■楊樹浩 馮 藝 陳建酬* 洪允成
(1.佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院動物營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室,廣東佛山528000;2.佛山市三水白金水產(chǎn)種苗有限公司,廣東佛山528000)
羅氏沼蝦又稱馬來西亞大蝦,產(chǎn)自厄瓜多爾沿岸附近,是一種生長發(fā)育快、食性雜、體格大、肉質(zhì)鮮美、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的大型淡水蝦。20世紀(jì)90年代以來,全球產(chǎn)量持續(xù)增長[1]。到2016年上半年,我國羅氏沼蝦養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)分布在沿海省市,養(yǎng)殖面積達(dá)到60萬畝,占全國養(yǎng)殖產(chǎn)值的1.5%,是我國主要經(jīng)濟(jì)蝦類之一[2]。生物飼料通過微生物發(fā)酵劑菌種的發(fā)酵能消除飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子,分解原料大分子蛋白,產(chǎn)生多種有機(jī)酸[3],具有改善飼料品質(zhì)、促進(jìn)動物生長、提高飼料消化率、增強(qiáng)免疫力等作用[4]。近年來已應(yīng)用在克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)[5]、中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis H.Milne-Edwards)[6]等水產(chǎn)動物中,能夠促進(jìn)動物生長,提高機(jī)體免疫酶活性,在羅氏沼蝦養(yǎng)殖中尚未見報道。本試驗(yàn)給羅氏沼蝦投喂不同比例的生物飼料,探究生物飼料對羅氏沼蝦生長、消化酶和免疫酶活性的影響,為生物飼料推廣應(yīng)用提供參考。
胰蛋白酶(TPS)、脂肪酶(LPS)、淀粉酶(AMS)、纖維素酶(CL)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)測定試劑盒,均購于南京建成生物工程研究所。
試驗(yàn)用的羅氏沼蝦來自于佛山市三水白金水產(chǎn)種苗有限公司,在水泥池暫養(yǎng)一周,投喂廣東旺海飼料實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)的基礎(chǔ)飼料。
基礎(chǔ)飼料和生物飼料的成分分別見表1和表2。生物飼料∶水=2∶5混合,常溫密封發(fā)酵72 h,室內(nèi)低溫干燥后,按飼養(yǎng)試驗(yàn)要求與基礎(chǔ)飼料充分混合粉碎過60目篩,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
表1 基礎(chǔ)飼料的組成(干物質(zhì),%)
表2 生物飼料的組成(干物質(zhì),%)
選擇平均體重為(0.02±0.01)g健康的羅氏沼蝦28 800尾,按飼養(yǎng)試驗(yàn)要求隨機(jī)分為4組,每組設(shè)3個重復(fù),每個重復(fù)2 400尾蝦,分別飼養(yǎng)在水泥池中(5.3 m×3.5 m×1 m),池底設(shè)有微孔增氧和換水系統(tǒng),放置遮蔽物,防止沼蝦自相殘殺。投喂4種飼料:對照組為100%基礎(chǔ)飼料(A組),B、C、D組分別為90%基礎(chǔ)飼料+10%生物飼料、80%基礎(chǔ)飼料+20%生物飼料、70%基礎(chǔ)飼料+30%生物飼料。養(yǎng)殖期間水溫為23~28 ℃,溶解氧約為6.3 mg/l,pH值約為8.0,氨氮約為0.1 mg/l,亞硝酸鹽約為0.1 mg/l。每天上下午各投喂一次,日投喂量為蝦體重的5%。每天清理一次池底的殘餌和排泄物,每3 d更換池水1/3,試驗(yàn)期為42 d。
