自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)臨床應(yīng)用性能評估

郭 平，溫麗蓉，王劍飚

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200025)

糞便檢查作為臨床常規(guī)檢查項(xiàng)目，用于了解消化系統(tǒng)是否存在炎癥、出血、寄生蟲感染、潰瘍等病理情況，在消化系統(tǒng)疾病的診斷與鑒別診斷中有相當(dāng)重要的作用[1-2]。糞便隱血試驗(yàn)主要用于檢驗(yàn)肉眼不可見的少量出血，是臨床診斷消化道出血性疾病的重要方法，也是篩查消化道腫瘤的有效手段[3-4]。目前，在大多數(shù)醫(yī)院檢驗(yàn)科中，糞便常規(guī)檢查仍以手工操作為主，但該方法影響因素多，結(jié)果誤差大，易漏診陽性標(biāo)本[5-6]。隨著檢驗(yàn)科自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程的不斷深入，自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)已應(yīng)運(yùn)而生[7-8]。本文將通過一系列實(shí)驗(yàn)對該系統(tǒng)的臨床應(yīng)用性能進(jìn)行評價(jià)。

1 材料與方法

1.1材料來源 收集本院616份新鮮糞便常規(guī)標(biāo)本。重復(fù)性試驗(yàn)標(biāo)本取自體檢糞便常規(guī)標(biāo)本，攜帶污染及比對實(shí)驗(yàn)標(biāo)本取自門診及病房患者糞便常規(guī)標(biāo)本?；旌舷x卵標(biāo)本購自上海市寄生蟲防治所。

1.2儀器與試劑 沃文特FA160自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)及配套稀釋液(Lot：1512101)、沖洗液(Lot：1603021)、便隱血(FOB)膠體金法檢測試劑盒(Lot：1512051，四川沃文特生物技術(shù)有限公司)、消康寶便隱血(FOB)膠體金法檢測試劑盒(Lot：15040003，北京萬華公司)。

1.3方法

1.3.1檢測前準(zhǔn)備 由廠家工程師對儀器進(jìn)行保養(yǎng)、校準(zhǔn)，保證機(jī)械及檢測部分狀態(tài)正常、儀器焦距、光度適宜，工況合格。由于傳統(tǒng)的人工鏡檢與儀器報(bào)告結(jié)果方式不同，根據(jù)儀器操作說明書將兩者統(tǒng)一，見表1。

表1 人工鏡檢與儀器報(bào)告方式之間關(guān)系

注：“+”表示結(jié)果為陽性

1.3.2有形成分檢驗(yàn)重復(fù)性試驗(yàn) 取新鮮乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝全血標(biāo)本，3 000 r/min離心5 min，吸取紅細(xì)胞和白細(xì)胞層，使用配套稀釋液稀釋成A、B、C共3種參考濃度，體積分別為9、30、9 mL，見表2。A、C濃度連續(xù)檢測3次，B濃度連續(xù)檢測10次?；旌舷x卵標(biāo)本使用配套稀釋液稀釋成D濃度9 mL，連續(xù)檢測3次。儀器結(jié)果與參考濃度上下相差一個(gè)等級認(rèn)定為結(jié)果一致，但預(yù)期陽性結(jié)果不能變?yōu)殛幮?，預(yù)期陰性結(jié)果不能變?yōu)殛栃浴＜t細(xì)胞和白細(xì)胞一致性大于90%合格，蟲卵一致性大于80%合格。

表2 各個(gè)參考濃度下有形成分

注：“+”表示結(jié)果為陽性；“-”表示結(jié)果為陰性

1.3.3有形成分?jǐn)y帶污染檢驗(yàn) 取新鮮EDTA-K2抗凝全血與正常糞便標(biāo)本制成紅細(xì)胞、白細(xì)胞均為“+++”的陽性標(biāo)本3份，取3個(gè)裝有稀釋液的采集管作為陰性標(biāo)本。標(biāo)本按陽性在前陰性在后的順序進(jìn)行檢測。

1.3.4有形成分儀器與手工法檢測結(jié)果比對 616份糞便常規(guī)標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行儀器法和手工法檢測。手工法參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程(第4版)》[8]要求執(zhí)行，首先觀察標(biāo)本外觀性狀、顏色，滴1/2生理鹽水涂片于載玻片上，挑取含有黏液、膿血等病理成分的部位，若無病理成分，多部位取材?；靹蛴谏睇}水中制成懸液，厚薄以能看清報(bào)紙上的字跡為宜，蓋上蓋玻片，先用低倍鏡(10×10)觀察全片，檢查寄生蟲蟲卵、原蟲及包囊等，再用高倍鏡(10×40)仔細(xì)觀察病理成分，至少觀察10個(gè)視野。儀器操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。比較儀器與手工法結(jié)果一致性。同一樣本儀器與手工法結(jié)果上下相差一個(gè)等級內(nèi)為符合，但預(yù)期陽性結(jié)果不能變?yōu)殛幮越Y(jié)果，預(yù)期陰性結(jié)果不能變?yōu)殛栃越Y(jié)果。符合率100%為合格。當(dāng)兩種方法結(jié)果不一致時(shí)，從上機(jī)測試的采集管內(nèi)手工取樣進(jìn)行人工鏡檢，最終結(jié)果以復(fù)檢結(jié)果與儀器結(jié)果對比后為準(zhǔn)。

