• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    乳腺癌影像基因組學(xué)研究進(jìn)展

    2018-12-28 02:28:42明文龍袁少勛謝建明劉宏德顧萬(wàn)君孫嘯
    關(guān)鍵詞:基因組學(xué)亞型基因組

    明文龍,袁少勛,謝建明,劉宏德,顧萬(wàn)君,孫嘯

    東南大學(xué)生物科學(xué)與醫(yī)學(xué)工程學(xué)院,生物電子學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇南京 210096;

    近年來(lái),我國(guó)乳腺癌發(fā)病率不斷升高,并呈年輕化趨勢(shì)[1],對(duì)乳腺癌的早期預(yù)防、精確診療和預(yù)后分析能力迫切需要提高。分子生物學(xué)與免疫學(xué)的快速發(fā)展為乳腺癌早期診斷、分型、預(yù)防警示及預(yù)后判斷奠定了基礎(chǔ)。最初,乳腺癌按照基因表達(dá)譜差異分為4類分子亞型,但這種分型方式受到基因分析的成本、設(shè)備和技術(shù)要求等的限制,很難對(duì)每一位患者進(jìn)行分類[2]。因此,臨床上通常借助免疫組化法替代基因分析,但免疫組化法預(yù)測(cè)乳腺癌預(yù)后的魯棒性較差,且其分類結(jié)果與基因分析結(jié)果的一致性也較差[3]。因此,需要一種新的分類方法,以實(shí)現(xiàn)乳腺癌的精準(zhǔn)分類[4]。

    醫(yī)學(xué)影像診斷方面,以MRI、CT和PET為代表的醫(yī)學(xué)成像技術(shù)具有非侵入性、高分辨率、時(shí)空連續(xù)性等特點(diǎn),對(duì)展現(xiàn)腫瘤表型的差異具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[5],促進(jìn)了影像組學(xué)的迅猛發(fā)展;而影像組學(xué)方法可以通過從高通量的醫(yī)學(xué)影像數(shù)據(jù)中發(fā)掘大量具有高度代表性的定量影像特征,尋找影像特征與疾病之間的關(guān)系。因此,通過研究挖掘基因組特征與影像特征之間的聯(lián)系,進(jìn)而利用影像特征反映基因活動(dòng),實(shí)現(xiàn)疾病相關(guān)基因活動(dòng)的非侵入式診斷的影像基因組學(xué)得以發(fā)展,并成為影像組學(xué)的熱點(diǎn)之一[6-8]。乳腺癌的影像基因組學(xué)研究旨在從以基因數(shù)據(jù)為代表的生物大數(shù)據(jù)和以影像數(shù)據(jù)為代表的醫(yī)學(xué)大數(shù)據(jù)中提取出有價(jià)值的信息,進(jìn)而轉(zhuǎn)化成醫(yī)學(xué)知識(shí),并最終指導(dǎo)乳腺癌的診斷和防治[9]。因此,本文擬從乳腺癌的基因特征、影像特征及兩者關(guān)聯(lián)分析的方法方面綜述目前乳腺癌影像基因組學(xué)的研究進(jìn)展,為后續(xù)研究提供參考。