飼養(yǎng)結(jié)束時計(jì)數(shù)各組活蝦數(shù),每組隨機(jī)挑選300尾羅氏沼蝦測量體長(精確到0.01 cm)和體重(精確到0.01 g),計(jì)算下列指標(biāo):
式中:G1——增長率(%);
G2——初體長(cm);
G3——末體長(cm);
W1——增重率(%);
W2——初體質(zhì)量(g);
W3——末體質(zhì)量(g);
G4——特定生長率(%/d);
t——飼養(yǎng)時間(d);
F1——飼料系數(shù);
F2——投餌量(g);
S1——存活率(%);
S2——存活數(shù)(尾);
S3——總數(shù)(尾)。
飼養(yǎng)結(jié)束后,將羅氏沼蝦饑餓1 d。每組隨機(jī)挑選500尾羅氏沼蝦,在冰水浴中去除蝦殼和內(nèi)臟,取軀體肌肉樣本,測定體成分。肌肉中水分含量按GB/T 6435—2014測定(直接干燥法),粗蛋白質(zhì)含量按GB/T6432—94測定(仲裁法),粗脂肪含量按GB/T 6433—2006測定(索氏提取法),粗灰分含量按GB/T 6438—2007測定,肌肉氨基酸含量采用S-433D型高效液相色譜儀測定。
參考氨基酸評分標(biāo)準(zhǔn)模式[7]和全雞蛋蛋白質(zhì)的氨基酸模式[8],分別計(jì)算氨基酸評分(AAS)、化學(xué)評分(CS)和必需氨基酸指數(shù)(EAAI)。
式中:N0——樣品氨基酸含量(%);
N1——標(biāo)準(zhǔn)模式氨基酸含量(%);
N2——全雞蛋蛋白質(zhì)同類氨基酸含量(%);
n——必需氨基酸數(shù)量(個);
A、B、C…J——樣品蛋白質(zhì)的必需氨基酸含量(%);
AE、BE、CE…JE——全雞蛋蛋白質(zhì)同類的氨基酸含量(%)。
每組隨機(jī)挑選500尾羅氏沼蝦,取肝胰臟[9],依照試劑盒說明書的方法,冰水浴勻漿、離心后,采用試劑盒測定酶活性,測定儀器為紫外分光光度計(jì)。
結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)”表示,原始數(shù)據(jù)采用Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),應(yīng)用SPSS 22.0軟件中“單因素(ANOVA)方差分析”,利用Duncan's法對數(shù)據(jù)進(jìn)行多重比較,P>0.05為差異不顯著,P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。
由表3可知,C組羅氏沼蝦的增重率為296.34%,極顯著高于A組(P<0.01),顯著高于B組(P<0.05),增重率分別比A組、B組提高了7.42%和3.75%;D組羅氏沼蝦的增重率為288.59%,顯著高于A組(P<0.05),增重率提高了4.61%;B組羅氏沼蝦的增重率與A組相比差異性不顯著(P>0.05)。羅氏沼蝦的增長率、特定生長率、飼料系數(shù)和存活率各組間的差異不顯著(P>0.05)。
表3 不同比例的生物飼料對羅氏沼蝦生長性能的影響
表4 不同比例的生物飼料對羅氏沼蝦肌肉營養(yǎng)指標(biāo)的影響(濕樣,%)
由表4可知,不同比例的生物飼料對羅氏沼蝦肌肉營養(yǎng)指標(biāo)影響不顯著(P>0.05)。其中C組羅氏沼蝦的粗蛋白質(zhì)含量最高,為19.00%,水分含量最低,只有78.50%;D組僅次之,粗蛋白質(zhì)為18.96%、水分為78.53%;A組羅氏沼蝦的粗蛋白質(zhì)含量最低,只有18.44%,水分含量最高,達(dá)到了79.02%。四組羅氏沼蝦的粗脂肪和粗灰分含量差異不大。
