上海地區(qū)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶正確度驗(yàn)證計(jì)劃調(diào)查結(jié)果分析

虞嘯炫，歐元祝，唐立萍，王美娟，劉文彬，葛丹紅，王 茗

（上海市臨床檢驗(yàn)中心生化室，上海 200126）

血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 （g a m m aglutamyltransferase，GGT）是最常用的肝功能檢測(cè)項(xiàng)目，在肝病防治中起到積極作用。目前，盡管我國(guó)大多采用動(dòng)態(tài)法檢測(cè)GGT，但是各個(gè)公司提供的試劑盒試劑組成、血清和試劑的用量比例、單雙試劑、檢測(cè)程序等都會(huì)有所不同，造成檢測(cè)結(jié)果的不一致。通過(guò)國(guó)際臨床化學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)（the International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine，IFCC）一級(jí)參考方法賦值的正確度驗(yàn)證品，不僅可以在酶學(xué)溯源等級(jí)鏈上將臨床實(shí)驗(yàn)室的終端結(jié)果溯源到酶學(xué)的國(guó)際單位，同時(shí)也可以讓臨床實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果具有可比性[1]。

1 材料和方法

1.1 材料

正確度控制品來(lái)源：混合血清為仁濟(jì)醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院、同濟(jì)醫(yī)院和東方醫(yī)院的臨床樣品，所有血清樣品均采自肘部靜脈。

1.2 儀器與試劑

采用真空過(guò)濾裝置（德國(guó)賽多利斯公司）對(duì)血清樣品進(jìn)行過(guò)濾處理；均勻性、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)采用DXC600全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)Beckman Coulter公司）；正確度控制品參考方法賦值采用CARY4000分光光度儀（美國(guó)安捷倫公司）。

參考方法賦值的化學(xué)試劑均購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；用于GGT參考方法正確度驗(yàn)證的參考物質(zhì)ERM-AD452購(gòu)自歐盟參考物質(zhì)及測(cè)量研究所。均勻性、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的試劑和質(zhì)控物質(zhì)為DXC600全自動(dòng)生化分析儀配套試劑。

1.3 方法

1.3.1 正確度控制品制備 將-70℃保存的GGT相關(guān)濃度樣品室溫完全溶解，混合攪拌均勻。將混勻樣品分裝至離心管內(nèi)，2 105×g離心60 min。完成離心后取上清液，將上清液通過(guò)0.2 μm的膜采用真空過(guò)濾裝置（過(guò)濾前將真空過(guò)濾裝置全部清洗并烘干）進(jìn)行過(guò)濾處理。過(guò)濾液收集至新燒杯內(nèi)，再次混勻攪拌，使樣品混合均勻?；靹驑悠钒?00 μl/支分裝在凍存管內(nèi)，并貼上相應(yīng)的標(biāo)簽以便識(shí)別和記錄。將全部分裝完的樣品保存至-70℃冰箱內(nèi)。正確度控制品均勻性、穩(wěn)定性檢驗(yàn)根據(jù)CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》[2]進(jìn)行。正確度驗(yàn)證計(jì)劃方案根據(jù)文獻(xiàn)[3]進(jìn)行設(shè)計(jì)，具體方案如下：選擇84家覆蓋上海地區(qū)GGT各檢測(cè)系統(tǒng)的臨床實(shí)驗(yàn)室，共發(fā)放A、B 2個(gè)水平樣品，分別為GGT-A，GGT-B；用冷鏈運(yùn)輸?shù)礁髋R床實(shí)驗(yàn)室，臨床實(shí)驗(yàn)室收到樣品后，立即將樣品存放在-70℃或-20℃冰箱中（優(yōu)選-70℃冰箱）。連續(xù)測(cè)定3 d，每個(gè)樣品每天1支，每支重復(fù)檢測(cè)2次。

1.3.2 正確度控制品賦值 上海市臨床檢驗(yàn)中心酶學(xué)參考實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用IFCC GGT一級(jí)參考測(cè)量方法[4]與臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行同步實(shí)驗(yàn)，在測(cè)定前，用參考物質(zhì)ERM-AD452對(duì)參考系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。所得賦值為正確度控制品的靶值。

1.3.4 判斷標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[5]中GGT的偏移質(zhì)量指標(biāo)，以靶值±5.5%為合格判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 均勻性和穩(wěn)定性結(jié)果

樣品分裝結(jié)束后，隨機(jī)挑選10支樣品進(jìn)行均勻性測(cè)定，數(shù)據(jù)用s≤0.3σ準(zhǔn)則進(jìn)行評(píng)價(jià)，GGT-A和GGT-B的不均勻s分別為1.26 U/L和0.15U/L，＜相應(yīng)0.3σ對(duì)應(yīng)的1.87 U/L和3.14 U/L，符合CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》對(duì)能力驗(yàn)證樣品均勻性的要求。根據(jù)之前的穩(wěn)定性模擬實(shí)驗(yàn)結(jié)果，-20℃條件下放置1個(gè)月，GGT酶活性均非常穩(wěn)定，GGT-A、GGT-B的穩(wěn)定性檢驗(yàn)分別為0.53 U/L和1.04U/ L，小于相應(yīng)0.3σ對(duì)應(yīng)的1.88 U/L和1.04 U/L；符合CNAS-GL03《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》對(duì)樣品穩(wěn)定性的要求。

