VEGF基因沉默脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對人MKN45胃癌細(xì)胞生長的影響

孫英慧

（北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院，遼寧 沈陽 110016）

腫瘤細(xì)胞有無限增殖特點，需要較多條件，其中血供最為關(guān)鍵，腫瘤患者腫瘤增殖轉(zhuǎn)移過程中血管會起到重要作用，在腫瘤疾病治療中，從控制腫瘤血管數(shù)量角度出發(fā)，能夠?qū)δ[瘤生長起到一定的抑制效果[1]。腫瘤細(xì)胞想要實現(xiàn)自我增殖，可通過多種機(jī)制優(yōu)化周圍環(huán)境，誘導(dǎo)血管生成最為重要，血管生成誘導(dǎo)過程復(fù)雜性高，需要多個因素共同參與作用，VEGF（血管內(nèi)皮生長因子）屬于一個主要因素[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，VEGF屬于當(dāng)前已發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)血管生成主要誘導(dǎo)因子，對腫瘤細(xì)胞生長、增殖和轉(zhuǎn)移有促進(jìn)作用[3]。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）為一種干細(xì)胞，本文研究VEGF基因沉默ADSCs對人MKN45胃癌細(xì)胞生長的影響，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年10月～2018年10月在本動物實驗中心展開隨機(jī)對照動物實驗。根據(jù)VEGF基因序列相關(guān)原則，利用Blaster軟件對比。具體分為空白對照組、陰性對照組及VEGF siRNA組。

1.2 方法

1.2.1 基因siRNA沉默

從siRNA中選擇與VEGF有特異性相關(guān)序列。

1.2.2 基因介導(dǎo)傳染

按照轉(zhuǎn)染反應(yīng)說明書要求操作，操作前取少量生長對數(shù)期MKN45胃癌細(xì)胞培養(yǎng)，選擇不含抗生素培養(yǎng)基，持續(xù)24 h，加入含siRNA轉(zhuǎn)染試劑，在細(xì)胞中孵育5 h，之后更換培養(yǎng)液。培養(yǎng)24 h、48 h、72 h、96 h后分別收集轉(zhuǎn)染細(xì)胞，觀察胃癌細(xì)胞生長情況。siRNA轉(zhuǎn)染后使用RT-PCR方法檢測細(xì)胞VEFG表達(dá)情況。利用CD34免疫組織化學(xué)法染色檢測胃癌組織血管生成狀況。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本次研究中所有試驗數(shù)據(jù)均運(yùn)用SPSS 20.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理，其計量資料通過t檢驗。P＜0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 VEGF表達(dá)情況

空白對照組、陰性對照組及VEGF siRNA組VEGF表達(dá)分別為（0.67±0.02）、（0.69±0.03）、（0.34±0.01），VEGF siRNA組VEGF表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 基因轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞生長情況

空白對照組、陰性對照組及VEGF siRNA組腫瘤重量分別為（1.84±0.15）g、（1.83±0.14）g、（1.12±0.15）g，VEGF siRNA組腫瘤重量明顯更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 各組MVD情況

空白對照組、陰性對照組及VEGF siRNA組MVD視野分別為（10.8±0.6）個、（10.7±0.5）個、（5.3±0.2）個，VEGF siRNA組MVD視野明顯更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討 論

雖然腫瘤有無限增殖和轉(zhuǎn)移能力，但是如果缺乏增殖和轉(zhuǎn)移條件，這一過程將很難實現(xiàn)。腫瘤無線增殖和轉(zhuǎn)移主要為營養(yǎng)支持，腫瘤中血管能夠為其提供重要營養(yǎng)支持，同時這一過程受到較多生長因子的影響，復(fù)雜性高，VEGF屬于最為主要的誘導(dǎo)因子[4]。ADSCs提取自脂肪組織，脂肪中含有大量間充質(zhì)干細(xì)胞，具備體外增長以及多重分化等能力。VEGF作用機(jī)制為：（1）增加微血管通透性，促進(jìn)血管分子向血管外滲透，腫瘤細(xì)胞可進(jìn)入血管壁，發(fā)生轉(zhuǎn)移；（2）通過EC上受體促進(jìn)EC增殖，為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移提供條件[5]。腫瘤血管能夠為腫瘤提供營養(yǎng)支持，血管尚未形成前，腫瘤幾乎不會出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，隨著病程延長，血管樹木逐漸增多，增大腫瘤細(xì)胞進(jìn)入血管的機(jī)會，造成病情惡化。

本次研究表明，在VEGF表達(dá)方面，VEGF siRNA組VEGF表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；在基因轉(zhuǎn)染后胃癌細(xì)胞生長情況方面，VEGF siRNA組腫瘤重量明顯更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；在MVD情況方面，VEGF siRNA組MVD視野明顯更低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，VEGF基因沉默ADSCs后VEGF明顯降低，混合MKN45胃癌細(xì)胞后接種未影響胃癌生長和血管形成。