羅氏沼蝦肌肉中氨基酸組成見表5,除色氨酸(Try)在水解過程中被破壞無法測定外,共含有17種氨基酸,包含9種必需氨基酸(EAA)和4種呈味氨基酸(DAA)。四組羅氏沼蝦肌肉的總氨基酸(TAA)含量無顯著性差異(P>0.05),其中C組總氨基酸、必需氨基酸、呈味氨基酸含量達(dá)到最高,分別是16.05%、7.02%、6.02%,D組次之,A組總氨基酸、必需氨基酸和呈味氨基酸含量最低。按照世界衛(wèi)生組織/聯(lián)合國糧農(nóng)組織(WHO/FAO)對理想蛋白的定義,羅氏沼蝦肌肉中EAA含量/TAA含量超過40%,EAA含量/NEAA含量超過60%,屬于標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)源。谷氨酸(Glu)含量占TAA含量的比例最高,Glu含量/TAA含量達(dá)到14%,賴氨酸(Lys)含量占EAA含量的比例最高,Lys含量/EAA含量接近22%。
羅氏沼蝦肌肉氨基酸評分、化學(xué)評分和必需氨基酸指數(shù)評定結(jié)果見表6和表7。肌肉中必需氨基酸的氨基酸評分接近或超過1,化學(xué)評分接近或超過0.5,基本符合WHO/FAO理想蛋白的標(biāo)準(zhǔn)。各組羅氏沼蝦肌肉氨基酸的必需氨基酸指數(shù)為67.43~70.80,賴氨酸的氨基酸評分和化學(xué)評分分別為1.43~1.48和1.10~1.14。蛋氨酸+胱氨酸(Met+Cys)的氨基酸評分和化學(xué)評分最低,分別只有0.71~0.76和0.40~0.43。
表5 不同比例的生物發(fā)酵飼料對羅氏沼蝦肌肉氨基酸組成的影響(濕樣,%)
表6 羅氏沼蝦肌肉必需氨基酸分?jǐn)?shù)與兩個評分模式(mg/gN)
表7 羅氏沼蝦肌肉必需氨基酸組成評分
由表8可知,B組羅氏沼蝦胰蛋白酶的活性為130.81 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01),C組羅氏沼蝦胰蛋白酶的活性高于其他三組,達(dá)到了145.07 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01),顯著高于B組(P<0.05),D組羅氏沼蝦胰蛋白酶的活性為135.30 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01)。
表8 不同比例的生物飼料對羅氏沼蝦肝胰臟消化酶活性的影響
C組羅氏沼蝦淀粉酶的活性為2.12 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01),顯著高于B組(P<0.05);D組羅氏沼蝦淀粉酶的活性為2.81 U/mg prot.,極顯著高于其他三組(P<0.01)。纖維素酶的活性只有C組羅氏沼蝦最好,為3.06 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01),顯著高于B組(P<0.05)。四組羅氏沼蝦的脂肪酶活性差異不顯著(P>0.05)。
由表9可知,C組羅氏沼蝦超氧化物歧化酶的活性為17.76 U/mg prot.,極顯著高于A組(P<0.01),顯著高于B組(P<0.05);D組羅氏沼蝦超氧化物歧化酶的活性最高,達(dá)18.10 U/mg prot.,極顯著高于A組和B組(P<0.01)。C組羅氏沼蝦谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性為35.64 U/mg prot.,顯著高于A組(P<0.05)。四組羅氏沼蝦過氧化氫酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性差異不顯著(P>0.05)。
