2016年遼寧規(guī)模化豬場(chǎng)病毒性腹瀉流行狀況調(diào)查分析

關(guān) 淼，趙曉彤，周晨陽(yáng)，顧貴波，楊本勇，李井春，趙鳳菊，楊洺陽(yáng)，申貫?zāi)?，?蓉，王宏燕，張 健，梁 喬

(遼寧省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧省動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究院，遼寧沈陽(yáng) 110164)

豬流行性腹瀉(Porcine epidemic diarrhea，PED)、豬傳染性胃腸炎(Porcine transmissible gastroenteritis，TGE)和豬輪狀病毒(Porcine rotavirus，PRV)感染分別是豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)、豬傳染性胃腸炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus，TGEV)和豬A群輪狀病毒(Porcine rotavirus group A，PRV-A)引起的以豬嘔吐、腹瀉、脫水為特征的傳染病，具有較高的致死率，給生豬養(yǎng)殖帶來(lái)了重大的經(jīng)濟(jì)損失[1-6]。感染上述病毒后患豬臨床表現(xiàn)極為相似，豬群中一旦出現(xiàn)豬發(fā)病，很快就會(huì)波及全群，尤其在感染仔豬以后的高發(fā)病率和高死亡率，給豬場(chǎng)帶來(lái)毀滅性打擊。同時(shí)，還存在多種病原混合感染，成為一個(gè)引人注目的世界性的新問(wèn)題。遼寧省是全國(guó)養(yǎng)豬大省，豬腹瀉病在遼寧省豬群出現(xiàn)新的流行特點(diǎn)，散養(yǎng)戶、養(yǎng)殖專業(yè)戶及小規(guī)模飼養(yǎng)場(chǎng)流行時(shí)間短，而大中型規(guī)模場(chǎng)流行時(shí)間較長(zhǎng)，新生仔豬發(fā)病率和病死率極高。因此，控制豬腹瀉病成為保證養(yǎng)豬業(yè)穩(wěn)定發(fā)展的關(guān)鍵。本研究通過(guò)對(duì)遼寧省豬群腹瀉疫病的流行狀況、流行特點(diǎn)等進(jìn)行調(diào)查分析，掌握本地區(qū)疫病流行態(tài)勢(shì)，為豬群腹瀉疾病的科學(xué)防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

核酸提取試劑盒、一步法RT-PCR試劑盒、DNA凝膠回收試劑盒、pMD18-T載體、DNA marker等均購(gòu)自寶生物工程(大連)有限公司；PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；熒光定量PCR儀(7500 Fast)購(gòu)自美國(guó)ABI公司；PCR儀(C1000)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；電泳儀(DYY-6C)購(gòu)自北京六一儀器廠；凝膠成像系統(tǒng)(Gel Doc XR+)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.2 方法

1.2.1 調(diào)查對(duì)象、樣品采集及處理 根據(jù)各地生豬飼養(yǎng)量的不同，按照隨機(jī)抽樣的原則，分別于2016年3、6、9、11月份，在遼寧省每個(gè)地市(縣)調(diào)查規(guī)模豬場(chǎng)1個(gè)～2個(gè)，共調(diào)查全省14個(gè)地市58個(gè)縣(市)的規(guī)模豬場(chǎng)70個(gè)。每個(gè)豬場(chǎng)用棉簽采集10份不同窩的仔豬糞便樣品，置于15 mL離心管中，在-20℃保存，共計(jì)700份糞便樣品。

1.2.2 問(wèn)卷與現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查 設(shè)計(jì)了調(diào)查問(wèn)卷，內(nèi)容包括：養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)名稱、聯(lián)系人、地址、電話等基本信息；存欄量、飼養(yǎng)方式、仔豬來(lái)源、仔豬斷奶日齡等基本情況；防疫設(shè)施、圈舍通風(fēng)情況、消毒情況、除糞情況、免疫情況等防疫狀況、病死動(dòng)物無(wú)害化處理方式；腹瀉發(fā)病豬群、發(fā)病率、死亡率、腹瀉發(fā)病原因、是否進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷等腹瀉發(fā)病及死亡情況。每個(gè)采樣場(chǎng)(戶)填寫1份調(diào)查表。