    1 乳腺癌的基因組特征

    乳腺癌的基因組特征可分為3個(gè)層次:易感基因突變和單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism,SNP)特征、表達(dá)譜特征和分子亞型特征。在基因?qū)哟紊?,目前已發(fā)現(xiàn)的乳腺癌易感基因超過 70個(gè),包括 BRCA1/2、TP53等[10]。BRCA1/2在DNA同源重組修復(fù)中發(fā)揮重要作用,其致病性突變通常位于外顯子區(qū)和可變剪切區(qū),當(dāng)其發(fā)生有害突變時(shí),同源重組修復(fù)出現(xiàn)錯(cuò)誤,導(dǎo)致腫瘤更易發(fā)生。除易感基因外,最新研究結(jié)果證實(shí)至少55個(gè)SNP也與乳腺癌密切相關(guān)[11],比如位于TP53編碼區(qū)的rs1800371發(fā)生錯(cuò)義突變,導(dǎo)致p53蛋白質(zhì)發(fā)生突變,從而顯著增加了乳腺癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[12];位于非編碼區(qū)的 SNP,如Ahmed等[13]于 2009年發(fā)現(xiàn)的 SLC4A7基因的rs4973768也與乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。在基因表達(dá)方面,乳腺癌具有不同的基因和蛋白表達(dá)譜特征。Perou等[14]首次利用cDNA微陣列數(shù)據(jù)對(duì)乳腺癌基因表達(dá)譜進(jìn)行差異分析,發(fā)現(xiàn)乳腺癌在基因表達(dá)水平上的差異。隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,RNA-Seq數(shù)據(jù)逐步代替微陣列數(shù)據(jù)用于差異分析,但蛋白表達(dá)譜才能真正反映乳腺癌在表達(dá)水平上的特征,因此也有研究利用反相蛋白陣列(reverse phase protein arrays,RPPA)數(shù)據(jù)獲得乳腺癌在蛋白質(zhì)表達(dá)水平上的特征。在臨床上對(duì)乳腺癌進(jìn)行分子亞型的分類具有重要作用,因?yàn)椴煌瑏喰蛷幕蛲蛔兒蚐NP特征,到表達(dá)譜特征,再到最后的病理學(xué)表現(xiàn)、治療方案等臨床特征,均具有其獨(dú)特的模式。如luminal-A型和B型更容易發(fā)生成骨轉(zhuǎn)移癌,基底細(xì)胞樣型更傾向于引起肺和大腦病變;術(shù)前化療對(duì)于HER-2高表達(dá)型具有更好的治療效果,而luminal-A型和B型一般采用術(shù)后放療。乳腺癌的基因檢測(cè)和分析在臨床上具有重要的參考價(jià)值,但這種方式大都是侵入式的,而影像技術(shù)作為一種優(yōu)良的非侵入式診斷方式,正逐漸在“精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)”時(shí)代體現(xiàn)出重要作用。

    2 乳腺癌的影像特征

    臨床上乳腺癌的影像學(xué)診斷主要包括動(dòng)態(tài)對(duì)比增強(qiáng) MRI(dynamic contrast-enhanced MRI,DCEMRI)、乳腺 X 線攝影、超聲、DWI-MRI[15]、CT和PET,目前在影像基因組學(xué)研究中最常用的是 DCEMRI和乳腺 X線攝影,也有少量研究是基于超聲和PET 數(shù)據(jù)[16-17]。

    自2012年Yamamoto等[18]首次開展了乳腺癌影像基因組學(xué)的研究以來(lái),DCE-MRI數(shù)據(jù)以其高分辨率、時(shí)空連續(xù)性等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于相關(guān)研究。影像特征的提取分為定性和定量影像特征提取,定性影像特征的獲得主要通過具有豐富臨床經(jīng)驗(yàn)的影像科醫(yī)師,按照“乳腺影像報(bào)告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)”(breast imaging reporting and data system,BI-RADS)的要求,選取具體的指標(biāo)作為影像特征,對(duì)這些指標(biāo)進(jìn)行0/1打分,Yamamoto等[18]和 Liu等[11]的研究采用這種方法。然而,使用定性影像特征會(huì)損失大量的腫瘤病變信息,并且具有一定的主觀性,不利于后續(xù)分析,故更多的研究工作是在定量影像特征的基礎(chǔ)上建立的。定量影像特征的提取方式主要分為半自動(dòng)和自動(dòng)提取,前者是通過至少2位經(jīng)驗(yàn)豐富的影像科醫(yī)師確定影像中的感興趣區(qū)(ROI),通常為疑似的腫瘤病變部位,然后針對(duì)ROI的體素或像素,計(jì)算出相應(yīng)的定量影像特征值,這種方式由于需要手動(dòng)的圖像分割,故稱為半自動(dòng)特征提取[4,19-21]。自動(dòng)特征提取即借助計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)圖像識(shí)別、分割和特征計(jì)算,Yamamoto等[22]的研究基于計(jì)算機(jī)視覺算法,針對(duì)DCE-MRI動(dòng)態(tài)增強(qiáng)對(duì)比成像過程中的時(shí)空連續(xù)性,實(shí)現(xiàn)了對(duì)病灶部位的自動(dòng)分割及特征的定量提取[22]。此外,由于目前缺少統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn),在影像特征的選擇上,不同的研究團(tuán)隊(duì)選擇的影像特征也有所區(qū)別,表1總結(jié)了Zhu等[19]的研究工作,將常用的DCE-MRI影像特征分成6類。