研究發(fā)現(xiàn),發(fā)酵菌的發(fā)酵作用有效降解了飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子,飼料中淀粉、粗蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)被水解成易被動物體吸收的各種小肽和氨基酸[10],發(fā)酵產(chǎn)物含有大量的營養(yǎng)物質(zhì)[11]、外源性消化酶[12]和有益菌落[13],為機(jī)體合成生命所需物質(zhì)提供充足的基礎(chǔ)原料,補(bǔ)充消化道的消化酶和有益菌落,提高機(jī)體對飼料的消化能力,尤其是對羅氏沼蝦難以消化的淀粉和纖維素進(jìn)行分解,提高飼料利用率,降低成本,促進(jìn)羅氏沼蝦的生長發(fā)育。沈城等[14]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),發(fā)酵豆粕代替15%~20%的魚粉時幼蟹的體重指標(biāo)有顯著性的提高。餌料中添加適量發(fā)酵豆粕能促進(jìn)巖魚(Sebastes schlegeli)的生長發(fā)育[15],在餌料中添加植物乳酸菌發(fā)酵的大豆粉顯著提高了大菱鲆(Scophthalmusmaximus L.)的生長[16]。
在本試驗(yàn)中,羅氏沼蝦的增重率隨生物飼料添加量的增加而增加,基礎(chǔ)飼料中添加20%生物飼料時,羅氏沼蝦增重率與對照組相比提高了7.42%;說明生物飼料與發(fā)酵豆粕一樣能提高動物的增重率。有研究顯示,隨著發(fā)酵飼料添加比例的增大,動物的增重率和增長率開始下降[17]。發(fā)酵飼料具有易消化吸收、含多種促生長因子和一定誘食性等特點(diǎn),但其經(jīng)過微生物的消化吸收后,其產(chǎn)物營養(yǎng)價值不如常規(guī)的原料,添加量過多會導(dǎo)致飼料的營養(yǎng)水平低于動物的營養(yǎng)需求,影響動物的生長發(fā)育。本試驗(yàn)中添加30%生物飼料投喂后,羅氏沼蝦增重率與對照組相比提高了4.61%,低于生物飼料添加比例為20%的羅氏沼蝦的增重率。可見,在基礎(chǔ)飼料中添加適量的生物飼料能有效提高羅氏沼蝦增重率,而添加比例過多時動物的生長發(fā)育減緩。
在本試驗(yàn)中,投喂生物飼料對羅氏沼蝦體長、特定生長率、飼料系數(shù)和存活率影響不明顯,這可能與發(fā)酵產(chǎn)物對不同生長指標(biāo)的促進(jìn)作用不同有關(guān),其作用機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。
測量動物體肌肉營養(yǎng)成分能夠準(zhǔn)確判斷動物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求和評估肌肉的營養(yǎng)價值,對生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。周興華等[18]發(fā)現(xiàn),添加不同比例的發(fā)酵豆粕對鯽魚(Carassius auratus)肌肉營養(yǎng)成分沒有改善效果,添加比例過多反而會降低肌肉粗蛋白質(zhì)含量、提高肌肉水分;沈城等[14]研究表明,少量發(fā)酵豆粕代替魚粉對中華絨螯蟹的肌肉粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和粗灰分無顯著影響。王天神[5]通過飼養(yǎng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),生物發(fā)酵飼料對提高蝦體肌肉氨基酸差異不顯著。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,基礎(chǔ)飼料中添加生物飼料對羅氏沼蝦的肌肉營養(yǎng)成分的影響差異不顯著,粗蛋白質(zhì)含量隨生物飼料添加比例的遞增而先增加后降低。當(dāng)添加20%生物飼料時,羅氏沼蝦粗蛋白質(zhì)含量最高為19.00%,其余試驗(yàn)組的羅氏沼蝦粗蛋白質(zhì)含量均高于對照組。投喂生物飼料的羅氏沼蝦肌肉含水量比投喂基礎(chǔ)飼料的羅氏沼蝦低,而粗脂肪和粗灰分含量變化無明顯規(guī)律。