1.2.3 PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè) 將采集到的仔豬糞便按照1∶5的比例使用PBS進(jìn)行稀釋，顛倒混勻后靜止5 min，吸上清備用。按照RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)要求提取樣品總RNA。之后按照 PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)要求對(duì)700份糞便樣品進(jìn)行豬腹瀉3種疫病的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)。

1.2.4 PEDV S1基因擴(kuò)增及序列測(cè)定 參照GenBank國(guó)內(nèi)外已注冊(cè)的PEDV病毒株的S1基因序列以及外文文獻(xiàn)，合成1對(duì)引物，上游引物序列為：5′-ATGTTGTGTTAGGCTTGTTG-3′，下游引物序列為：5′-ACTAACAGGCGTGTTGTAA-3′，引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。選取經(jīng)PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)后，PEDV陽(yáng)性結(jié)果中Ct值較小的陽(yáng)性糞便樣本，按照RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)重新提取樣本總RNA，并進(jìn)行PEDV S1基因全序列RT-PCR擴(kuò)增。RT-PCR反應(yīng)體系為50℃ 45 min；94℃ 2 min；94℃ 30 s、50℃ 30 s、72℃ 2.5 min，共34個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min。產(chǎn)物經(jīng)10 g/L瓊脂凝膠電泳鑒定、純化后克隆到pMD-18T載體后，陽(yáng)性質(zhì)粒由寶生物工程(大連)有限公司測(cè)序。

1.2.5 PEDV S1基因核酸序列分析 用DNAStar軟件對(duì)測(cè)定的PEDV S1基因序列進(jìn)行拼接和編輯，應(yīng)用MegAlign軟件對(duì)測(cè)定的核苷酸序列與從GenBank中選取國(guó)內(nèi)外的16個(gè)S1基因參考序列進(jìn)行同源性比較，并繪制遺傳進(jìn)化樹(shù)，進(jìn)行系統(tǒng)多樣性及遺傳變異分析。

2 結(jié)果

2.1 問(wèn)卷調(diào)查豬腹瀉發(fā)生情況

共計(jì)調(diào)查70個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，其中發(fā)生過(guò)腹瀉豬場(chǎng)41個(gè)，占58.6%(41/70)，未發(fā)生過(guò)腹瀉豬場(chǎng)29個(gè)，占41.4%(29/70)。進(jìn)行過(guò)實(shí)驗(yàn)室診斷的有18個(gè)場(chǎng)(戶)，占25.7%(18/70)。發(fā)病原因中，大腸埃希菌感染占發(fā)病場(chǎng)(戶)的56.1%(23/41)；PEDV占發(fā)病場(chǎng)(戶)的26.8%(11/41)；TGEV占22%(9/41)；原因不清楚的占34.1%(14/41)；其中其他原因有晝夜溫差大，奶水不足，斷奶應(yīng)激等。使用抗生素治療效果明顯的14個(gè)場(chǎng)(戶)，占發(fā)病場(chǎng)(戶)的34.1%(14/41)；效果一般的20個(gè)場(chǎng)(戶)，占48.8%(20/41)；治療無(wú)效的7個(gè)場(chǎng)(戶)，占17.1%(7/41)。發(fā)生腹瀉的豬場(chǎng)里，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增加，腹瀉發(fā)生的比例逐漸下降，但存欄量3 000頭～4 999頭的豬場(chǎng)發(fā)生腹瀉的比例比存欄量1 000頭～2 999頭的豬場(chǎng)高。其中存欄量在3 000頭～4 999頭的腹瀉流行率最高為78.9%，存欄量超過(guò)10 000頭的養(yǎng)豬場(chǎng)的腹瀉流行率為50%(表1)。