1.3.5隱血試劑重復(fù)性試驗(yàn) 批內(nèi)：使用樣本稀釋液將健康體檢者EDTA-K2抗凝全血的血紅蛋白濃度稀釋成6.4 μg/mL的血紅蛋白溶液，連續(xù)檢測10次，該濃度下檢測結(jié)果應(yīng)為“+”。符合率達(dá)到90%為合格。批間：使用上海市臨檢中心質(zhì)控標(biāo)本檢測，每日檢測4次，連續(xù)檢測5 d，共20次。質(zhì)控結(jié)果應(yīng)為“+”，符合率達(dá)到90%為合格。

1.3.6隱血試劑攜帶污染試驗(yàn) 取3份隱血強(qiáng)陽性糞便標(biāo)本，再取3個(gè)加有稀釋液的采集管作為陰性標(biāo)本。陽性標(biāo)本在前陰性標(biāo)本在后，上機(jī)測試。

1.3.7隱血試劑檢測范圍 取新鮮健康體檢者EDTA-K2抗凝全血，引用其血常規(guī)中血紅蛋白水平的數(shù)據(jù)，蒸餾水裂解紅細(xì)胞。使用樣本稀釋液將裂解后液體中的血紅蛋白稀釋成以下理論濃度：3.20、1.60、0.64 mg/mL，64.0、6.4、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2、0.1 μg/mL。以實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有隱血試劑(膠體金法)作為比對試劑。同一濃度連續(xù)檢測3次，加樣后5 min讀取結(jié)果，觀察待測隱血試劑檢測范圍與比對試劑是否一致。

1.3.8隱血試驗(yàn)結(jié)果比對 分別采用儀器和手工法兩種方法檢測，手工法按照使用說明書進(jìn)行操作和判讀結(jié)果。同一標(biāo)本儀器與手工法結(jié)果上下相差一個(gè)等級為符合，但預(yù)期陽性結(jié)果不能變?yōu)殛幮越Y(jié)果，預(yù)期陰性結(jié)果不能變?yōu)殛栃越Y(jié)果。符合率>80%為合格。當(dāng)兩種方法結(jié)果不一致時(shí)，從上機(jī)測試的采集管內(nèi)手工取樣100 μL加于隱血試劑卡上，5 min后讀取結(jié)果，最終結(jié)果以復(fù)檢結(jié)果與儀器結(jié)果對比后為準(zhǔn)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Excel2010對數(shù)據(jù)進(jìn)行整理。

2 結(jié) 果

2.1重復(fù)性 3種濃度有形成分檢驗(yàn)中紅細(xì)胞、白細(xì)胞，以及蟲卵標(biāo)本重復(fù)檢測結(jié)果與參考濃度一致。隱血試驗(yàn)批內(nèi)、批間檢測結(jié)果皆為“+”。重復(fù)性符合要求。

2.2攜帶污染率 有形成分檢測陰性標(biāo)本無病理性有形成分檢出、便隱血試驗(yàn)陰性標(biāo)本檢測結(jié)果均陰性。見表3。

表3 有形成分檢測攜帶污染測試結(jié)果

注：“/”表示未檢測；“+”表示結(jié)果為陽性

2.3隱血試劑檢測范圍 比對試劑與待測試劑最低檢測限皆為0.2 μg/mL。當(dāng)樣本中血紅蛋白濃度≥0.2 μg/mL時(shí)，檢測結(jié)果為陽性；當(dāng)樣本中血紅蛋白濃度<0.2 μg/mL時(shí)，檢測結(jié)果為陰性。當(dāng)濃度達(dá)到3.20 mg/mL時(shí)兩種試劑均出現(xiàn)“后帶現(xiàn)象”。待測試劑檢測范圍與比對試劑基本一致。見表4。