羅氏沼蝦肌肉中必需氨基酸分?jǐn)?shù)基本符合WHO/FAO理想蛋白模型,必需氨基酸指數(shù)達(dá)到67.43~70.80,其中賴氨酸含量豐富,約占必需氨基酸總量的22%,恰好能補(bǔ)充人類谷類食品缺乏的賴氨酸,而羅氏沼蝦肌肉中蛋氨酸和胱氨酸的氨基酸評分和化學(xué)評分分別只有0.71~0.76和0.40~0.43,達(dá)不到WHO/FAO理想蛋白模型,可見蛋氨酸和胱氨酸是羅氏沼蝦的限制性氨基酸。
羅氏沼蝦的消化能力與體內(nèi)酶活性有密切關(guān)系。發(fā)酵菌在發(fā)酵過程需要分泌多種消化酶,如胰蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶等,保持很長時間的高活性。生物飼料中的消化酶能作為動物的外源性酶,進(jìn)入動物腸道幫助動物消化吸收[13]。李程瓊等[19]在基礎(chǔ)飼料中添加21%的發(fā)酵豆粕飼養(yǎng)鰻魚(Ell),發(fā)現(xiàn)其腸道消化酶活性有顯著提高;彭翔等[20]利用發(fā)酵豆粕代替10%~20%的魚粉進(jìn)行飼喂能顯著提高黑鯛(Acanthopagrus schlegelii)體內(nèi)部分消化酶的活性;楊霞等[21]利用發(fā)酵棉籽粕飼喂中華絨蟹幼蟹也得出同樣結(jié)論。這說明添加發(fā)酵飼料進(jìn)行投喂能提高動物的消化酶活性。
表9 不同比例的生物飼料對羅氏沼蝦肝胰臟免疫酶活性的影響
在本試驗(yàn)中,羅氏沼蝦胰蛋白酶和纖維素酶的活性隨著生物飼料添加比例的遞增而呈現(xiàn)不同程度的增強(qiáng)。當(dāng)基礎(chǔ)飼料中添加10%生物飼料時,羅氏沼蝦胰蛋白酶和纖維素酶的活性明顯提高。而添加比例到達(dá)20%時,羅氏沼蝦胰蛋白酶和纖維素酶的活性分別比對照組提高了45.52%和18.60%。生物飼料與其他發(fā)酵飼料對消化酶活性的影響一致,能提高羅氏沼蝦蛋白酶和纖維素酶的活性。隨著生物飼料添加比例不斷增加,消化酶活性呈下降趨勢,呂云云等[17]、馮建等[22]、李云蘭等[23]分別在圓斑星鰈(Verasper variegatus)、大黃魚(Larimichthys crocea R.)和鯉魚(Cyprinus carpio)試驗(yàn)中得到驗(yàn)證。生物飼料含有大量的外源性消化酶,在進(jìn)入動物體內(nèi)后和消化道的消化酶混合在一起對飼料進(jìn)行消化吸收,增強(qiáng)胃腸道的排空率。當(dāng)基礎(chǔ)飼料中添加30%生物飼料時,胰蛋白酶和纖維素酶的活性分別為135.30 U/mg prot.和 2.82 U/mg prot.,有明顯下降趨勢。機(jī)體的消化道的消化速率加快,機(jī)體營養(yǎng)需求得到快速的補(bǔ)充,不再需要過多的消化酶參與消化,通過神經(jīng)調(diào)節(jié)減少肝胰臟消化酶的合成[24],導(dǎo)致消化酶活性下降。而羅氏沼蝦淀粉酶活性隨著生物飼料比例遞增而平穩(wěn)上升,基礎(chǔ)飼料中添加10%生物飼料對羅氏沼蝦淀粉酶活性效果不顯著,隨著添加比例的增加,基礎(chǔ)飼料中添加20%和30%生物飼料投喂后,羅氏沼蝦淀粉酶活性出現(xiàn)顯著差異,最高時比對照組淀粉酶活力提高了77.85%。本試驗(yàn)生物飼料的添加比例最高只添加到30%,未能探究出淀粉酶活力最高時生物飼料的最佳添加量,相關(guān)研究有待進(jìn)一步完善。