表1 不同規(guī)模豬場(chǎng)腹瀉發(fā)生情況

2.2 豬腹瀉發(fā)生的群間分布情況

本次問(wèn)卷調(diào)查中發(fā)生腹瀉的場(chǎng)(戶)均有哺乳仔豬發(fā)生腹瀉癥狀，發(fā)生率為100%(41/41)，哺乳仔豬共計(jì)83 314頭，發(fā)病10 142頭，發(fā)病率為12.2%，死亡3 786頭，死亡率為4.5%；調(diào)查發(fā)生腹瀉的場(chǎng)(戶)保育仔豬發(fā)生腹瀉比率為39%(16/41)，但是發(fā)生頭數(shù)少，發(fā)病率為3.5%，死亡率為1%(表2)；其他日齡的豬無(wú)發(fā)生或表現(xiàn)為一過(guò)性癥狀。表明豬腹瀉主要集中發(fā)生于哺乳仔豬，保育仔豬次之，在飼養(yǎng)生產(chǎn)中，應(yīng)該注意哺乳仔豬圈舍的衛(wèi)生及保溫情況，以減少哺乳仔豬腹瀉的發(fā)生。

2.3 哺乳仔豬腹瀉發(fā)生的時(shí)間分布情況

按照問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果，針對(duì)哺乳仔豬進(jìn)行時(shí)間分布上的數(shù)據(jù)分析，顯示在2016年中，11月份的發(fā)病率最高，為35.9%，6月份發(fā)病率最低，為1.4%(表3)。結(jié)果表明仔豬腹瀉一年四季均可發(fā)生，但不同季度差異較大，寒冷的冬春季節(jié)發(fā)病率最高，應(yīng)在冬春交際加強(qiáng)哺乳仔豬的飼養(yǎng)管理。

表2 哺乳仔豬和保育仔豬腹瀉發(fā)病及死亡情況

表3 2016年4個(gè)季度哺乳仔豬腹瀉發(fā)病及死亡情況

2.4 哺乳仔豬腹瀉發(fā)生的空間分布情況

對(duì)遼寧省14個(gè)市按照問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果進(jìn)行哺乳仔豬發(fā)生情況分析，其中，盤錦、葫蘆島、營(yíng)口地區(qū)的發(fā)病率和死亡率最高，發(fā)病率分別為44.9%、29.9%和29.9%，死亡率分別為8.8%、21.2%和16.3%；而本溪、鐵嶺、阜新的發(fā)病率最低，分別為0.7%、2.4%和2.6%，死亡率分別為0.4%、0.2%和0.4%(表4)。將遼寧地區(qū)按照地理位置劃分為4個(gè)區(qū)域，問(wèn)卷調(diào)查結(jié)果按照區(qū)域進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(表5)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，發(fā)病率遼西最高(24.9%)，遼東最低(2.8%)；死亡率遼西最高(7.3%)，遼東最低(0.6%)。表明不同地區(qū)仔豬腹瀉病的發(fā)病率差異較大，在制定全省免疫策略時(shí)應(yīng)有所側(cè)重，針對(duì)不同地區(qū)制定不同的防疫策略，在日常監(jiān)測(cè)工作中對(duì)仔豬腹瀉發(fā)生率高的地區(qū)應(yīng)加強(qiáng)檢測(cè)。

表4 遼寧省不同市哺乳仔豬腹瀉發(fā)病及死亡情況

表5 遼寧省不同區(qū)域哺乳仔豬腹瀉發(fā)病及死亡情況Table 5 Morbidity and mortality of diarrhea of suckling piglets in different areas of Liaoning province