    表1 常用DCE-MRI影像特征

    盡管常用的乳腺 X線攝影和超聲的影像特征與DCE-MRI基本一致,主要包括大小、形態(tài)學(xué)和增強(qiáng)紋理特征,但DCE-MRI的特征值多數(shù)是基于體素計(jì)算的,而乳腺X線攝影檢查和超聲的影像特征值均是基于像素的。與DCE-MRI相比,乳腺X線攝影通常還包含其他影像特征,如腫塊最大直徑、乳腺密度、鈣化大小類型、周圍結(jié)構(gòu)扭曲等,超聲圖像也包含超聲方向、回聲類型、后段聲學(xué)特征等影像特征[16-17,23]。然而,乳腺 X線攝影檢查和超聲圖像均缺少動(dòng)力學(xué)曲線評(píng)估、增強(qiáng)方差動(dòng)力學(xué)和薄壁組織增強(qiáng)相關(guān)的特征,而這3類特征均是DCE-MRI獨(dú)特的影像學(xué)特征[16-17,19]。

    3 乳腺癌的影像基因組學(xué)研究方法

    影像基因組學(xué)是在基因組大數(shù)據(jù)與醫(yī)學(xué)影像大數(shù)據(jù)融合發(fā)展趨勢(shì)下形成的。針對(duì)人類重大疾病,通過影像基因組學(xué)研究挖掘基因組特征與影像特征之間的聯(lián)系,進(jìn)而利用影像特征反映基因活動(dòng),實(shí)現(xiàn)疾病相關(guān)基因活動(dòng)的非侵入式診斷。目前,針對(duì)乳腺癌基因特征和影像特征的關(guān)聯(lián)分析研究是多層次的,主要包括基因序列水平、基因表達(dá)水平和分子亞型水平,圖 1展示了癌癥影像檔案(the cancer imaging archive,TCIA)數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的1例乳腺癌患者DCEMRI影像切片[24],通過影像特征提取,在這3個(gè)不同的基因水平上進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。

    圖1 女,白種人,53歲,右乳浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。矢狀位T1增強(qiáng)后MRI影像切片。DCE-MRI檢查可見右側(cè)乳房?jī)?nèi)外上象限有明顯的腫瘤病灶(箭)。通過特征提取和計(jì)算,可獲得該腫瘤的體積(7700.99 mm3)、腫瘤最大3D直徑(45.39 mm)、偏度(-0.25)、峰度(2.86)等定量影像特征,結(jié)合該患者相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù)(SNP位點(diǎn)、基因表達(dá)量等)進(jìn)行系統(tǒng)全面的融合分析

    3.1 基因序列水平上的關(guān)聯(lián)分析 基因序列水平上的關(guān)聯(lián)分析指通過建立乳腺癌易感基因和 SNP位點(diǎn)信息與影像特征之間的聯(lián)系,從而發(fā)掘乳腺癌基因特征與影像表型間的相關(guān)性。

    Yamamoto等[18]對(duì)來(lái)源于腫瘤表達(dá)項(xiàng)目 expO數(shù)據(jù)庫(kù)的353例乳腺癌患者,在全基因組范圍內(nèi)獲得高差異性表達(dá)基因,人工評(píng)估了26個(gè)定性MRI影像特征,然后利用斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)系數(shù)建立基因與影像特征之間的關(guān)聯(lián),并進(jìn)行基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA),結(jié)果顯示,21個(gè)影像特征與71%的基因存在全基因組范圍內(nèi)的關(guān)聯(lián);12個(gè)影像特征和乳腺癌基因集存在顯著關(guān)聯(lián),11個(gè)影像特征與預(yù)后基因集存在關(guān)聯(lián)。該研究初步嘗試了在易感基因和影像特征之間建立聯(lián)系,隨后部分研究人員利用體細(xì)胞基因突變和SNP信息進(jìn)行了類似的研究。Zhu等[19]利用癌癥基因組圖譜和TCIA中 91例乳腺癌患者的基因組信息和 MRI數(shù)據(jù)進(jìn)行了綜合全面的關(guān)聯(lián)分析研究。該研究中的MRI定量影像特征是基于ROI方式獲得的,研究使用的體細(xì)胞突變數(shù)據(jù)來(lái)源于外顯子組測(cè)序結(jié)果,在選取乳腺癌患者中最常見的體細(xì)胞突變后,引入患者年齡和腫瘤病理學(xué)分級(jí)作為調(diào)整參數(shù),構(gòu)建了以下的一般線性回歸模型用于關(guān)聯(lián)分析。