表4 隱血試劑檢測范圍

注：“±”表示結(jié)果為弱陽性；“+”表示結(jié)果為陽性；“-”表示結(jié)果為陰性

2.4儀器與手工法檢測結(jié)果比對 對616例臨床糞便標(biāo)本分別進(jìn)行儀器和手工法檢測，有形成分方面手工法檢出白細(xì)胞陽性21例(3.41%)、紅細(xì)胞陽性10例(1.62%)；儀器檢出白細(xì)胞陽性24例(3.89%)、紅細(xì)胞陽性12例(1.95%)。儀器紅細(xì)胞、白細(xì)胞檢出率高于手工法。在隱血檢測方面，手工法檢出陽性或弱陽性標(biāo)本79例(12.82%)，儀器檢出陽性或弱陽性標(biāo)本83例(13.47%)，兩種方法均未檢測出寄生蟲卵。其中手工法陽性的標(biāo)本儀器結(jié)果皆陽性，儀器檢測結(jié)果陽性而手工法陰性的標(biāo)本，經(jīng)過手工法復(fù)檢結(jié)果均為陽性。

3 討 論

糞便檢查由于其無創(chuàng)、方便、標(biāo)本易得等特點(diǎn)，成為臨床三大常規(guī)檢查之一，而隱血試驗(yàn)由于具有簡單、經(jīng)濟(jì)、無創(chuàng)、敏感性高等特點(diǎn)成為普查和篩選大腸癌的有效途徑[6]。但糞便常規(guī)檢查在操作過程中易產(chǎn)生令人不適的氣味，檢驗(yàn)人員存在不嚴(yán)格按要求操作的現(xiàn)象，挑取糞便隨意性大，量不準(zhǔn)，制備的糞便涂片及混懸液太淡或太濃，導(dǎo)致陽性標(biāo)本漏檢，影響其臨床應(yīng)用價(jià)值[8]。因此，加強(qiáng)糞便檢驗(yàn)的規(guī)范化管理，加速其自動(dòng)化進(jìn)程，是提高糞便檢驗(yàn)質(zhì)量的根本保證。

目前，國內(nèi)的自動(dòng)化糞便檢測儀器從原理上可分為仿手工糞便分析系統(tǒng)及過濾懸浮式糞便分析系統(tǒng)[5,7]。仿手工加樣糞便分析系統(tǒng)是用機(jī)械臂代替手臂，檢測過程與手工鏡檢相仿；過濾懸浮式糞便分析系統(tǒng)檢測過程為定量稀釋、混勻、過濾、灌注計(jì)數(shù)池鏡檢。FA160自動(dòng)糞便分析系統(tǒng)屬于后者。檢測前先對采集管中的標(biāo)本拍照觀察顏色及性狀，加入稀釋液后加液針和排氣針交替充氣，充分混勻標(biāo)本，通過采集管中的濾網(wǎng)除去體積較大的植物纖維及食物殘?jiān)葻o病理意義的成分。標(biāo)本進(jìn)入計(jì)數(shù)池后顯微鏡分層聚焦，軟件自動(dòng)判斷細(xì)胞形態(tài)最清晰的焦平面，并以該層為中心增加和減少固定的焦距進(jìn)行自動(dòng)拍照，之后將圖像傳輸?shù)诫娔X端軟件進(jìn)行初篩可疑陽性標(biāo)本提示人工復(fù)審。該儀器有形成分及隱血試劑檢測重復(fù)性、攜帶污染符合率為100%；隱血試劑最低檢測限、線性范圍與比對試劑一致。本研究中儀器檢出紅細(xì)胞、白細(xì)胞、寄生蟲及蟲卵、隱血陽性率依次為1.95%、3.89%、0.00%、13.47%；手工檢出紅細(xì)胞、白細(xì)胞、寄生蟲及蟲卵、隱血陽性率依次為1.62%、3.41%、0.00%、12.82%。儀器對紅細(xì)胞、白細(xì)胞、糞便隱血的檢出率比手工法更高，可能原因?yàn)槭止と与S機(jī)性較大，易發(fā)生漏檢，而儀器通過對樣本的充分混勻、沖池，提高了陽性標(biāo)本的檢出率。隨著人們生活水平的提高和公共衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，寄生蟲感染性疾病在部分地區(qū)已鮮有發(fā)生，本研究中寄生蟲及蟲卵的檢出率與白潔等[9]對我國現(xiàn)階段糞便常規(guī)檢查指標(biāo)異常率調(diào)查分析的結(jié)果相同。在標(biāo)本性狀觀察時(shí)如果發(fā)現(xiàn)球形硬便，經(jīng)過儀器處理形態(tài)仍比較完整的，建議手工法檢測。另外，柏油樣便進(jìn)行隱血檢測時(shí)可能存在“后帶現(xiàn)象”，導(dǎo)致出現(xiàn)假陰性情況，建議查看外觀圖像后進(jìn)行稀釋后復(fù)測或聯(lián)合檢測糞便中轉(zhuǎn)鐵蛋白彌補(bǔ)單項(xiàng)目檢測的不足。

綜上所述，F(xiàn)A160自動(dòng)糞便處理分析系統(tǒng)與傳統(tǒng)手工法具有較好的一致性，能夠滿足臨床常規(guī)檢測需求。