2.5 PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

對(duì)70個(gè)場(chǎng)(戶)共計(jì)700份糞便樣品進(jìn)行PEDV、TGEV、PRV-A三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果2016年4個(gè)季度中只有第一季度檢測(cè)到豬腹瀉病毒核酸陽(yáng)性，其余3個(gè)季度檢測(cè)結(jié)果均為陰性。2016年第一季度中采集了25個(gè)場(chǎng)(戶)，每個(gè)場(chǎng)(戶)10份，共計(jì)250份糞便樣品，熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。由表6數(shù)據(jù)可知，PEDV樣品陽(yáng)性率為36%(27/75)，場(chǎng)陽(yáng)性率為48%(12/25)；PRV-A樣品陽(yáng)性率為41.3%(31/75)，場(chǎng)陽(yáng)性率為56%(14/25)；TGEV均未檢出。表明在遼寧省范圍內(nèi)養(yǎng)豬場(chǎng)(戶)仔豬病毒性腹瀉主要由PEDV和PRV-A引起，在臨床上要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷以確定致病原因，對(duì)癥治療，并有針對(duì)性的制定防疫策略。

2.7 PEDV S1基因核酸序列分析

將2016年測(cè)定的12株P(guān)EDV S1基因序列與GenBank中登錄的16株國(guó)內(nèi)外PEDV S1基因序列以及3株本實(shí)驗(yàn)室2015年測(cè)定的PEDV S1基因序列進(jìn)行核酸序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，本研究中測(cè)定的2016年遼寧地區(qū)12株P(guān)EDV的S1基因4株全長(zhǎng)為2376 bp，8株為2367 bp。

根據(jù)PEDV S1基因同源性分析，12株2016年遼寧PEDV分離株之間的同源性為92.6%～100%。其中遼東地區(qū)PEDV 3株分離株之間同源性為93.7%～99.9%，遼北地區(qū)PEDV 3株分離株之間同源性為97.5%～99.3%，遼南地區(qū)PEDV 3株分離株之間同源性為99.6%～100%，遼西地區(qū)PEDV 3株分離株之間同源性為93%～97.8%。分離株2016LNeast2與2016LNwest3同源性最低(92.6%)，2016LNsouth2與2016LNsouth3同源性最高(100%)。

12株2016年遼寧PEDV分離株與歐洲株CV777的同源性為91.3%～94.7%，與韓國(guó)株KNU-0802的同源性為91.2%～95.8%，與日本株83P-5同源性為91%～94.9%，與中國(guó)株LZC、CH8以及HuN株的同源性分別為90.5%～93.9%、92.5%～97.4%和92.1%～97.9%。

表6 2016年第一季度豬腹瀉三重實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

2.6 PEDV S1基因的擴(kuò)增結(jié)果

RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂凝膠電泳分析顯示，擴(kuò)增出12條約2 300 bp的特異性片段，與預(yù)期大小相符(圖1)。并按照供試病毒樣本采集年份和區(qū)域?qū)⒎謩e命名為2016LNeast1、2016LNeast2、2016LNeast3；2016LNwest1、2016LNwest2、2016LNwest3；2016LNsouth1、2016LNsouth2、2016LNsouth3；2016LNnouth1、2016LNnouth2、2016LNnouth3。

12株2016年遼寧PEDV分離株與3株2015年遼寧PEDV分離株之間的同源性為93.1%～99.6%，其中2015-2株與2016LNeast2株、2015-3株與2016LNwest1的同源性均為93.1%，2015-1株與2016LNsouth1株的同源性最高，為99.6%。

M.DNA標(biāo)準(zhǔn)DL 2 000；1～12.樣品S1基因；13.陰性對(duì)照M.DNA Marker DL 2 000; 1-12.S1 gene of samples; 13.Negative control

