高危型HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查提高宮頸病變檢出率的研究

馬娜　張艷　喬娜

[摘要] 目的 研究高危型人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查提高宮頸病變檢出率的應(yīng)用價(jià)值。 方法 選取2016年1月～2017年12月于延安市人民醫(yī)院接受宮頸病變檢查的249例患者為研究對(duì)象，其中宮頸炎癥（170例）、宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅰ（CINⅠ）（32例）、CINⅡ（28例）、CINⅢ（14例）、宮頸癌（5例）。對(duì)所有患者均進(jìn)行高危型HPV E6/E7 mRNA檢查、液基細(xì)胞學(xué)檢查以及組織病理活檢。并以病理活檢結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，比較不同檢查方式的檢出率、靈敏度、特異性。 結(jié)果 高危型HPV E6/E7 mRNA檢查對(duì)宮頸炎癥、CIN的檢出率分別為83.53%、71.62%，均明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查的68.24%、56.76%，又明顯低于聯(lián)合檢查的94.71%、90.54%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率為68.75%，明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查的43.75%，又明顯低于聯(lián)合檢查的90.63%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷癌前病變的靈敏度分別為76.60%、68.09%，均明顯低于聯(lián)合檢查的91.49%；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性為81.19%，明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查的64.36%，又明顯低于聯(lián)合檢查的94.06%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 高危型HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查可顯著提高宮頸病變檢出率，具有較高的臨床診斷價(jià)值，推廣應(yīng)用價(jià)值較好。

[關(guān)鍵詞] 宮頸病變；高危型人乳頭瘤病毒；液基細(xì)胞學(xué)檢查；宮頸上皮內(nèi)瘤變

[中圖分類號(hào)] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）11（b）-0080-04

[Abstract] Objective To study the application value of the high-risk human papillomavirus （HPV） E6/E7 mRNA combined with liquid based cytology in the improvement of detection rate of cervical lesion. Methods From January 2016 to December 2017， 249 patients with cervical lesions in Yan′an People′s Hospital were selected as the subjects. There were 170 cases of cervical inflammation， 32 cases of cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ （CIN Ⅰ）， 28 cases of CIN Ⅱ， 14 cases of CIN Ⅲ， 5 cases of cervical cancer. The detection of high-risk HPV E6/E7 mRNA， liquid based cytology and histopathological biopsy were carried among all patients. The detection rate， sensitivity， and specificity of different examination methods were compared with the results of pathological biopsy. Results The detection rate of high risk type HPV E6/E7 mRNA examination in the diagnosis of cervical inflammation， CIN was 83.53%， 71.62%， which was significantly higher than liquid based cytology of 68.24%， 56.76%， and was significantly lower than the joint detection of 94.71% and 90.54% respectively， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. The detection rate of high-risk type HPV E6/E7 mRNA examination in the diagnosis of CIN Ⅰwas 68.75%， which was significantly higher than the liquid based cytology of 43.75%， the joint detection was significantly lower than the 90.63%， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. The sensitivity of the high-risk HPV E6/E7 mRNA examination and the diagnosis of precancerous lesions was 76.60% and 68.09% respectively， which was significantly lower than 91.49% of the joint detection. The specificity of high-risk HPV E6/E7 mRNA in diagnosing precancerous lesions was 81.19%， which was significantly higher than the liquid based cytology of 64.36%， was significantly lower than the joint detection of 94.06%， the differences between groups were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion The high risk HPV E6/E7 mRNA combined with cytological examination can significantly improve the detection rate of cervical lesions， which has higher clinical diagnostic value， and worth popularizing.

[Key words] Cervical lesions； Human papillomavirus of high-risk type； Cytological examination of liquid base； Cervical intraepithelial neoplasia