    其中,xi表示患者i的影像特征值,mi表示患者i有無(wú)突變的值(0或1),ai表示患者i的年齡,g2,i和g3,i代表患者i的腫瘤病理學(xué)分級(jí),ε為偏差。結(jié)果顯示,某些突變頻率較高的基因與影像特征存在顯著關(guān)聯(lián),如該研究顯示GATA3基因突變與腫瘤大小、形態(tài)不規(guī)則性以及總熵特征呈負(fù)相關(guān),由于腫瘤大小、不規(guī)則性等特征通常是反映腫瘤惡性程度和侵襲力的標(biāo)志,因此可以推斷 GATA3基因突變可能不是腫瘤惡化發(fā)展的驅(qū)動(dòng)突變。

    Liu等[11]的研究納入336例患者和375例對(duì)照,首次進(jìn)行了乳腺癌SNP特征和影像特征的關(guān)聯(lián)分析,使用55個(gè)SNP和49個(gè)乳腺X線攝影影像特征,這些影像特征是依據(jù) BI-RADS獲得的定性評(píng)估結(jié)果。該研究通過在給定狀態(tài)下,計(jì)算SNP和乳腺X線攝影檢查影像特征的條件互信息。

    其中,X表示一個(gè)離散的SNP特征值,Y表示一個(gè)離散的影像特征值,Z代表乳腺癌的狀態(tài)值。研究者利用自助采樣法,按照有無(wú)風(fēng)險(xiǎn)等位基因?qū)NP特征進(jìn)行二值化處理進(jìn)行分析,結(jié)果表明,有11組SNP-影像特征對(duì)與乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在顯著關(guān)系,其中 6對(duì)與風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān),5對(duì)與風(fēng)險(xiǎn)降低有關(guān)。

    3.2 基因表達(dá)水平上的關(guān)聯(lián)分析 基因表達(dá)水平上的關(guān)聯(lián)分析是基于基因和蛋白表達(dá)譜數(shù)據(jù),建立表達(dá)差異特征與影像特征之間的相關(guān)性,從而發(fā)現(xiàn)乳腺癌在轉(zhuǎn)錄翻譯水平上的活動(dòng)特征與影像表型之間的關(guān)系。乳腺癌相關(guān)基因通路、預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與影像特征的關(guān)聯(lián)分析均是目前的研究熱點(diǎn)。

    基因通路能夠反映乳腺癌在發(fā)生及發(fā)展過程中基因活動(dòng)和轉(zhuǎn)錄活動(dòng)的變化規(guī)律。Zhu等[19]從京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)中獲取乳腺癌相關(guān)的基因通路,利用GSEA尋找與38個(gè)影像特征相關(guān)的基因通路。部分結(jié)果顯示,很多KEGG通路與影像特征均存在顯著關(guān)聯(lián),尤其與病灶體積、有效直徑、表面積和最大線性尺寸呈顯著正相關(guān),與邊緣銳度、徑向梯度直方圖方差呈顯著負(fù)相關(guān)。同時(shí),該研究還使用 P53、鈣黏素等142種蛋白質(zhì)的RPPA數(shù)據(jù),借助線性回歸模型,分析蛋白質(zhì)表達(dá)特征與影像特征的相關(guān)性,結(jié)果表明蛋白質(zhì)表達(dá)特征僅與腫瘤的大小和形態(tài)學(xué)特征存在一定的相關(guān)性。

    預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)分析對(duì)于術(shù)后治療方案的選擇和生存評(píng)估具有重要指導(dǎo)意義。乳腺癌21基因Oncotype DX檢測(cè)技術(shù)可通過檢測(cè)和分析 21個(gè)與乳腺癌密切相關(guān)的基因的RNA表達(dá)量,實(shí)現(xiàn)10年內(nèi)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分。Ashraf等[25]借助Oncotype DX對(duì)56例患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分,并與MRI影像特征進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析。研究者通過對(duì)影像特征的無(wú)監(jiān)督聚類分析,將其分為4個(gè)影像表型,然后建立一個(gè)多元線性回歸模型,用于分析影像特征與復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。結(jié)果表明,MRI影像特征與乳腺癌復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分之間存在中等程度的相關(guān)性;再將影像表型分類結(jié)果作為附加變量加入分類器中后,ROC曲線下面積從0.77增加到0.82。該研究是最早嘗試了在影像特征和乳腺癌復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分之間建立聯(lián)系,隨后 Li等[21]和 Wan等[26]于 2016年進(jìn)行了更加深入的研究,擬將影像診斷與臨床分子診斷結(jié)果相結(jié)合,以期對(duì)乳腺癌的臨床診療和預(yù)后提供更加全面的指導(dǎo)。