2.8 PEDV S1基因序列遺傳進(jìn)化樹(shù)分析

用MegAlign軟件將12株P(guān)EDV S1基因序列與GenBank中已公布的國(guó)內(nèi)外參考序列進(jìn)行核酸序列比對(duì)，并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)(圖2)。通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析顯示，PEDV可以分為3個(gè)亞群，除了2016LNeast2和2016LNwest1病毒株之外的其他10株P(guān)EDV遼寧分離株屬于第3亞群，同屬該亞群的還有6株中國(guó)其他地區(qū)PEDV分離株SH、YS、SD-QD-2015、CHGD-01、HuN、CH8，2株韓國(guó)PEDV分離株CNU-091222-01、KNU-0802，以及2015年3株遼寧PEDV分離株2015-1、2015-2和2015-3。其中2016LNnorth1、2，2016LNsouth1、2、3以及2016LNwest3與2015年3株親緣關(guān)系較近，處于同一分支；2016LNwest2與SH、YS親緣關(guān)系較近，2016LNeast1、3與SD-QD-2015親緣關(guān)系較近，2016LNnorth3與CH8親緣關(guān)系較近。2016LNeast2與4株中國(guó)其他地區(qū)PEDV分離株CH-JLGZL-2011、JS-2004-2、DX、LJB-03屬于第2亞群。歐洲株CV777，2006年中國(guó)LZC株，韓國(guó)DR13株以及日本83P-5組成第1亞群。而2016LNwest1雖然與第1亞群，第2亞群處于同一大分支，但是又獨(dú)立成一亞支。結(jié)果表明在遼寧地區(qū)不同時(shí)期的不同地區(qū)，有處以同一分支的優(yōu)勢(shì)毒株流行，又有不同進(jìn)化來(lái)源分支的其他毒株存在，同時(shí)可能存在基因變異的新毒株。

3 討論

本研究調(diào)查了遼寧省14個(gè)地市58個(gè)縣(市)的70個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)的腹瀉流行情況，通過(guò)填寫調(diào)查問(wèn)卷和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析，為遼寧省腹瀉的診斷、免疫策略的制定以及防制提供參考和理論依據(jù)。問(wèn)卷調(diào)查中調(diào)查的70個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)，發(fā)生過(guò)腹瀉場(chǎng)41個(gè)，場(chǎng)陽(yáng)性率為58.6%；哺乳仔豬存欄83314頭，發(fā)病率為12.2%，死亡率為4.5%。通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，在第一季度的25個(gè)場(chǎng)(戶)75份樣品中，PEDV樣品陽(yáng)性率為36%(27/75)，場(chǎng)陽(yáng)性率為48%(12/25)；PRV-A樣品陽(yáng)性率為41.3%(31/75)，場(chǎng)陽(yáng)性率為56%(14/25)；未檢出TGEV。說(shuō)明在遼寧省范圍內(nèi)PEDV的場(chǎng)陽(yáng)性率較高，應(yīng)引起養(yǎng)殖戶的注意，注重場(chǎng)的腹瀉凈化。

引起腹瀉的原因是多種多樣的，在問(wèn)卷調(diào)查中，致病性大腸埃希菌感染也是引起腹瀉發(fā)生的重要原因。因?yàn)楹芏囵B(yǎng)殖場(chǎng)(戶)并未進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷進(jìn)行最后確診，所以具體病因無(wú)法確定，PEDV可能與大腸埃希菌、PRV-A等引起腹瀉的病原混合感染引起腹瀉。豬群發(fā)生腹瀉癥狀以后應(yīng)該及時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷以明確感染病原，針對(duì)致病原因制定治療方案，降低因?yàn)楦篂a而引起的經(jīng)濟(jì)損失。

通過(guò)本研究調(diào)查，遼寧省不同地區(qū)的豬養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)均有不同程度的PEDV感染，多發(fā)生于第一季度，冬春交接之際，不同地區(qū)和時(shí)間PEDV、PRV-A的感染率不同，表明低溫是激發(fā)腹瀉發(fā)生的主要因素之一。在冬春氣溫較低，溫差較大的季節(jié)，應(yīng)該注意豬舍保暖，調(diào)節(jié)溫濕度，降低因冷熱溫差而引起的應(yīng)激反應(yīng)。豬場(chǎng)的衛(wèi)生環(huán)境對(duì)腹瀉的發(fā)生也有至關(guān)重要的影響，改善養(yǎng)殖環(huán)境，及時(shí)清理尿污糞便，加強(qiáng)消毒，保持豬舍干凈衛(wèi)生。此外，提高仔豬免疫力，飼料中添加微生態(tài)制劑，都有利于降低腹瀉類疾病的發(fā)生。

