化學成分進行了研究，從中分離鑒定出9個成分。為了進一步闡明其物質基礎，本研究希望通過對菜頭腎進行化學成分研究，從中獲得結構多樣的天然產物，從而為更好地開發(fā)利用該中藥提供依據。本實驗利用各種色譜技術從菜頭腎中分離鑒定了7個化合物，分別為：cornoside(1)、(-)-(2R)-1-O-β-D-glucopyranosyl-2-{2-methoxy-4[1-(E)-propen-3-ol]phenoxyl} propane-3-ol(2)、benzyl alcoholβ-D-(2′-O-β-D-xylopyranosyl)glucopyranoside(3)、腺嘌呤核苷(4)、白樺酯醇(5)、羽扇豆醇(6)、β-谷甾醇(7)。其中，化合物1～5為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Bruker Avance Ⅲ 600型核磁共振儀(德國Bruker公司)；LTQ-Obit rap XL質譜儀(美國Thermo Fisher公司)；Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；YMC Pack ODS-A半制備色譜柱(10 mm×250 mm，5 μm，日本YMC公司)；柱色譜硅膠、薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)；D101大孔樹脂(南開大學)；C18反相填料(日本YMC公司)，Sephadex LH-20(瑞典Amersham biosciences公司)，水為實驗室自制(杭州永潔達凈化科技有限公司)，其他所用試劑均為分析純(常熟市楊園化工有限公司)。

菜頭腎藥材購于磐安市中藥材市場，經溫州醫(yī)科大學中藥學基礎教研室汪洪副教授鑒定為菜頭腎ChampionellasarcorrhizaC.Ling的干燥肉質根莖。

2 提取與分離

菜頭腎干燥肉質根莖約15 kg，切碎，以70%乙醇水回流提取3次，減壓濃縮得乙醇浸膏1.0 kg，將浸膏用水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，減壓回收溶劑，得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取物。將正丁醇萃取物經過D101大孔樹脂粗分段，30%乙醇水洗脫部位經硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(100∶0～50∶50)，回收溶劑，經薄層色譜檢視，合并相似組分得到6個部位(Fr.Z1～6)。Fr.Z3經中壓反相柱色譜，以甲醇-水梯度洗脫，經薄層色譜檢視，合并相似組分，得到6個組分Fr.Z3-1～3-6。將Fr.Z3-3經凝膠柱色譜和高效制備液相色譜分離純化得到化合物1(10 mg)、2(12 mg)和3(6 mg)。將Fr.Z3-2經凝膠柱色譜，以甲醇梯度洗脫，重結晶純化得到化合物4(4 mg)。將乙酸乙酯萃取物經硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(100∶0～50∶50)，回收溶劑，經薄層色譜檢視，合并相似組分得到5個部位(Fr.Y1～6)。Fr.Y2經過重結晶純化得到化合物5(15 mg)；將石油醚萃取物經硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫(100∶0～50∶50)，回收溶劑，經薄層色譜檢視，合并相似組分得到6個部位(Fr.S1～6)。用重結晶方法得到化合物6(10 g)。將Fr.S2經過中壓反相柱色譜、高效制備液相色譜分離純化，得到化合物7(15 mg)。

3 結構鑒定

化合物1：無色膠狀。ESI-MS：m/z317.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.12(2H，dd，J=2.4，10.8 Hz，H-3，5)，6.96(2H，dd，J=2.4，10.8 Hz，H-2，6)，2.05(2H，t，J=6.4 Hz，H-7)，3.76(1H，dt，J=6.4，9.8 Hz，H-8a)，3.90(1H，dt，J=7.6，10.2 Hz，H-8b)，4.16(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：69.2(C-1)，154.5(C-2)，127.9(C-3)，188.0(C-4)，127.8(C-5)，154.4(C-6)，40.8(C-7)，65.6(C-8)，104.0(C-1′)，74.8(C-2′)，77.8(C-3′)，71.4(C-4′)，77.7(C-5′)，62.3(C-6′)。以上數(shù)據與文獻報道的cornoside數(shù)據基本一致[8]，為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

化合物2：無定型粉。ESI-MS：m/z439.1[M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：4.03(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-1a)，3.76(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-1b)，4.33(1H，q，J=5.0 Hz，H-2)，3.77(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-3a)，3.72(1H，dd，J=12.0，5.0 Hz，H-3b)，6.99(1H，brs，H-2′)，7.01(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.86(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-6′)，6.50(1H，d，J=16.0 Hz，H-7′)，6.23(1H，dt，J=16.0，6.0 Hz，H-8′)，4.17(2H，d，J=6.0 Hz，H-9′)，4.25(1H，d，J=8.0 Hz，H-1″)，3.82(3H，s，OMe)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：68.8(C-1)，80.9(C-2)，62.0(C-3)，133.3(C-1′)，111.2(C-2′)，151.9(C-3′)，148.1(C-4′)，118.5(C-5′)，120.7(C-6′)，131.4(C-7′)，128.7(C-8′)，63.7(C-9′)，104.8(C-1″)，75.0(C-2″)，77.9(C-3″)，71.5(C-4″)，77.9(C-5″)，62.6(C-6″)，56.4(OMe)。以上數(shù)據與文獻報道的(-)-(2R)-1-O-β-D-glucopyranosyl-2-{2-methoxy-4[1-(E)-propen-3-ol]phenoxyl}propane-3-ol數(shù)據基本一致[9]，為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