宮頸癌是全球范圍內(nèi)較為常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病死率在女性惡性腫瘤疾病中位居第四，嚴(yán)重威脅著女性人群的生命健康安全[1]。因此，對(duì)宮頸癌患者進(jìn)行早期有效的診斷及干預(yù)顯得尤為重要。近年來，隨著相關(guān)研究的不斷深入，有研究顯示，高危型人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）高負(fù)荷量與持續(xù)性感染在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[2]。另有研究報(bào)道表明，高危型HPV的E6與E7基因所表達(dá)的蛋白具有干擾細(xì)胞周期、凋亡以及染色體穩(wěn)定的作用，從而會(huì)促使細(xì)胞永生化，進(jìn)一步引發(fā)宮頸癌[3]。鑒于此，本文通過研究高危型HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查提高宮頸病變檢出率的應(yīng)用價(jià)值并予以分析，旨在為臨床早期診斷宮頸癌提供一種有效手段，進(jìn)一步為臨床治療方案的制訂提供參考依據(jù)，現(xiàn)作以下報(bào)道：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月～2017年12月于延安市人民醫(yī)院接受宮頸病變檢查的249例患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：①年齡>18歲；②性生活史≥2年；③非月經(jīng)期；④臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①入院前3 d接受過陰道用藥或陰道沖洗或進(jìn)行性生活者；②既往有HPV感染史者；③有宮頸手術(shù)史者；④存在神經(jīng)系統(tǒng)疾病或交流溝通障礙者。年齡20～77歲，平均（45.62±11.38）歲。根據(jù)疾病類型不同分為宮頸炎癥170例，宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）74例，其中根據(jù)CIN分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：CINⅠ32例、CINⅡ28例、CINⅢ14例，宮頸癌5例。所有患者均簽署了知情同意書，醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)已批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 高危型HPV E6/E7 mRNA檢測(cè) 采用專門的HPV取樣器采集患者宮頸分泌物樣本，并將其置入15 mL的離心管中，以3000 r/min（半徑為80 mm）連續(xù)離心5 min，去除上清液，采用2 mL的蒸餾水進(jìn)行清洗后再次離心處理，去除上清液，隨后加入300 μL的裂解劑蛋白酶K，放置于65℃條件下靜置30 min，取出后采集上清液，應(yīng)用高危型HPV E6/E7 mRNA檢查試劑盒（購自美國Hologic公司）予以檢測(cè)，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。通過計(jì)算機(jī)軟件自動(dòng)讀取高危型HPV E6/E7 mRNA拷貝數(shù)值，結(jié)果<1 copy/mL即為陰性，≥1 copy/mL即為陽性。

1.2.2 液基細(xì)胞學(xué)檢查 采用液基細(xì)胞學(xué)專用取材刷徹底插入宮頸口，同一方向旋轉(zhuǎn)5周，采集宮頸口以及宮頸管的脫落上皮下包，并將其置入含有PreservCyt保存液的小瓶內(nèi)。予以制片、固定、染色處理后，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的專業(yè)病理科醫(yī)師采用雙盲法進(jìn)行判讀，當(dāng)判讀結(jié)果存在差異時(shí)由2名醫(yī)師討論確定最終結(jié)果。相關(guān)儀器以及試劑均購自上海裕隆生物科技有限公司。

1.3 觀察指標(biāo)

比較不同診斷方式對(duì)宮頸病變的檢出率，不同診斷方式對(duì)CIN的檢出率。以病理活檢為金標(biāo)準(zhǔn)，分析不同診斷方式診斷癌前病變的靈敏度、特異性情況。靈敏度=真陽性人數(shù)/（真陽性人數(shù)+假陰性人數(shù)）×100%。特異性=真陰性人數(shù)/（真陰性人數(shù)+假陽性人數(shù)）×100%。

1.4 CIN分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

①CINⅠ：細(xì)胞異型性較輕，排列不整齊但仍保持極性，且異常增殖細(xì)胞僅限于上皮層下1/3；②CINⅡ：細(xì)胞異型性較為明顯，且排列紊亂，異常增殖細(xì)胞占據(jù)上皮層下2/3；③CINⅢ：異常增至的細(xì)胞擴(kuò)展至上皮層的2/3或全層。將CINⅡ及以上病變記為癌前病變[5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同診斷方式對(duì)宮頸病變的檢出率比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸炎癥、CIN的檢出率明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，又明顯低于聯(lián)合檢查，聯(lián)合檢查對(duì)宮頸炎癥、CIN的檢出率明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 不同診斷方式對(duì)CIN的檢出率比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，又明顯低于聯(lián)合檢查，聯(lián)合檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于高危型HPV E6/E7 mRNA檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表2。

2.3 不同診斷方式診斷癌前病變的靈敏度、特異性情況比較

高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷癌前病變的靈敏度及特異度均明顯低于聯(lián)合檢查；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表3。

