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    膠體金免疫層析技術(shù)在羊布魯氏菌病的檢測應(yīng)用

    2018-12-08 01:59:14,,,,,,
    中國人獸共患病學(xué)報 2018年10期
    關(guān)鍵詞:膠體金布病布魯氏菌

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    青海省是我國布病流行的重疫區(qū),根據(jù)我國動物布魯氏菌病的診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18646-2002),通常采用虎紅平板凝集試驗進(jìn)行牲畜布病篩選,采用試管凝集試驗進(jìn)行布病的確診,但由于SAT有時出現(xiàn)前帶現(xiàn)象和封閉現(xiàn)象,所以有時也出現(xiàn)假陰性結(jié)果,必要時需要和其他方法聯(lián)合應(yīng)用。膠體金免疫層析技術(shù)(GICA)是將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和蛋白層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維膜為載體的固相膜免疫分析技術(shù),適用于現(xiàn)場快速檢測。GICA已被廣泛應(yīng)用于動物病毒、細(xì)菌、寄生蟲等獸醫(yī)病原學(xué)檢測和臨床診斷中[1]。為了解GICA靈敏度和特異度,特將GICA與RBPT、 SAT進(jìn)行了對比研究。

    1 材料與方法

    1.1一般材料 樣本取自格爾木地區(qū)送檢的羊血清299份。

    1.2實驗試劑 虎紅凝集抗原、試管凝集抗原、獸用陰陽性標(biāo)準(zhǔn)血清均由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供,有效期為2018年10月12日,羊布魯氏桿菌病抗體快速試劑盒為廣州悅洋生物技術(shù)有限公司提供,有效期為2018年11月9日。

    1.3 試驗方法

    1.3.1虎紅凝集試驗和試管凝集試驗以《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)(GB/T18646-2002)》為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

    1.3.2膠體金免疫層析技術(shù)按照產(chǎn)品說明書的操作,取待檢血清10 μL滴入試紙條的樣品孔中,再滴入緩沖液4滴,20 min內(nèi)判定結(jié)果,C為質(zhì)控線,T為檢測線,C有顯示T才有效。

    1.4統(tǒng)計學(xué)方法 運(yùn)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。

    1.5Kappa值判斷標(biāo)準(zhǔn):Kappa值<0,一致性強(qiáng)度弱;Kappa值為0~0.2,一致性強(qiáng)度為輕;Kappa值為0.21~0.40,一致性強(qiáng)度為尚好;Kappa值為0.41~0.60,一致性強(qiáng)度為中度;Kappa值為0.61~0.80,一致性強(qiáng)度為高度;Kappa值為0.81~1,一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)。

    2 結(jié) 果

    2.1299份羊血清樣本3種方法檢測結(jié)果 RBPT、SAT和GICA 3種方法進(jìn)行檢測見表1。

    表1 3種實驗方法布病檢測結(jié)果Tab.1 Three experimental methods of testing results about brucellosis

    2.2RBPT與SAT進(jìn)行對比 RBPT與 SAT進(jìn)行對比有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=282.563,P<0.001),檢測結(jié)果靈敏度為100%,特異度為99.23%,Kappa=0.972,兩種方法的一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)(Kappa值>0.81),說明一致性好(表2)。

    2.3GICA與SAT進(jìn)行對比 GICA與SAT進(jìn)行對比有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=256.577,P<0.001),檢測結(jié)果靈敏度為90%,特異度為100%,一致性都量Kappa=0.940,兩種方法的一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)(Kappa值>0.81),說明一致性好(表3)。

    表2 RBPT與SAT布病檢測結(jié)果符合率對比Tab.2 Comparison of coincidence rate about RBPT and SAT brucellosis testing

    表3 GICA與SAT布病檢測結(jié)果符合率對比Tab.3 Comparison of coincidence rate about GICA and SAT brucellosis testing

    3 討 論

    膠體金免疫層析技術(shù)因為具有特異、使用簡便、快速檢測的特征在獸醫(yī)臨床上其發(fā)展?jié)摿蛻?yīng)用前景是非常巨大的[2],此次將GICA應(yīng)用于羊布魯氏菌病的檢測,通過與SAT、RBPT兩種檢測方法,進(jìn)行比較得出3種方法的檢測結(jié)果基本一致,均為陽性的有36份。運(yùn)用Kappa值一致性強(qiáng)度判斷分析得出,GICA特異度指標(biāo)略高于RBPT,與SAT一致。動物布魯氏菌病診斷標(biāo)準(zhǔn)中通常采用RBPT進(jìn)行篩選,采用SAT進(jìn)行確診。SAT具有敏感性強(qiáng),特異性高等優(yōu)點,但其操作步驟繁瑣,所需器械多,樣本消耗量大,觀察結(jié)果用時長等因素的影響[3-4],致使在現(xiàn)場工作中受限。而GICA剛好彌補(bǔ)了以上缺點,它樣本用量低,試驗條件要求不高,操作方法便捷、觀察結(jié)果快速、便于保存等優(yōu)點[5],使膠體金免疫層析技術(shù)更適用于布病現(xiàn)場快速篩檢工作,有巨大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景,從而促進(jìn)青海省人、畜間布病預(yù)防控制工作健康、有序的發(fā)展。

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