    3.3 分子亞型水平上的關(guān)聯(lián)分析 分子亞型是基于分子診斷的分類結(jié)果,體現(xiàn)出一定的臨床差異性,但當(dāng)涉及的患者樣本空間較大時(shí),對(duì)所有樣本進(jìn)行基因分析的成本較高,有些研究者會(huì)采用免疫組化法獲得乳腺癌分子亞型的分類結(jié)果[27-28]。分子亞型水平上的關(guān)聯(lián)分析指對(duì)不同的乳腺癌分子亞型與影像診斷特征進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,挖掘并建立不同分子亞型和影像特征之間的相關(guān)性。結(jié)果可對(duì)臨床上乳腺癌的綜合診斷、治療和預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)分析等均具有較強(qiáng)的參考價(jià)值。Mazurowski等[4]利用半自動(dòng)化方式從48例患者中提取出23個(gè)MRI影像特征,通過基因表達(dá)分析獲得4類分子亞型。該研究的關(guān)聯(lián)分析分為兩部分:第一部分是分別對(duì)4種分子亞型進(jìn)行多元邏輯回歸分析,影像特征作為自變量,分子亞型是因變量,其目的在于獲取與影像特征存在潛在關(guān)聯(lián)的乳腺癌分子亞型,第二部分工作則是分析特定的分子亞型與每一個(gè)影像特征之間具體的關(guān)聯(lián)性。研究者選取了患者年齡、絕經(jīng)期狀態(tài)以及MRI的方向作為模型潛在的混雜變量,用于分析影像特征與特定分子亞型間的關(guān)聯(lián)性,最后用Bonferroni對(duì)多重假設(shè)檢驗(yàn)進(jìn)行校正,結(jié)果表明luminal-B型乳腺癌與動(dòng)態(tài)造影劑增強(qiáng)特征存在關(guān)聯(lián)(P=0.0015),即病灶增強(qiáng)比和背景組織增強(qiáng)比的比值越高,越可能是luminal-B型。

    4 展望

    近年來(lái),影像基因組學(xué)在腦失調(diào)性疾病和癌癥的研究中逐漸興起,乳腺癌的影像基因組學(xué)研究始于2012年:從一開始通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的方法在全基因組范圍內(nèi)尋找基因組特征與影像特征之間的聯(lián)系,篩選潛在的候選特征,到現(xiàn)在越來(lái)越多的研究去驗(yàn)證影像特征與特定基因特征間的關(guān)系。作為乳腺癌影像基因組學(xué)研究的主要任務(wù),建立乳腺癌特定分子亞型與影像特征的關(guān)聯(lián),一方面有助于尋找能夠替代或輔助免疫組化實(shí)現(xiàn)對(duì)乳腺癌分子亞型進(jìn)行分類的影像特征,另一方面發(fā)掘特定分子亞型與影像特征的關(guān)聯(lián),能夠?qū)崿F(xiàn)以非侵入的方式獲得基因及其轉(zhuǎn)錄、翻譯活動(dòng)的相關(guān)信息,對(duì)臨床上實(shí)現(xiàn)綜合準(zhǔn)確的非侵入式乳腺癌診斷具有重要作用。乳腺癌影像基因組學(xué)發(fā)展迅速,但也面臨著諸多挑戰(zhàn),其中最主要的挑戰(zhàn)是符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者樣本量較少。此外,腫瘤病灶的全自動(dòng)識(shí)別與分割難度較大,目前多數(shù)研究仍是基于ROI的方式提取特征,并且存在缺少統(tǒng)一規(guī)范的特征選擇標(biāo)準(zhǔn)的問題[29-30]。盡管如此,隨著大數(shù)據(jù)時(shí)代的到來(lái)、深度學(xué)習(xí)的發(fā)展以及精準(zhǔn)醫(yī)療的需求,乳腺癌影像基因組學(xué)在可預(yù)見的未來(lái)具有廣闊的發(fā)展空間和重要的臨床應(yīng)用潛力。

    猜你喜歡
    基因組學(xué)亞型基因組
    牛參考基因組中發(fā)現(xiàn)被忽視基因
    基于基因組學(xué)數(shù)據(jù)分析構(gòu)建腎上腺皮質(zhì)癌預(yù)后模型
    系統(tǒng)基因組學(xué)解碼反芻動(dòng)物的演化
    科學(xué)(2020年2期)2020-08-24 07:56:44
    Ikaros的3種亞型對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響
    ABO亞型Bel06的分子生物學(xué)鑒定
    營(yíng)養(yǎng)基因組學(xué)——我們可以吃得更健康
    HeLa細(xì)胞中Zwint-1選擇剪接亞型v7的表達(dá)鑒定
    基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
    有趣的植物基因組
    抑郁的新亞型:閾下抑郁
    404 Not Found