3 討論

HPV感染屬于宮頸病變的重要原因之一，且有研究報(bào)道顯示，絕大部分的宮頸癌患者均存在HPV感染[6-9]。然而，從HPV感染發(fā)展至宮頸癌需經(jīng)過較長的時(shí)間，HPV感染后在體內(nèi)具有較長的潛伏期，90%的患者可通過自身免疫功能予以清除，然而仍有少部分高危持續(xù)感染者會(huì)進(jìn)展為宮頸癌[10-11]。目前，美國以及其他歐洲國家以將高危型HPV DNA檢測(cè)聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查作為宮頸癌初篩的基本方案[12-13]。然而從感染HPV開始直至癌前病變，甚至是浸潤癌尚且有數(shù)年的時(shí)間，且癌前病變存在一定的進(jìn)展性以及可逆轉(zhuǎn)性。價(jià)值大部分HPV感染是無癥狀與暫時(shí)性的，絕大部分新發(fā)感染者可在短時(shí)間內(nèi)消退。因此，HPV DNA雖有較高的敏感性，但特異性較低，從而可能導(dǎo)致過多的無意義感染檢出，進(jìn)一步加重患者的經(jīng)濟(jì)以及心理負(fù)擔(dān)[14-15]。而HPV mRNA檢測(cè)可檢測(cè)到存在轉(zhuǎn)錄活性的病毒，有效提高了特異性。而液基細(xì)胞學(xué)檢查廣泛應(yīng)用于宮頸癌的篩查中，在一定程度上提高了宮頸上皮內(nèi)瘤變的靈敏度，然而該檢查方式存在一定的假陽性率[16-17]。由此，筆者通過研究高危型HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查提高宮頸病變檢出率的應(yīng)用價(jià)值，以期為宮頸癌的篩查提供一種有效手段。

本研究發(fā)現(xiàn)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸炎癥、CIN的檢出率均明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，又明顯低于聯(lián)合檢查，與此同時(shí)，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷CINⅠ的檢出率明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，又明顯低于聯(lián)合檢查，這符合葉麗君等[18-20]的研究報(bào)道，說明了HPV E6/E7 mRNA檢查診斷宮頸病變的檢出率較高，且聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查可明顯提高檢出率。究其原因，在高危型HPV持續(xù)感染引發(fā)宮頸癌的過程中，病毒DNA發(fā)生整合，從而使得病毒基因E2區(qū)開放讀碼框出現(xiàn)損害，進(jìn)一步促使病毒癌基因E6與E7的上流調(diào)節(jié)出現(xiàn)異常，而E6/E7致癌基因的表達(dá)可通過檢測(cè)其mRNA轉(zhuǎn)錄水平實(shí)現(xiàn)。因此，高危型HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)可確診高危持續(xù)感染者，并為宮頸癌的篩查和疾病預(yù)測(cè)提供可靠信息。且與液基細(xì)胞學(xué)檢查具有一定的互補(bǔ)作用，從而提高了臨床宮頸病變的檢出率。此外，高危型HPV E6/E7 mRNA檢查與液基細(xì)胞學(xué)檢查診斷癌前病變的靈敏度均明顯低于聯(lián)合檢查；高危型HPV E6/E7 mRNA檢查診斷癌前病變的特異性明顯高于液基細(xì)胞學(xué)檢查，又明顯低于聯(lián)合檢查，這提示了HPV E6/E7 mRNA檢查聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查有效提高癌前病變的診斷敏感度、特異性。分析原因，HPV E6/E7屬于病毒癌基因，在抑癌基因p53以及Rb的降解過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，且在病毒基因整合至宿主的DNA過程中，E2片段缺失導(dǎo)致HPV早期基因HPV E6/E7 mRNA表達(dá)。另有研究報(bào)道顯示，HPV E6/E7 mRNA會(huì)對(duì)正常細(xì)胞周期產(chǎn)生一定的干擾作用，從而使得細(xì)胞基因組穩(wěn)定性降低，進(jìn)一步導(dǎo)致正常的宿主細(xì)胞朝惡性方向轉(zhuǎn)化[21-23]。因此，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)可準(zhǔn)確反映疾病發(fā)展情況。在與液基細(xì)胞學(xué)檢查聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，可有效降低其假陽性率，提高了臨床診斷價(jià)值。

綜上所述，高危型HPV E6/E7 mRNA聯(lián)合液基細(xì)胞學(xué)檢查可顯著提高宮頸病變檢出率，具有較高的臨床診斷價(jià)值，值得臨床推廣應(yīng)用。然而，本研究尚且存在樣本量較少的缺陷，可能導(dǎo)致研究結(jié)果發(fā)生一定程度的偏倚。因此，在今后的研究中我們應(yīng)增大樣本量，以獲取更為準(zhǔn)確、可靠的數(shù)據(jù)。

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（收稿日期：2018-06-12 本文編輯：任 念）