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    自身免疫性溶血性貧血患者用稀釋法進(jìn)行抗體分類的應(yīng)用

    2018-12-15 02:23:34吳德靜陳月寬張紹基劉?;?/span>黃美容
    檢驗醫(yī)學(xué)與臨床 2018年23期
    關(guān)鍵詞:效價倍數(shù)紅細(xì)胞

    楊 宇,吳德靜,陳月寬,張紹基,劉福慧,黃美容,熊 杰

    (1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科,貴州遵義 563003;2.遵義市第一人民醫(yī)院中心實驗室,貴州遵義 563002;3.遵義醫(yī)學(xué)院檢驗醫(yī)學(xué)院,貴州遵義 563003)

    自身免疫性溶血性貧血(AIHA)患者體內(nèi)常常存在一些抗體,這些抗體常導(dǎo)致抗體篩選陽性及交叉配血困難[1-2],從而延誤臨床的救治時機(jī)。采用稀釋法可以快速將患者體內(nèi)抗體的分類,從而縮短后續(xù)抗體鑒定及為選擇合適的血液輸注節(jié)約寶貴的時間[3-5]。本研究采用稀釋法對AIHA患者的抗體進(jìn)行分類,旨在提高臨床輸血的安全性,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 選擇2015年1月至2017年12月遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院(以下稱“本院”)AIHA患者36例為研究對象,其中男10例,女26例。年齡37~64歲,中位年齡52歲。36例AIHA患者中,2例血紅蛋白低于30 g/L,28例血紅蛋白為30~49 g/L,6例血紅蛋白為50~59 g/L,貧血貌均較重?;颊呔L期生活在本地區(qū)。納入與排除標(biāo)準(zhǔn):(1)臨床實驗室指標(biāo)提示有溶血性貧血的證據(jù);(2)排除理化因素及藥物導(dǎo)致的溶血、年齡在37歲以上、患有基礎(chǔ)疾病(系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)等。

    1.2儀器與試劑 不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞(上海血液生物醫(yī)藥有限公司);10項譜細(xì)胞(上海血液中心)、一次性放免試管、氯喹、試管、生理鹽水、血庫專用離心、移液器等。

    1.3方法 對36例AIHA患者進(jìn)行輸血前3項檢查(血型鑒定、不規(guī)則抗體篩選及交叉配血)。其中不規(guī)則抗體篩選尤為重要,對于抗篩鑒定結(jié)果判斷有困難者,必要的時候?qū)⒉捎谩岸娇购Y法”[1]:第1步,采用商品試劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞進(jìn)行抗體篩選;第2步,采用10項譜細(xì)胞與不同配比濃度的血漿(清)進(jìn)行抗體篩選,來確定抗體的特異性,從而選擇相合的血液輸注。試驗均采用試管法:(1)取3支小試管,分別加入經(jīng)離心后的被檢者血漿(清)100 L;(2)分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞各50 L;(3)混勻,以3 400 r/min離心15 s,肉眼觀察凝集情況;(4)凝集為陽性,無凝集為陰性。稀釋法:(1)將離心后的被檢者血漿(清)進(jìn)行倍比稀釋,稀釋配比濃度為1∶1,1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128;(2)稀釋后的每一配比濃度分別與10項譜細(xì)胞進(jìn)行同試管法同樣(1)~(4)的操作,以上操作均按試劑說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

    2 結(jié) 果

    2.1“第1步”抗體篩檢結(jié)果 在36例AIHA中,1例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞,檢測結(jié)果全部陰性,未檢出同種抗體及自身抗體;3例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞部分陽性、部分陰性,表示檢出同種抗體,再進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定其特異性;32例不規(guī)則抗體篩檢Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號細(xì)胞全部陽性。表明可能有自身抗體或(和)同種抗體。

    2.2“第2步”抗體篩檢結(jié)果 對第1步中32例AIHA患者不規(guī)則抗體篩檢初篩全部陽性的標(biāo)本,采用稀釋法對患者血漿(清)進(jìn)行倍比稀釋,然后對相應(yīng)稀釋倍數(shù)后的血漿(清)進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定。