    404 Not Found


    nginx
    精品人妻偷拍中文字幕| 国产免费一区二区三区四区乱码| 一二三四在线观看免费中文在| 黄色 视频免费看| 久久毛片免费看一区二区三区| av.在线天堂| 又大又黄又爽视频免费| 国产综合精华液| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 成人免费观看视频高清| 街头女战士在线观看网站| 国产成人精品婷婷| 老司机亚洲免费影院| 国产爽快片一区二区三区| 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品 国内视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 精品午夜福利在线看| 一二三四中文在线观看免费高清| 九九爱精品视频在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 99香蕉大伊视频| 一本色道久久久久久精品综合| 国产成人精品福利久久| 丝袜脚勾引网站| 97人妻天天添夜夜摸| 热re99久久精品国产66热6| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 97在线人人人人妻| videos熟女内射| 秋霞伦理黄片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久av网站| 在线精品无人区一区二区三| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 亚洲男人天堂网一区| kizo精华| 在线天堂中文资源库| 亚洲经典国产精华液单| 欧美日韩综合久久久久久| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产男女超爽视频在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 国产一区二区三区av在线| 男人操女人黄网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲精品乱久久久久久| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 色播在线永久视频| 在线 av 中文字幕| 午夜精品国产一区二区电影| 欧美97在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 国产一区亚洲一区在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 天堂中文最新版在线下载| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产精品二区激情视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 男男h啪啪无遮挡| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲成色77777| 亚洲国产av新网站| 国产精品熟女久久久久浪| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲av中文av极速乱| 男女国产视频网站| 婷婷成人精品国产| 国产成人精品福利久久| 亚洲国产av新网站| 国产在视频线精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 婷婷色综合大香蕉| 精品久久久精品久久久| 亚洲第一av免费看| 满18在线观看网站| 精品一区在线观看国产| 国产精品久久久久久久久免| 性高湖久久久久久久久免费观看| 久久久久视频综合| 三级国产精品片| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 久久青草综合色| 丝袜在线中文字幕| 丝袜美腿诱惑在线| 中文字幕色久视频| av女优亚洲男人天堂| 精品人妻在线不人妻| 国产不卡av网站在线观看| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲综合色网址| 下体分泌物呈黄色| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产国语露脸激情在线看| 午夜日韩欧美国产| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜av观看不卡| 在线观看免费高清a一片| 亚洲av在线观看美女高潮| 99国产综合亚洲精品| 亚洲精品乱久久久久久| 一区二区三区激情视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 99热网站在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 国产毛片在线视频| 美女国产视频在线观看| 九色亚洲精品在线播放| 伦理电影大哥的女人| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| av不卡在线播放| 美女中出高潮动态图| 国产精品 国内视频| 两个人看的免费小视频| 亚洲伊人色综图| 中文字幕人妻丝袜制服| 9色porny在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 成年美女黄网站色视频大全免费| 久久综合国产亚洲精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 18禁国产床啪视频网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 波多野结衣一区麻豆| 伦理电影免费视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 看免费成人av毛片| 伊人亚洲综合成人网| 成人黄色视频免费在线看| 国产成人免费观看mmmm| 两个人看的免费小视频| 国产精品久久久久成人av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美在线黄色| 宅男免费午夜| av.在线天堂| 日韩中字成人| 成人影院久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品久久久av美女十八| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久久精品94久久精品| 成年av动漫网址| 成人亚洲欧美一区二区av| 最新中文字幕久久久久| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩视频在线欧美| 欧美xxⅹ黑人| 七月丁香在线播放| 亚洲成人手机| 免费黄网站久久成人精品| 99re6热这里在线精品视频| 久久久亚洲精品成人影院| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 人妻人人澡人人爽人人| 中文字幕制服av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美精品国产亚洲| 中文字幕制服av| 永久网站在线| 国产av国产精品国产| 免费黄频网站在线观看国产| av在线观看视频网站免费| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 久久 成人 亚洲| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品视频女| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品久久久久久精品古装| 久久久精品免费免费高清| 国产黄频视频在线观看| 综合色丁香网| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线天堂最新版资源| 久久ye,这里只有精品| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲av国产av综合av卡| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产 一区精品| 人妻人人澡人人爽人人| 不卡视频在线观看欧美| www.