圖2 PEDV S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

通過(guò)多重?zé)晒釸T-PCR檢測(cè)，遼寧省主要流行的是PEDV和PRV-A，其中PRV-A樣品陽(yáng)性率及場(chǎng)陽(yáng)性率都略高于PEDV。劉云波等[7]2013年對(duì)全國(guó)13個(gè)省1282份臨床腹瀉樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，PEDV、TGEV及PRV-A的陽(yáng)性率分別為24.49%、2.65%和3.20%，表明PEDV仍然是臨床引起仔豬腹瀉的主要病原。同時(shí)，本研究結(jié)果及全國(guó)調(diào)查結(jié)果顯示，PRV-A感染率出現(xiàn)了明顯的上升趨勢(shì)，需要在臨床上注意鑒別診斷，在治療上有針對(duì)性的制定治療方案，同時(shí)加強(qiáng)PRV-A的防疫工作。

隨著養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展以及集約化養(yǎng)殖方式的普及，近年來(lái)在冬春交際PED多次發(fā)生流行。雖然PEDV首次在歐洲發(fā)現(xiàn)，但是它已經(jīng)導(dǎo)致多個(gè)亞洲養(yǎng)豬國(guó)家的重大經(jīng)濟(jì)損失，包括韓國(guó)、中國(guó)、日本、越南和菲律賓。并且從2013年4月以來(lái)，美國(guó)、加拿大和墨西哥都有PEDV大流行的報(bào)道[8]。而隨著PEDV的流行，該病毒也在發(fā)生著變異，Yang D K等[9]通過(guò)對(duì)2014年在韓國(guó)發(fā)生的PED進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，一種新的PEDV變異株在韓國(guó)流行，與1998年的SM98分離株的同源性為93.08%。杜曉莉[10]通過(guò)對(duì)2010-2013年浙江省的臨床腹瀉樣品進(jìn)行研究表明，PEDV臨床檢出率由2010年的42.86%升高到2013年的70%以上，臨床檢測(cè)毒株的S1基因與傳統(tǒng)毒株CV777的S基因以及中國(guó)最早檢測(cè)的基因序列親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)可以看到，在遼寧地區(qū)不同時(shí)期的不同地區(qū)，有處以同一分支的毒株流行，說(shuō)明這一分支的毒株為遼寧地區(qū)的優(yōu)勢(shì)毒株。同時(shí)又有不同分支的其他毒株存在，說(shuō)明它們具有不同的進(jìn)化來(lái)源。通過(guò)核酸序列比較發(fā)現(xiàn)第1亞群和第2亞群具有相似的基因變化和缺失，同時(shí)在不同位置有不同的堿基變化，而2016LNwest1與這兩個(gè)亞群的基因變化類似，處于同一大的分支，但是它在第1596位堿基由T→C，在第1601位以及第1634位發(fā)生了堿基缺失，因此單獨(dú)列一分支。說(shuō)明PEDV在遼寧地區(qū)的發(fā)展過(guò)程中，基因發(fā)生一定的變化。

本研究通過(guò)對(duì)2016年遼寧地區(qū)規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行豬病毒性腹瀉流行情況及PEDV分子流行病學(xué)的深入調(diào)查和研究，可以了解遼寧地區(qū)豬病毒性腹瀉的流行狀況，確定主要流行病毒，明確主要流行病毒的優(yōu)勢(shì)毒株及遺傳演化規(guī)律，為遼寧地區(qū)豬病毒性腹瀉類疫病高效疫苗的研發(fā)奠定基礎(chǔ)，為遼寧地區(qū)豬腹瀉的免疫實(shí)施方案的制定提供理論依據(jù)，為PEDV的科學(xué)防控提供可靠的技術(shù)保障。