高倍鏡視野下血涂片估測法在血小板計(jì)數(shù)檢測中的價(jià)值

趙 杰，趙春陽

（天津市第三中心醫(yī)院 天津市肝膽疾病研究所 天津市人工細(xì)胞重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生部人工細(xì)胞工程技術(shù)研究中心，天津 300170）

血小板（platelet，PLT）計(jì)數(shù)是衡量止血和凝血功能的重要指標(biāo)，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性對化療患者和PLT輸注患者以及血液疾病的診療都有著十分重要的作用。雖然全自動(dòng)血液分析儀操作簡單、快速、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，可彌補(bǔ)傳統(tǒng)顯微鏡手工計(jì)數(shù)法操作繁瑣、耗時(shí)等不足，但其在方法學(xué)方面存在一定的缺陷，不能完全排除干擾因素對檢測結(jié)果的影響。當(dāng)PLT計(jì)數(shù)出現(xiàn)假性增高或降低的異常情況時(shí)，血涂片檢測和顯微鏡手工計(jì)數(shù)法復(fù)查就顯得十分重要。如果血涂片PLT分布均勻，且無異常聚集，血涂片檢測可作為PLT計(jì)數(shù)估測的有效方法[1]。本研究在高倍鏡視野下估測血涂片PLT計(jì)數(shù)，將估測結(jié)果與全自動(dòng)血液分析儀檢測結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)估血涂片估測法在PLT計(jì)數(shù)中的臨床價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 研究對象

收集天津市第三中心醫(yī)院2016年12月—2017年4月血常規(guī)檢驗(yàn)標(biāo)本100份。根據(jù)血液分析儀PLT計(jì)數(shù)檢測結(jié)果，將標(biāo)本分為：＜100×109/L組（30例）、（100～300）×109/L組（35例）、＞300×109/L組（35例）。

1.2 儀器與試劑

采用ADVIA 2120i全自動(dòng)血液分析儀（德國Siemens公司）及配套試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；CX-31型普通光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.3 方法

1.3.1 儀器法 采用ADVIA 2120i全自動(dòng)血液分析儀進(jìn)行PLT計(jì)數(shù)。使用E-cal校準(zhǔn)，每天進(jìn)行3個(gè)水平E-check質(zhì)控，均在控。所有標(biāo)本均在采集后2 h內(nèi)完成檢測。

1.3.2 血涂片估測法 取混勻后新鮮血液標(biāo)本1滴，置于載玻片一端1 cm處或整片3/4處；左手持載玻片，右手持推片從血滴前方向后移、接觸血滴，使血滴沿推片邊緣展開。按血涂片推片與載玻片角度（30°、45°、60°），制備3張血涂片，分別編號(hào)為A、B、C，并進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色。待血涂片干燥后，在每張血涂片體尾交界處紅細(xì)胞平均分布且細(xì)胞間無重疊區(qū)用顯微鏡油鏡（100×）計(jì)數(shù)10個(gè)視野，記錄每個(gè)視野的PLT計(jì)數(shù)，并計(jì)算其均值。

1.3.3 相關(guān)性分析 將儀器法與血涂片檢測結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算Z值：Z=儀器法PLT計(jì)數(shù)/血涂片每高倍鏡視野下PLT計(jì)數(shù)均值。

1.3.4 驗(yàn)證 每份標(biāo)本都制備1張頭體尾分明、厚薄適宜、制片及染色良好的血涂片，分別對4個(gè)顯微鏡油鏡下視野的PLT進(jìn)行計(jì)數(shù)，并計(jì)算得到血涂片估測值（×109/L），將血涂片估測值與儀器計(jì)數(shù)值進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel 2007軟件及SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。相關(guān)性分析采用線性回歸進(jìn)行評(píng)估；驗(yàn)證結(jié)果采用配對t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 相關(guān)性分析

