潰瘍性結(jié)腸炎腸道菌群失調(diào)與免疫球蛋白水平的相關性研究

李叔芝

（河南省柘城縣人民醫(yī)院 消化內(nèi)科，河南 商丘 476200）

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis,UC）是臨床常見的一種病因不明的結(jié)腸和直腸慢性非特異性炎癥疾病，多發(fā)于結(jié)腸和直腸黏膜和黏膜下層。病程周期長，反復發(fā)作，任意年齡段都可發(fā)病，以20～30歲較為多見[1]。近年來，隨著分子生物學水平的進步和微生態(tài)研究領域取得進展，普遍認為腸道有益菌群失調(diào)和機體免疫功能的異常在UC疾病發(fā)生和進展中起到重要作用，對其進行深入研究有利于探尋UC疾病的發(fā)生原因，也為臨床疾病進展的判斷和治療提供指導。鑒于此，本研究選取2015年1月10日-2017年1月10日在本院就診的158例潰瘍性結(jié)腸炎患者為研究對象，依據(jù)病情進展分組，測定不同組患者的糞便球桿比和免疫球蛋白水平。初步探明腸道菌群比例與機體免疫力和疾病進展的相關性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 患者資料 選取2015年1月10日-2017 年1月10日在本院就診的158例潰瘍性結(jié)腸炎患者。UC診斷標準參考《我國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識意見（2007）》。根據(jù)Sourtherland疾病活動指數(shù)評分[2]將納入研究的患者分成4組，其中，癥狀緩解組（小于2分）55例，男28例，女27 例；年齡12～68歲，中位年齡25歲。輕度活動組（3～5 分）50例，男29例，女21例；年齡12～70歲，中位年齡30歲。中度活動組（6～10分）42例，男20 例，女22例；年齡18～75歲，中位年齡28歲。重度活動組（11～12分）11例，男5例，女6例；年齡15～71歲，中位年齡34歲。本研究得到河南省柘城縣人民醫(yī)院倫理委員會批準。

納入標準：①1周內(nèi)未服用或者注射任何含有抗生素或者益生菌的藥物進行治療；②未患有免疫性血小板減少性紫癜、重癥肌無力及紅斑狼瘡等免疫性疾??；③患者充分知情并同意本研究方案。

1.1.2 免疫球蛋白檢測試劑盒 人血免疫球蛋白A（immunoglobulin A,IgA）免疫比濁法定量檢測試劑盒、人血免疫球蛋白G（immunoglobulin G,IgG）免疫比濁法定量檢測試劑盒和人血免疫球蛋白M（immunoglobulin M,IgM）免疫比濁法定量檢測試劑盒（購自上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 糞便球桿比測定 糞便的收集：便后，使用潔凈的容器取糞便表面未被污染部分，密封送檢。糞便涂片：用無菌接種環(huán)挑取適量糞便于載玻片的邊緣，用無菌推片以30°左右角度勻速推片，形成均勻薄層。火焰固定：載玻片菌層朝上，在酒精燈的火焰上來回過2、3次，以不燙手為宜。革蘭氏染色：滴加1、2滴草酸銨結(jié)晶紫，染色1 min，輕輕洗掉染色液，濾紙吸干水；加2滴碘酒染色1 min，水洗，濾紙吸干；95%乙醇溶液脫色30 s，水洗，吸干；石炭酸復紅復染3 min，水洗，吸干。鏡檢計數(shù)：選取染色均勻處計1 000個細菌，革蘭氏陽性菌為紫色，革蘭氏陰性菌為紅色。計算糞便球桿比。并以每個視野下細菌數(shù)量501～5 000個菌群為正常，101～500個為I度菌群失調(diào)，11～100個為II度菌群失調(diào)，小于10個為III度菌群失調(diào)。

1.2.2 免疫球蛋白水平測定 采血：無菌采取患者空腹靜脈血5 ml。血清制備：于37℃培養(yǎng)箱靜置1 h后，轉(zhuǎn)移至4℃冰箱過夜。次日，用Pico17低溫離心機（塞默飛世爾科技有限公司），3 000 rpm離心5 min，無菌吸取上層血清，4℃冰箱儲存。免疫球蛋白含量測定：具體測定過程參照試劑盒說明書，數(shù)據(jù)讀取使用Thermo Labserv K3酶標儀（塞默飛世爾科技有限公司）。