    將不同稀釋倍數(shù)的血漿(清)標(biāo)本分別與譜細(xì)胞反應(yīng),如果到某一稀釋倍數(shù)濃度時出現(xiàn)格局顯示全部陽性結(jié)果,然而下一稀釋倍數(shù)濃度時出現(xiàn)反應(yīng)結(jié)果全部陰性,這時表明出現(xiàn)全陰性結(jié)果的稀釋倍數(shù)自身抗體的效價為0,但也不排除同種抗體此稀釋倍數(shù)時效價同樣為0或上一稀釋倍數(shù)效價為0,即當(dāng)同種抗體效價等于或低于自身抗體效價時,與譜細(xì)胞的反應(yīng)格局會出現(xiàn)抗體遮蓋現(xiàn)象,會出現(xiàn)反應(yīng)格局,見表1。此時需要繼續(xù)用自身紅細(xì)胞作自身抗體的吸收放散(氯喹放散),通過反復(fù)吸收放散,直到吸收后的自身紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(DAT)陰性為止,將吸收后的血漿(清)再進(jìn)行譜細(xì)胞鑒定。若存在同種抗體則會出現(xiàn)表2的反應(yīng)格局。若不存在同種抗體則譜細(xì)胞反應(yīng)格局顯示全部陰性。

    表1 對AIHA患者血漿(清)倍比稀釋后的譜細(xì)胞結(jié)果

    注:s表示反應(yīng)加強;w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

    表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細(xì)胞吸收后的譜細(xì)胞結(jié)果

    續(xù)表2 對AIHA患者血漿(清)用自身紅細(xì)胞吸收后的譜細(xì)胞結(jié)果

    注:s表示反應(yīng)加強;w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

    當(dāng)稀釋后不同稀釋倍數(shù)的標(biāo)本血漿(清)與譜細(xì)胞反應(yīng),若出現(xiàn)反應(yīng)格局到某一稀釋倍數(shù)時譜細(xì)胞格局出現(xiàn)全部陽性結(jié)果,然而下一稀釋倍數(shù)濃度時的反應(yīng)格局出現(xiàn)部分陽性部分陰性,這時表明自身抗體的效價低于同種抗體效價。譜細(xì)胞鑒定類似反應(yīng)格局結(jié)果見表3。

    表3 血漿(清)倍比稀釋后的譜細(xì)胞結(jié)果

    注:s表示反應(yīng)加強;w表示反應(yīng)變?nèi)?/p>

    3 討 論

    AIHA多發(fā)于淋巴系統(tǒng)惡性疾病、結(jié)締組織性疾病、細(xì)菌病毒感染和應(yīng)用某些藥物后,紅細(xì)胞受到藥物、感染等外界因素影響后可產(chǎn)生自身抗體[6-7]。AIHA患者常常因嚴(yán)重貧血貌來院就診,在臨床治療中,常常需要反復(fù)輸血治療,然而部分患者本身也存在自身抗體,也因多次輸血治療可能會產(chǎn)生同種抗體,因此為交叉配血帶來困擾。

    本文采用稀釋法及“二步抗篩法”,旨在能夠進(jìn)行抗體種類分類。選擇合適供者的血液輸注,對AIHA患者“精準(zhǔn)輸血”提供“精準(zhǔn)信息”具有重要的意義。通常,AIHA患者在進(jìn)行輸血前3項檢查時,其中不規(guī)則抗體篩檢初篩常有困擾,及Rh血型同型血配血即可;若初篩結(jié)果部分陽性、部分陰性,判斷無自身抗體但有同種抗體,此時初篩后還需要鑒別其同種抗體的特異性,隨后交叉配血選擇ABO、Rh同型血配血且不帶同種特異性抗體對應(yīng)抗原的供者紅細(xì)胞與之配血即可[8]。對于需要自身紅細(xì)胞反復(fù)放散吸收后的患者血漿(清),該方法對于同種抗體較易區(qū)分,但對于同種自身血型抗體不能進(jìn)行區(qū)分,該試驗會出現(xiàn)假陰性的譜細(xì)胞結(jié)果。文獻(xiàn)[9-11]報道,選擇避開與特異性抗體對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞制品輸注,輸注的紅細(xì)胞制品在AIHA患者體內(nèi)存活能達(dá)到臨床輸血要求的標(biāo)準(zhǔn),而大大高于無經(jīng)選擇性交叉配血其凝集強度低于自身對照管凝集強度的紅細(xì)胞制品,無經(jīng)選擇性的最小凝集強度供者紅細(xì)胞輸注后須有一定效果但是達(dá)不到輸血要求的標(biāo)準(zhǔn)。在治療期間每例患者平均輸注4~6 U紅細(xì)胞制品,輸注期間均無不良反應(yīng),輸注順利;次日進(jìn)行輸血后療效評價,33例患者血紅蛋白均有所提高輸血有效,而3例未達(dá)到預(yù)期標(biāo)準(zhǔn)輸血無效。為了有效輸血,輸血科人員應(yīng)在交叉配血時盡可能選擇能避開特異性抗體對應(yīng)抗原的紅細(xì)胞制品輸注后,才能夠有效地避免遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生而有效輸血。因此對AIHA患者輸血前進(jìn)行相關(guān)抗體分類鑒定非常必要,能夠為臨床患者的治療贏得寶貴的時間,確保輸血安全。

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