精华液| 久热久热在线精品观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 青春草亚洲视频在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲精品国产av成人精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 美女大奶头黄色视频| 日本vs欧美在线观看视频| 久久99热这里只频精品6学生| 一边摸一边做爽爽视频免费| 免费在线观看完整版高清| 人成视频在线观看免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 在现免费观看毛片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 伊人亚洲综合成人网| 午夜福利视频精品| 1024香蕉在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产午夜精品一二区理论片| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲三区欧美一区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲第一青青草原| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 飞空精品影院首页| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 黄片小视频在线播放| 十分钟在线观看高清视频www| 性色av一级| 国产免费福利视频在线观看| 国产av国产精品国产| 人人澡人人妻人| 免费少妇av软件| 99香蕉大伊视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久久久精品精品| 蜜桃在线观看..| 一级毛片 在线播放| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 九草在线视频观看| 搡老乐熟女国产| 波多野结衣av一区二区av| 日本午夜av视频| 欧美精品亚洲一区二区| 成年美女黄网站色视频大全免费| 午夜91福利影院| 国产精品二区激情视频| 成人影院久久| 亚洲伊人色综图| 超色免费av| 欧美国产精品va在线观看不卡| 九草在线视频观看| 黄色怎么调成土黄色| 日韩电影二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 中文欧美无线码| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产在线免费精品| 国产成人av激情在线播放| 欧美97在线视频| 亚洲国产av影院在线观看| 国产 精品1| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 毛片一级片免费看久久久久| 免费黄网站久久成人精品| 国产在线免费精品| 久久久久久伊人网av| 久久午夜福利片| 久久人人97超碰香蕉20202| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美bdsm另类| 一级毛片我不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 中文天堂在线官网| 欧美另类一区| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产精品成人在线| 美女国产高潮福利片在线看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产免费现黄频在线看| 在线观看免费高清a一片| 午夜福利,免费看| 国产精品欧美亚洲77777| 老女人水多毛片| 国产国语露脸激情在线看| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久久网色| 国产成人精品久久久久久| 99九九在线精品视频| 久久久久国产网址| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产欧美在线一区| 一级爰片在线观看| 成人国语在线视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| 精品久久久久久电影网| 九九爱精品视频在线观看| 超色免费av| 性色avwww在线观看| 久久久精品免费免费高清| 看非洲黑人一级黄片| 水蜜桃什么品种好| 美女大奶头黄色视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲成人av在线免费| xxxhd国产人妻xxx| 看免费成人av毛片| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲男人天堂网一区| 国产视频首页在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美在线黄色| 日韩av免费高清视频| 免费黄频网站在线观看国产| 日韩三级伦理在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 中文字幕色久视频| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲av男天堂| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 两性夫妻黄色片| 秋霞在线观看毛片| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 男人操女人黄网站| 亚洲国产成人一精品久久久| 成人国产麻豆网| 18禁动态无遮挡网站| 波多野结衣一区麻豆| 妹子高潮喷水视频| 日本午夜av视频| 999精品在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 成人二区视频| 看非洲黑人一级黄片| 久久久久久人人人人人| 99香蕉大伊视频| 香蕉精品网在线| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲综合精品二区| 国产毛片在线视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 男女无遮挡免费网站观看| 大香蕉久久成人网| 麻豆乱淫一区二区| 香蕉国产在线看| 青春草国产在线视频| 亚洲av中文av极速乱| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 91国产中文字幕| 国产精品一二三区在线看| 亚洲精品自拍成人| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 久久久精品免费免费高清| 色哟哟·www| 成人午夜精彩视频在线观看| 伦理电影免费视频| 欧美+日韩+精品| 黄色怎么调成土黄色| 不卡视频在线观看欧美| av在线播放精品| 国产一区二区三区综合在线观看| 美女福利国产在线| 老司机影院毛片| videossex国产| 国产熟女欧美一区二区| 99久国产av精品国产电影| 免费观看在线日韩| 国产 精品1| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 老汉色∧v一级毛片| 日韩中字成人| 国产在线一区二区三区精| 久久久久久伊人网av| 丝袜喷水一区| 高清av免费在线| 免费黄频网站在线观看国产| 国产极品粉嫩免费观看在线| 免费黄色在线免费观看| 久久免费观看电影| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产成人精品无人区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩一区二区视频免费看| 中国三级夫妇交换| 国产淫语在线视频| 制服人妻中文乱码| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品少妇内射三级| 国产av码专区亚洲av| 