有研究發(fā)現(xiàn),鳙魚(Aristichthys nobilis)肝胰臟、匙吻鱘(Polyodon spathula)腸道和肝臟消化酶與其體長體重呈顯著的正相關(guān)[25]。本試驗(yàn)中,基礎(chǔ)飼料中添加20%生物飼料顯著提高了羅氏沼蝦胰蛋白酶和纖維素酶活性,增長率比對照組提高了7.42%,說明生物飼料提高了羅氏沼蝦胰蛋白酶和纖維素酶活性而提高其增長率,而添加30%生物飼料時,增長率只比對照組提高了4.61%,這與胰蛋白酶和纖維素酶活性較低有關(guān)。而鰱魚和匙吻鱘消化道和肝胰臟的脂肪酶與其體長體重相關(guān)性不強(qiáng),甚至呈負(fù)相關(guān)[25]。本試驗(yàn)中生物飼料對羅氏沼蝦肝胰臟的脂肪酶活性有增強(qiáng)作用但沒有顯著性差異,這可能與生物種類不同有關(guān)。
抗氧化酶和代謝酶活性水平直接影響水產(chǎn)動物抗病力,兩者相互協(xié)同構(gòu)成一套生物體保護(hù)的機(jī)制[26]。發(fā)酵菌發(fā)酵能有效的消除飼料中的抗?fàn)I養(yǎng)因子,減少硫化氫、二氧化碳等有害氣體在腸道消化過程的產(chǎn)生,避免機(jī)體受到刺激產(chǎn)生過敏反應(yīng)[27]。生物飼料發(fā)酵后包含多種益生菌,能在動物體腸道中創(chuàng)造酸性環(huán)境,抑制病原菌的生長發(fā)育,同時能產(chǎn)生多種氨基酸和小肽等物質(zhì),增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)[13]。夏青等[28]利用生物飼料飼喂凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei),蝦體內(nèi)超氧化物歧化酶活性顯著提高。徐奕晴等[6]在基礎(chǔ)飼料中添加15%發(fā)酵料投喂中華絨螯蟹,發(fā)現(xiàn)能顯著提高幼蟹的抗氧化酶活性。而孫宏等[29]利用發(fā)酵棉籽粕代替魚粉飼喂黑鯛后谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有所提高,但差異不顯著。本試驗(yàn)中,隨著生物飼料添加比例的增加,超氧化物歧化酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性也有不同程度的增強(qiáng)。當(dāng)基礎(chǔ)飼料中添加20%生物飼料時,羅氏沼蝦超氧化物歧化酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性分別比對照組提高了17.07%和7.09%,說明飼喂生物飼料后有益菌在腸道占領(lǐng)主要地位,提高了動物體免疫水平,與此同時谷草轉(zhuǎn)氨酶活性增強(qiáng),羅氏沼蝦體內(nèi)蛋白質(zhì)合成能力增加,分解降低,有助于氮在體內(nèi)沉積,提高動物肌肉粗蛋白質(zhì)含量,達(dá)到了19.00%,但相對于其他組差異不顯著,這可能與其他因素有關(guān)。當(dāng)基礎(chǔ)飼料中添加30%生物飼料時,谷草轉(zhuǎn)氨酶的活力出現(xiàn)下降趨勢,與對照組相比差異不顯著,肌肉粗蛋白質(zhì)含量也下降,這可能是因?yàn)樯镲暳系奶砑颖壤^高,飼料營養(yǎng)水平不能滿足機(jī)體的需求,導(dǎo)致蛋白沉淀下降。而羅氏沼蝦超氧化物歧化酶活性卻提升到18.10 U/mg prot.,比對照提高了19.31%,說明生物飼料的添加比例越高,微生物數(shù)量越多,抗活性氧能力越高,進(jìn)一步增強(qiáng)動物機(jī)體免疫能力。本試驗(yàn)生物飼料的添加比例最高只添加到30%,未能探究出超氧化物歧化酶活性最高時生物飼料的最佳添加量,相關(guān)研究有待進(jìn)一步完善。
①基礎(chǔ)飼料中添加10%~30%生物飼料能明顯提高羅氏沼蝦肝胰臟胰蛋白酶的活性。
②基礎(chǔ)飼料中添加20%~30%生物飼料能顯著提高羅氏沼蝦增重率、肝胰臟淀粉酶、纖維素酶和超氧化物歧化酶的活性。
③基礎(chǔ)飼料中添加20%生物飼料能顯著提高羅氏沼蝦肝胰臟谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性。