化合物3：無定型粉末。ESI-MS：m/z403.2[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.22(2H，t，J=7.2 Hz，H-3，5)，7.33(2H，dd，J=2.4，7.2 Hz，H-2，6)，7.16(1H，tt，J=2.4，7.2 Hz，H-4)，4.54(1H，d，J=12.0 Hz，H-7a)，4.84(1H，d，J=12.0 Hz，H-7b)，4.39(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，4.40(1H，d，J=7.0 Hz，H-1″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：139.1(C-1)，128.9(C-2，6)，129.2(C-3，5)，128.6(C-4)，71.4(C-7)，102.3(C-1′)，83.8(C-2′)，77.9(C-3′)，71.1(C-4′)，77.9(C-5′)，62.7(C-6′)，106.3(C-1″)，74.8(C-2″)，77.4(C-3″)，71.4(C-4″)，67.2(C-5″)。以上數(shù)據與文獻報道的benzyl alcoholβ-D-(2′-O-β-D-xylopyranosyl)glucopyranoside數(shù)據基本一致[10]，為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

化合物4：白色粉末。ESI-MS：m/z267.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，C6D5N)δ：8.17(1H，s，H-2)，8.30(1H，s，H-8)，5.95(1H，d，J=6.0 Hz，H-1′)；13C-NMR(150 MHz，C6D5N)δ：156.0(C-2)，152.5(C-4)，120.9(C-5)，160.1(C-6)，145.4(C-8)，90.7(C-1′)，78.0(C-2′)，75.2(C-3′)，90.7(C-4′)，66.0(C-5′)。以上數(shù)據與文獻報道的腺嘌呤核苷數(shù)據基本一致[11]，為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

化合物5：為白色粉末。ESI-MS：m/z443.1[M+H]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：3.12(1H，m，H-3)，2.40(1H，m，H-19)，0.78(3H，s，H-23)，0.85(3H，s，H-24)，0.94(3H，s，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，1.07(3H，s，H-27)，3.27(1H，d，J=10.0Hz，H-28a)，3.73(1H，d，J=10.0Hz，H-28b)，4.67(1H，s，H-29a)，4.56(1H，s，H-29b)，1.60(3H，s，H-30)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：40.4(C-1)，28.7(C-2)，81.8(C-3)，40.8(C-4)，58.0(C-5)，18.8(C-6)，34.3(C-7)，40.8(C-8)，50.9(C-9)，37.6(C-10)，21.5(C-11)，24.1(C-12)，37.6(C-13)，42.2(C-14)，28.7(C-15)，30.1(C-16)，45.9(C-17)，45.9(C-18)，47.1(C-19)，153.9(C-20)，29.9(C-21)，32.9(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，16.2(C-25)，16.1(C-26)，14.6(C-27)，60.1(C-28)，109.4(C-29)，19.4(C-30)。以上數(shù)據與文獻報道白樺脂醇(Betulin)的數(shù)據基本一致[12]，為首次從黃猄草屬植物中分離得到。

化合物6：白色粉末。ESI-MS：m/z426.3[M]+。1H-NMR(600 MHz，CD3Cl3)δ：3.18(d，J=4.8Hz，H-3)，2.41(1H，m，H-19)，0.78(3H，s，H-23)，0.82(3H，s，H-24)，0.86(3H，s，H-25)，0.99(3H，s，H-26)，1.00(3H，s，H-27)，1.06(3H，s，H-28)，4.72(1H，s，H-29a)，4.60(1H，s，H-29b)，1.72(3H，s，H-30)；13C-NMR(150 MHz，CD3Cl3)δ：38.8(C-1)，27.5(C-2)，79.1(C-3)，38.9(C-4)，55.4(C-5)，18.4(C-6)，34.3(C-7)，40.9(C-8)，50.5(C-9)，37.3(C-10)，21.0(C-11)，25.2(C-12)，38.1(C-13)，42.9(C-14)，27.5(C-15)，35.6(C-16)，34.1(C-17)，48.4(C-18)，48.1(C-19)，151.1(C-20)，29.9(C-21)，40.1(C-22)，28.1(C-23)，15.5(C-24)，16.2(C-25)，16.1(C-26)，14.6(C-27)，18.1(C-28)，109.4(C-29)，19.4(C-30)。以上數(shù)據與文獻報道的羽扇豆醇lupeol數(shù)據基本一致[13]。

化合物7：無色針晶。5%硫酸乙醇溶液加熱顯紫紅色。與β-谷甾醇標樣對照，其Rf值在多種展開劑中均相同，顯色一致。由此推測該化合物為β-谷甾醇。