99久国产av精品国产电影| 人成视频在线观看免费观看| 日韩一区二区三区影片| 看非洲黑人一级黄片| 99久久人妻综合| 国产麻豆69| 伊人久久国产一区二区| 777米奇影视久久| 久久婷婷青草| 国产综合精华液| 国产成人精品福利久久| 亚洲欧美清纯卡通| 母亲3免费完整高清在线观看 | 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久亚洲精品成人影院| 国产乱来视频区| 日本午夜av视频| 99久久人妻综合| 久久久久视频综合| 久久这里有精品视频免费| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费大片黄手机在线观看| 精品国产国语对白av| 欧美激情高清一区二区三区 | 赤兔流量卡办理| 人人澡人人妻人| 伦理电影大哥的女人| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲av日韩在线播放| 久久精品夜色国产| 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜福利视频在线观看免费| 有码 亚洲区| 男人添女人高潮全过程视频| 一本色道久久久久久精品综合| 成人二区视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一二三四在线观看免费中文在| 男女免费视频国产| av电影中文网址| 久久久国产精品麻豆| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久亚洲国产成人精品v| 伦理电影免费视频| 亚洲三级黄色毛片| 成人国语在线视频| 99久久人妻综合| 人人妻人人澡人人看| 国产亚洲一区二区精品| 国产极品天堂在线| 少妇 在线观看| 国产精品 国内视频| a 毛片基地| 国产成人精品无人区| 国产精品久久久久成人av| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 午夜免费鲁丝| 一区福利在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 人妻系列 视频| 男的添女的下面高潮视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产一区二区三区综合在线观看| 两个人看的免费小视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品免费大片| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久热在线av| 欧美日本中文国产一区发布| 久久国内精品自在自线图片| 欧美日韩成人在线一区二区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲内射少妇av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美97在线视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 91成人精品电影| 男女国产视频网站| 看十八女毛片水多多多| 日本欧美国产在线视频| av在线观看视频网站免费| 亚洲图色成人| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美日本中文国产一区发布| 日本欧美国产在线视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产亚洲精品第一综合不卡| av天堂久久9| 亚洲av电影在线进入| 人妻少妇偷人精品九色| 99热国产这里只有精品6| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 黄色配什么色好看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文欧美无线码| 精品亚洲成国产av| 亚洲国产精品一区三区| 国产有黄有色有爽视频| 韩国av在线不卡| 精品一区二区免费观看| 成人午夜精彩视频在线观看| 热re99久久国产66热| 母亲3免费完整高清在线观看 | 久久久亚洲精品成人影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品免费大片| av有码第一页| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 老汉色∧v一级毛片| 日韩中文字幕视频在线看片| 99国产精品免费福利视频| 最近手机中文字幕大全| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久99一区二区三区| 丝袜在线中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲在久久综合| 在现免费观看毛片| av福利片在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 美女福利国产在线| 麻豆av在线久日| 亚洲美女搞黄在线观看| av一本久久久久| 亚洲av电影在线进入| 亚洲精品成人av观看孕妇| 精品国产一区二区久久| 1024香蕉在线观看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 一级片免费观看大全| 亚洲精品第二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久久久久久精品精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 成年av动漫网址| 91久久精品国产一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品国产三级国产专区5o| 成人国产av品久久久| 中文字幕人妻丝袜制服| 老汉色∧v一级毛片| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 婷婷色综合大香蕉| 精品人妻在线不人妻| videossex国产| 91国产中文字幕| 国产xxxxx性猛交| av国产精品久久久久影院| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 乱人伦中国视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 天堂中文最新版在线下载| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲成色77777| 一区二区三区激情视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 大香蕉久久网| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲视频免费观看视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产午夜精品一二区理论片| 婷婷色综合www| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲人成网站在线观看播放| 丰满少妇做爰视频| 制服诱惑二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 国产成人精品福利久久| 免费黄色在线免费观看| 各种免费的搞黄视频| 大香蕉久久网| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 免费日韩欧美在线观看| 成人国产麻豆网| 欧美激情 高清一区二区三区| www日本在线高清视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久av网站| 欧美日韩精品网址| 十分钟在线观看高清视频www| 久久久久国产网址| 韩国av在线不卡| 国产成人精品婷婷| 久久国产精品大桥未久av| 国产精品久久久久久精品古装| 夫妻午夜视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产精品久久久久久久久免| 精品一区在线观看国产| 国产成人精品久久久久久|