A組、B組、C組3組儀器法PLT計(jì)數(shù)與血涂片每高倍鏡視野下PLT計(jì)數(shù)均值呈高度相關(guān)（P＜0.001），Z值分別為10.00、10.07、9.98，取整數(shù)位10。見圖1。

圖1 儀器法PLT計(jì)數(shù)與血涂片每高倍鏡視野下PLT計(jì)數(shù)均值的相關(guān)曲線

2.2 驗(yàn)證結(jié)果

經(jīng)驗(yàn)證，儀器法和血涂片估測法檢測結(jié)果具有較好的相關(guān)性（P=0.650）。見圖2。

3 討論

圖2 儀器法與血涂片估測法PLT計(jì)數(shù)的相關(guān)曲線

PLT在生理性止血和某些病理過程中發(fā)揮著重要的作用。對手術(shù)患者而言，當(dāng)PLT計(jì)數(shù) ＞50×109/L 且PLT功能正常時(shí)，手術(shù)過程中一般不會(huì)出現(xiàn)明顯出血；當(dāng)PLT計(jì)數(shù)＜50×109/L時(shí)，可導(dǎo)致皮膚黏膜紫癜，患者術(shù)后可能會(huì)出現(xiàn)出血等現(xiàn)象；當(dāng)PLT計(jì)數(shù)＜20×109/L時(shí)，可發(fā)生自發(fā)性出血，需預(yù)防性輸注PLT，患者不宜進(jìn)行手術(shù)[2]。

電阻抗法和熒光化學(xué)染色法（光學(xué)法）是目前全自動(dòng)血液分析儀常規(guī)檢測PLT的主要方法。然而，全自動(dòng)血液分析儀無法對凝集體結(jié)構(gòu)、PLT計(jì)數(shù)進(jìn)行確認(rèn)，這會(huì)使得儀器法PLT計(jì)數(shù)出現(xiàn)假性減少的現(xiàn)象[3]。冷球蛋白血癥患者血漿中存在冷球蛋白，這些小顆粒往往會(huì)被誤認(rèn)為PLT，從而使PLT計(jì)數(shù)假性增加；另外，小紅細(xì)胞及巨大PLT也會(huì)影響PLT計(jì)數(shù)[4]。因此，當(dāng)全自動(dòng)血液分析儀PLT計(jì)數(shù)減少時(shí)，應(yīng)考慮PLT假性減少的情況；當(dāng)出現(xiàn)PLT相關(guān)儀器報(bào)警提示時(shí)，應(yīng)進(jìn)行血涂片檢測和顯微鏡手工計(jì)數(shù)法復(fù)查估測PLT計(jì)數(shù)。

血涂片檢測和顯微鏡手工計(jì)數(shù)法復(fù)查除了可以對PLT進(jìn)行計(jì)數(shù)之外，還可在血涂片染色后觀察到PLT的形態(tài)、聚集性和分布情況。血涂片估算法可在一定程度上減少標(biāo)本的復(fù)檢頻率，降低成本，減少標(biāo)本周轉(zhuǎn)時(shí)間。本研究計(jì)算出的儀器法與血涂片估測法PLT計(jì)數(shù)Z值為10。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，儀器法PLT計(jì)數(shù)與血涂片每高倍鏡視野下PLT計(jì)數(shù)均值呈高度相關(guān)（P＜0.001）。通過對100份標(biāo)本進(jìn)行反向驗(yàn)證，得到血涂片估測值與儀器計(jì)數(shù)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.650）。

綜上所述，在血涂片PLT分布均勻，且無PLT異常聚集的情況下，可利用Z值估測PLT計(jì)數(shù)。高倍鏡視野下血涂片估測法估測PLT計(jì)數(shù)具有十分重要的意義，當(dāng)出現(xiàn)非PLT聚集因素導(dǎo)致PLT計(jì)數(shù)假性增加或減少的現(xiàn)象時(shí)，可利用Z值估測PLT計(jì)數(shù)，同時(shí)應(yīng)利用血涂片檢測和顯微鏡手工計(jì)數(shù)法進(jìn)行復(fù)查。