1.3 統(tǒng)計學方法

所有錄入數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件進行分析。免疫球蛋白值為計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，行Dunnett-t檢驗；疾病分級與菌群失調(diào)的相關性采用Spearman相關性檢驗分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組患者免疫球蛋白水平檢測結(jié)果

與癥狀緩解組相比，輕度活動組、中度活動組和重度活動組的IgG（t =3.214，P =0.125；t =3.113，P =0.532；t =4.267，P =0.764）、IgA（t =3.065，P =0.114；t =3.552，P =0.472；t =3.022，P =0.464） 和 IgM（輕 度 活 動 組t =2.116，P =0.089）的變化不顯著，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；中度活動組（t =1.022，P =0.034）和重度活動組（t =1.142，P =0.042）的IgM變化差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 各組患者腸道菌群變化情況

隨著UC疾病嚴重程度的增加，正常和I 度菌群失調(diào)的比例逐漸下降（87.27%，80.00%，71.43%，9.09%），II度菌群失調(diào)和III度菌群失調(diào)的總和所占的比例逐漸上升。Spearman檢驗相關系數(shù) ρ=0.286，P =0.017＜0.05，說明 UC疾病的嚴重程度與患者腸道菌群失調(diào)呈正相關。見表2。

表1 各組免疫球蛋白水平（±s,g/L）

表1 各組免疫球蛋白水平（±s,g/L）

注：?與癥狀緩解組比較，P＜0.05。

組別 病例 IgG IgA IgM癥狀緩解組 55 12.54±1.35 2.08±0.42 1.12±0.31輕度活動組 50 12.38±1.42 2.24±0.25 0.94±0.55中度活動組 42 12.67±1.58 2.17±0.67 0.88±0.25?重度活動組 11 12.98±1.77 2.14±0.55 0.69±0.12?

表2 各組患者腸道菌群變化情況 例（%）

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎患者都伴有不同程度的腸道菌群失調(diào)，主要表現(xiàn)為腸道菌群平衡被打破，雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌減少，大腸桿菌、腸球菌數(shù)量增多[3]。本研究中與癥狀緩解組相比，輕度、中度和重度活動組血清IgA和IgG變化不明顯，而中度和重度活動組IgM變化顯著。Spearman相關分析發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道菌群失調(diào)的程度與疾病的嚴重程度呈正相關。所以，檢測腸道菌群失調(diào)的程度對于判斷疾病的進展程度有一定的參考價值，同時結(jié)合糞便球桿比和免疫球蛋白水平也可以判斷疾病的恢復情況。

人體腸道中存在大量的腸道菌群，這些細菌在生活過程中產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物，是腸道抗原的主要來源，經(jīng)腸道黏膜免疫后，產(chǎn)生的主要抗體為IgA。Frehn等[4]也證實UC患者糞便中大腸桿菌特異性抗體IgA下降。李健在對潰瘍性結(jié)腸炎患者的研究中也發(fā)現(xiàn)，活動期UC組的乳酸桿菌、雙歧桿菌以及消化球菌都明顯低于健康組和緩解組。徐曉玲等[5-6]對潰瘍性結(jié)腸炎患者的研究中也發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道內(nèi)有益菌如乳酸桿菌、雙歧桿菌等菌群數(shù)量明顯降低，而大腸桿菌、腸球菌等有害菌數(shù)量增多。在本研究中也發(fā)現(xiàn)，隨著UC患者疾病嚴重程度的增加，腸道菌群失調(diào)更加嚴重，這與李健和徐曉玲等[5-6]的研究結(jié)果一致。而隨著腸道菌群失調(diào)的加重，血清免疫球蛋白IgM和IgA都有下降的趨勢，這與Frehn等的研究結(jié)果一致，說明隨著病情的加重，患者免疫力逐漸降低。本研究通過對免疫球蛋白水平和糞便球桿比相結(jié)合的研究，證實腸道菌群失調(diào)和體液免疫的相關性，為臨床疾病的診斷和治療提供切實的參考依據(jù)。

綜上，在潰瘍性結(jié)腸炎的臨床診斷上，可將糞便球桿比和免疫球蛋白水平變化作為判斷疾病嚴重程度的參考指標，也可作為疾病預后的評價指標。