2.2 正確度控制品賦值結(jié)果

GGT-A和GGT-B用參考方法賦值分別是97.0U/L和161.0U/L。對(duì)每個(gè)水平樣品進(jìn)行連續(xù)4 d的檢測(cè)，每天檢測(cè)3次，共計(jì)12個(gè)結(jié)果。取12個(gè)結(jié)果的得出相應(yīng)賦值，GGT-A、GGT-B 12個(gè)結(jié)果的CV分別為1.10%、0.86%。

2.3 GGT正確度驗(yàn)證結(jié)果

此次GGT正確度驗(yàn)證計(jì)劃，共收回84家實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，進(jìn)行2次循環(huán)3s剔除后，有2家實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果被作為離群值剔除。共分析82家實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果，結(jié)果顯示：2個(gè)水平樣品的總體CV均＜10%，而與靶值的偏移均＜7.3%；82家實(shí)驗(yàn)室根據(jù)儀器品牌分為8組，其中，貝克曼AU系列（24家），羅氏（13家），邁瑞（1家）3個(gè)組的組內(nèi)CV及與靶值的偏移均較小，CV均＜5.6%，偏移均＜5.2%，但是邁瑞組僅有1家實(shí)驗(yàn)室，其代表性可能并不全面；貝克曼（4家）、日立（26家）和東芝（3家）組雖然組內(nèi)CV均＜6.4%，但是日立和東芝組A水平樣品的偏移均＞7.2%，B水平樣品的偏移要優(yōu)于A水平，均 ＜5.7%，而貝克曼組均＞30%；西門子（5家）和雅培（6家）組的組內(nèi)CV在10%左右，偏移也在6%左右，見表 1。8個(gè)組GGT-A、GGT-B 2個(gè)水平樣品的偏移趨勢(shì)線走向基本一致。見圖1。

表1 GGT正確度驗(yàn)證結(jié)果

圖1 各儀器組GGT正確度控制品偏移趨勢(shì)

2.4 GGT正確度驗(yàn)證結(jié)果符合率

以靶值±5.5%為合格判斷標(biāo)準(zhǔn)，由于貝克曼組的偏移較大，導(dǎo)致總體符合率不高，A水平樣品整體符合率為45.2%，實(shí)驗(yàn)室回報(bào)數(shù)據(jù)的x為89.9 U/L，CV為8.30%； B水平樣品整體符合率為60.7%， 實(shí)驗(yàn)室回報(bào)數(shù)據(jù)x 為151.7 U/L，CV為8.0%。

3 討論

前期的模擬實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明GGT在各溫度條件下酶活性均較穩(wěn)定，所以此次正確度驗(yàn)證計(jì)劃中，GGT本身不穩(wěn)定導(dǎo)致結(jié)果差異的影響因素很小，可以忽略。整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以客觀地反映各臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)血清樣品GGT項(xiàng)目結(jié)果的正確度及一致性。

此次正確度控制品調(diào)查結(jié)果顯示：2個(gè)樣品的總體CV均＜10%，與靶值的偏移均＞5.5%。根據(jù)回報(bào)信息可知，羅氏與貝克曼組基本以配套試劑、校準(zhǔn)品、檢測(cè)方法為主，構(gòu)成一整套完整的檢測(cè)系統(tǒng)，在實(shí)驗(yàn)室間的一致性以及正確度方面均較好；而日立、東芝、西門子和雅培組B水平樣品的偏移均優(yōu)于A水平，A水平樣品偏移又均超出5.5%的允許范圍，表明上述4組檢測(cè)系統(tǒng)在GGT項(xiàng)目分析特異性與IFCC參考方法之間存在一定的差異，導(dǎo)致不同水平樣品間偏移不一致，后續(xù)可能需要在試劑原理上進(jìn)行更多的分析。另外，西門子及雅培組組內(nèi)CV在10%左右，是各儀器組中實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果離散度最高的組，后續(xù)在檢測(cè)結(jié)果一致性方面需要加強(qiáng)。只有提高了結(jié)果間的一致性，結(jié)果間的正確度才會(huì)變得更有意義；貝克曼組均使用配套檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)GGT，而貝克曼試劑的方法與IFCC參考方法略有不同，可能是導(dǎo)致與用IFCC參考方法賦值的儀器組靶值偏移較大的原因。采用貝克曼配套試劑檢測(cè)的GGT結(jié)果為了達(dá)到與其他系統(tǒng)的可比性，是否應(yīng)整體修正偏移，有待進(jìn)一步的調(diào)查和探討。在統(tǒng)計(jì)結(jié)果符合率時(shí)，按靶值±5.5%的標(biāo)準(zhǔn)，GGT正確度控制品符合率分別為45.2%和60.7%。盡管符合率較低，但還有部分實(shí)驗(yàn)室能夠較好地達(dá)到正確度計(jì)劃的要求。另一方面，我們也在考慮5.5%評(píng)價(jià)限是否適合，因?yàn)樵贗FCC GGT項(xiàng)目全球參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的評(píng)價(jià)限為靶值±5.25%，而這些實(shí)驗(yàn)室在GGT項(xiàng)目分析上對(duì)精密度、正確度的要求都是最高的，他們所使用的一級(jí)參考方法直接溯源至國(guó)際單位，也是目前GGT等酶學(xué)項(xiàng)目溯源鏈的頂端。隨著量值溯源的傳遞，從最高級(jí)的一級(jí)參考方法傳遞至臨床終端用戶（方法），不確定度不斷增大，因此5.5%的評(píng)價(jià)限是否足夠，需要統(tǒng)計(jì)大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)才能得出結(jié)論。